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问
实验设计需要将大肠杆菌基因组通过机械破碎(超声破碎)获得破碎的基因小片段,该如何设计
是TTT
1.大肠杆菌扩增:取30ml LB液接种大肠杆菌,37℃ 220rpm摇至OD600在0.6左右,4℃离心取菌体沉淀2.超声破碎:沉淀用4℃预冷的PBS洗涤两次以后,冰上超声破碎菌体沉淀3.提取菌体DNA:按试剂盒说明书操作4.DNA凝胶电泳:分出DNA不同的片段,在紫外灯下将需要基因片段的位置切割下来5.DNA凝胶回收纯化:按试剂盒说明书操作
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问
wb检测细菌提取的蛋白,成像时maker显色了,可能哪里出问题了呢?
sswei
绝大多是因为和2抗交叉反应导致形成的。
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问
请问流式检测细胞凋亡,统计分析是算的早期凋亡还是总的凋亡率?
loveliufudan
流式细胞仪常用来检测细胞凋亡,其中常用的方法是Annexin V和PI(丙啶碘)双染色。根据细胞凋亡的早晚阶段,细胞可以被分为三类:1. 正常活细胞:Annexin V阴性,PI阴性2. 早期凋亡细胞:Annexin V阳性,PI阴性3. 晚期凋亡细胞或坏死细胞:Annexin V阳性,PI阳性因此,当你在做统计分析的时候,你可以选择计算早期凋亡率(仅计算Annexin V阳性,PI阴性的细胞比例
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问
请问稀释抗体是要用PBS缓冲液嘛
dxyc42u
对的,计算的没错,我平时也是这样稀释的
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问
想问问,孵整膜是一个目的蛋白和maker在一张膜上的意思,还是所有目的蛋白和maker在一张膜上
dxyc42u
目的蛋白和mark在一张膜上。
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问
meta求助
土井挞克树
在Excel,只要根据自己需要的换算类型,选择相应的sheet。所有换算过程,只需在绿色区域输入已知参数,即可在红色区域得到目标值,用EXCEL或者R软件函数求
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问
蛋白纯化
土井挞克树
可能是形成聚合体了,所以跑出来的蛋白比较大
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问
实验抑制剂求助
土井挞克树
考虑是蛋白间存在相互作用,建议增加对照组。
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凝集素印迹
土井挞克树
要有特定通道的扫膜仪才可以扫,一般都是荧光扫膜仪
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问
Zdock蛋白蛋白对接pdb错误
土井挞克树
需要另外安装一个PDB文件的读取程序才能够对接
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问
如何确定一个基因好不好跑wb
dxyc42u
跟拷贝数有关的,太低的话检测难度大
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问
CGMP
土井挞克树
CGMP也可以做pcr和wb的。
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问
中和ELISA检测样本量的问题
sswei
一般来讲,96T能检测90个样本,48T能检测42个样本,这里面需要用标样来做标准曲线。5个标准曲线和1个空白孔!当然为了提高实验结果的准确性,还是推荐选择做双标曲,这样,96T能检测85个样本,96-(undefined2+1)=85,同理,48T能检测37个样本。
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问
如何确定WB蛋白的上样量
Luckybabygirl
20微克差不多了,如果太浓了,你的上样量太少容易飘
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问
求助RAW264.7诱导M2的问题
土井挞克树
可以2.5ng/ml IFN-γ+200ng/ml LPS 共同作用12h
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问
求助棕榈酸溶解问题
xb00071425
有个小问题,棕榈酸溶解加氢氧化钠,那很可能会变成棕榈酸钠?还不如直接溶解棕榈酸钠?
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问
求助THP1用PMA诱导M0
dxyc42u
跟诱导前细胞状态有很大关系,建议用状态好的细胞诱导
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问
怎样检测受体活性
loveliufudan
确定受体活性的最优剂量通常需要进行一系列实验和测定。以下是一些常见的方法和实验设计,可用于评估受体活性并确定最佳剂量:1. 结合测定法(Binding Assays): - 结合测定法可用于评估受体与其配体之间的亲和力和结合能力。常用的方法包括放射性配体结合测定(Radioligand Binding Assay)和荧光标记配体结合测定(Fluorescence-labeled Ligand
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问
求助,如何向小鼠血管壁注射药物
土井挞克树
可以使用微量注射器向血管壁注射药物
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问
WB条带模糊,这是啥原因呀
dxyc42u
可以增加一下曝光时间试一试吧。
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