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科研学霸天团,48小时有问必答
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问
小分子蛋白电泳跑不出来
dxyc42u
电压到没啥问题,可以继续延长时间,比如过夜转膜
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问
这个WB图怎么看,CASP和cCASP结果为什么不一样
dxyc42u
应该是抗体的原因,排查下抗体有没有问题
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问
为什么coip中ip组对照组和处理组与input组蛋白结果相反?
dxyc42u
确认实验操作没啥问题的话,很有可能是把样本搞混了
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问
PCR产物后电泳孔里有很亮的条带是什么原因
loveliufudan
当在PCR产物经过琼脂糖凝胶电泳后,在孔口处出现很亮的条带,可能是由于以下原因之一: 1. 异源污染:很亮的条带可能是由于PCR反应体系中的异源DNA污染引起的。这可能来自其他PCR产物、外源DNA、引物、试剂或实验室环境中的DNA。在PCR实验中,特别是在DNA扩增前和反应制备中,严格的无菌操作至关重要,以减少异源污染的可能性。 2. 异常扩增产物:很亮的条带可能是由于非特异性扩增或其他PCR异
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问
蛋白质溶液中加入丙酮来沉淀蛋白会导致蛋白质变性吗
dxyc42u
一般来说是会导致一些蛋白变性的
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问
跑wb制胶,为什么下层胶老是有气泡,灌了胶压了胶5分钟都没有,为什么5分钟之后下层就会有气泡
balalaLy
如果是最底下有气泡是没有影响的,如果是中间有气泡可能是玻璃板没有洗干净,灌完胶可以轻轻敲一下玻璃板,使气泡往上跑。
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问
Western Blot、P21
是TTT
如果一起转膜的条件下只有p21跑不出来,可以考虑换一个细胞系试一试;如果还是不行很可能是一抗不行
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问
实验设计需要将大肠杆菌基因组通过机械破碎(超声破碎)获得破碎的基因小片段,该如何设计
是TTT
1.大肠杆菌扩增:取30ml LB液接种大肠杆菌,37℃ 220rpm摇至OD600在0.6左右,4℃离心取菌体沉淀2.超声破碎:沉淀用4℃预冷的PBS洗涤两次以后,冰上超声破碎菌体沉淀3.提取菌体DNA:按试剂盒说明书操作4.DNA凝胶电泳:分出DNA不同的片段,在紫外灯下将需要基因片段的位置切割下来5.DNA凝胶回收纯化:按试剂盒说明书操作
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问
wb检测细菌提取的蛋白,成像时maker显色了,可能哪里出问题了呢?
sswei
绝大多是因为和2抗交叉反应导致形成的。
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问
请问流式检测细胞凋亡,统计分析是算的早期凋亡还是总的凋亡率?
loveliufudan
流式细胞仪常用来检测细胞凋亡,其中常用的方法是Annexin V和PI(丙啶碘)双染色。根据细胞凋亡的早晚阶段,细胞可以被分为三类:1. 正常活细胞:Annexin V阴性,PI阴性2. 早期凋亡细胞:Annexin V阳性,PI阴性3. 晚期凋亡细胞或坏死细胞:Annexin V阳性,PI阳性因此,当你在做统计分析的时候,你可以选择计算早期凋亡率(仅计算Annexin V阳性,PI阴性的细胞比例
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问
请问稀释抗体是要用PBS缓冲液嘛
dxyc42u
对的,计算的没错,我平时也是这样稀释的
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问
想问问,孵整膜是一个目的蛋白和maker在一张膜上的意思,还是所有目的蛋白和maker在一张膜上
dxyc42u
目的蛋白和mark在一张膜上。
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问
meta求助
土井挞克树
在Excel,只要根据自己需要的换算类型,选择相应的sheet。所有换算过程,只需在绿色区域输入已知参数,即可在红色区域得到目标值,用EXCEL或者R软件函数求
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问
蛋白纯化
土井挞克树
可能是形成聚合体了,所以跑出来的蛋白比较大
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问
实验抑制剂求助
土井挞克树
考虑是蛋白间存在相互作用,建议增加对照组。
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问
凝集素印迹
土井挞克树
要有特定通道的扫膜仪才可以扫,一般都是荧光扫膜仪
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问
Zdock蛋白蛋白对接pdb错误
土井挞克树
需要另外安装一个PDB文件的读取程序才能够对接
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问
如何确定一个基因好不好跑wb
dxyc42u
跟拷贝数有关的,太低的话检测难度大
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问
CGMP
土井挞克树
CGMP也可以做pcr和wb的。
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问
中和ELISA检测样本量的问题
sswei
一般来讲,96T能检测90个样本,48T能检测42个样本,这里面需要用标样来做标准曲线。5个标准曲线和1个空白孔!当然为了提高实验结果的准确性,还是推荐选择做双标曲,这样,96T能检测85个样本,96-(undefined2+1)=85,同理,48T能检测37个样本。
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