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科研学霸天团，48小时有问必答

问慢病毒转染应该怎么准备？

是TTT

转染293细胞的话，准备好包装质粒，慢病毒质粒，转染试剂，按转染试剂说明书包装就行，48h收取病毒液离心，0.45um过滤头过滤，使用前加病毒增强剂。

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问Coip input和ip组蛋白条带位置不一样是怎么回事？

土井挞克树

1、coip后蛋白条带会迁移是因为在高温的情况下蛋白质之间把对方分开而迁移。2、也可能是因为两个蛋白质有相互作用力。

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问一抗选用tst3二抗选用那种抗体比较好呢？蛋白提取的是小鼠皮肤组织。

loveliufudan

建议使用兔源抗小鼠的二抗。兔源抗小鼠的二抗通常具有良好的特异性和亲和力，可以与一抗（tst3）较好地结合，并且可以被常见的检测方法如Western blot、ELISA等所检测到。此外，如果需要使用荧光标记的二抗，可以选择荧光标记的兔源抗小鼠二抗。如果需要使用酶标记的二抗，可以选择较常用的HRP（辣根过氧化物酶）标记的兔源抗小鼠二抗。需要注意的是，对于二抗的选择，最好选择与一抗不同源的抗体，以避免

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问WB曝光后请问为什么会出现这种黑色条带（右边两组和该组样品为同种）

sswei

膜上其他部位与一抗或者二抗非特异性结合。

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问蛋白质的量与分子量

balalaLy

蛋白质定量是看里面的蛋白含量，单位是ng/ul，蛋白分子量是指某一种蛋白分子质量

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问请问WB检测细胞衰老，检测H2AX蛋白必须得用γH2AX抗体吗，H2AX抗体能出结果吗

loveliufudan

H2AX是一种组蛋白H2A的变异体，其在DNA损伤修复中扮演重要角色，而VH2AX是H2AX的磷酸化形式。在WB检测H2AX蛋白时，若只是想检测其总量，使用H2AX抗体即可；而如果想检测其磷酸化形式，则需要使用VH2AX抗体。在检测细胞衰老时，H2AX和VH2AX的检测均有可能用于该领域研究，具体使用哪种抗体需要考虑研究目的和实验条件。需要注意的是，H2AX磷酸化水平的检测通常是用于检测DNA双链

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问WB活细胞样品放置过长有影响吗？

z流沙z

如果细胞有加培养基、pbs或者裂解液，全程都保持在冰上应该还行

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问炎症刺激模型，，，，

z流沙z

可以的，LPS刺激就可以激活诱导产生

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问western blot 可以同时加两种同种属的一抗

z流沙z

一般来说应该按不同蛋白分子量大小裁膜，孵育不同抗体，或者蛋白大小比较接近就先孵一个抗体，显影完成后再用一抗去除液洗掉孵另外一个抗体。不建议两个抗体同时加到一起。

3 回答4423 围观

问Gelma水凝胶合成

sswei

注意事项：1、配制溶液时务必避免强光、阳光直射，勿暴露于日光灯照射下超过5分钟。2、配制完的GelMA请尽快使用，配好的溶液可在-20℃避光条件下储存1周。在低于21℃的环境中，GelMA溶液会冷凝成固态，属正常现象，加热即可恢复液态。（光交联不可逆）3、配制溶液浓度可在5%-30%(w/v)范围内，低于5%可能无法固化，无特殊用途一般不高于30%。推荐使用10%浓度。

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问组织iNOS蛋白wb

z流沙z

我跑过差不多大小的，8%的胶，80v 40min+130v 60min，差不多就够了，然后转膜200mA 2h也够了，建议牛奶封闭1-2h。另外建议跑不出来的时候，极限增加上样量，一个是样品浓度要高，一个是增加上样，可以上40-50ul

4 回答2210 围观

问transwell小室回收

土井挞克树

二次利用的话还是需要再次铺基质胶的。

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问重组蛋白表达正常，ELisa检测时阴阳性区分不开是什么原因？

sswei

可能存在PH值选择不当，封闭时其它蛋白的干扰等原因。

3 回答497 围观

问如何使用机器学习和其他计算技术来预测磷酸化事件对特定蛋白质功能的影响，并与实验验证相比较，这些预测有多准确？

土井挞克树

可以通过机器学习预测磷酸化位点，然后用实验验证磷酸化通路

1 回答206 围观

问各位大佬，我这个蛋白不压缩是怎么回事啊，一大坨下来了，marker也能散开点，电压是80v,胶凝固的时间按说明书上来的

balalaLy

marker没问题，胶没问题，所以应该是loading buffer的问题，有些loading里面含有的巯基乙醇量少或者没有就会压缩不好

3 回答574 围观

问预测模型系统评价求助

土井挞克树

预测模型是横断面研究的话一般侧重于实验组和对照组的现状调查，一般不做时间研究

2 回答392 围观

问WB实验总有几个泳道跑不出来条带

juyue2010

内参蛋白分子量小，要不是跑胶跑出去了，要不是转膜转过了

4 回答1000 围观

问BMDM诱导M2极化

土井挞克树

可以先用胰酶消化，然后进行诱导。

2 回答1425 围观

问内质网膜蛋白怎么提取

balalaLy

有专门的试剂盒的，按照试剂盒的步骤做

2 回答1232 围观

问P38激酶有哪几种？研究通路设计p38激酶，请问有哪几种？

Topmicro

P38是一种蛋白激酶，属于MAPK家族。在哺乳动物细胞中，P38激酶有四种不同的亚型：P38α、P38β、P38γ和P38δ。这些不同的亚型在结构上略有不同，并且它们的表达模式和功能也存在差异。其中，P38α和P38β广泛表达于大多数组织中，而P38γ和P38δ则主要表达于免疫相关组织中，例如淋巴细胞和骨髓细胞等。这些亚型主要通过对底物的磷酸化来调节多种生物学过程，例如起搏者活动、细胞增殖、凋亡、

3 回答561 围观

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