实验问答21,965,833 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问分子量54kda的蛋白，隐隐的那条是不是啊？marker从上到下是70，55，40，是一抗失效了吗？内参是清晰的

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问谁跑过mmp2和mmp9吗哪家抗体好用🥹跪求

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问关于辣根过氧化物酶标记生物素的方法？

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问有没有收集小鼠体内旋毛虫成虫的方法？

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问请问检测ELISA需要除以BCA蛋白浓度以标化吗

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问求助，小肠蛋白应该怎么提取？想检测小肠zo1表达水平，应该取小肠哪一部分合适？

百泰派克-李工

一、蛋白质提取1、样品制备将选定的小肠部分从实验动物中切除，并立即放入冷的生理盐水中以清洗掉残留的内容物。2.组织均质化3.离心将均质物通过离心分离，以去除未破碎的细胞和组织碎片。通常在4°C下高速离心约10-15分钟。4.蛋白质浓缩和纯化收集含有蛋白质的上清液。此时，可以使用盐沉淀、透析或蛋白质纯化柱等方法进一步纯化和浓缩蛋白质。将提取的蛋白质在适当的条件下存储，如-80°C冰箱中，以防止蛋白质

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问测糖基化接枝度用的OPA 试剂是自己配的还是买的啊？

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问qPCR检测TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10 mRNA，需要WB检测验证吗，我只用WB检测了IκBα、p-IκBα

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问核转录因子的调控机制

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问两个蛋白有互作，加到缓冲液里共同孵育，缓冲液：蛋白1：蛋白2的体积配比应该是多少

百泰派克-李工

两个蛋白质进行相互作用实验时，缓冲液与蛋白质的体积比通常取决于需考虑多个因素，包括蛋白质的浓度、活性、相互作用的类型和强度，以及实验的特定目的。没有统一的“一刀切”配比。一、配比的选择：一个常见的起点是使用等摩尔的蛋白质，即蛋白1和蛋白2的摩尔浓度相同。例如，如果两个蛋白质的分子量相似，可以尝试按体积1:1混合。然而，根据两蛋白之间的互作类型和亲和力，可能需要调整这个比例。对于低亲和力的互作，可能

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问SDS-PAGE电泳marker背景相比于样品背景更加透明，脱色脱的更干净是什么原因

百泰派克-李工

SDS-PAGE电泳中marker（标记物）背景比样品背景更透明、脱色更干净主要是由于：1.蛋白浓度差异：Marker通常是纯化的蛋白，浓度较低，而样品中的蛋白可能浓度较高。高浓度蛋白在电泳后更难脱色。2.样品的其他成分：样品中除了蛋白质外，还可能含有影响染色和脱色的其他成分，如脂质、核酸或其他小分子，这些成分可能会影响染料的吸附和释放。3.蛋白质组成差异：样品中可能含有一些与染料有较强亲和力的蛋

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问利用碳二亚胺法在有机磷-BSA上修饰长余晖粒子需要注意什么

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问蛋白质检测实验将称量纸一起做会不会影响结果

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问求助:可以直接从菌液上清提取蛋白质作用于细胞吗？

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问为什么我跑出来的条带背景都黢黑黢黑的啊？有没有啥解决办法呀？

皮皮闲husky

可以试一下将二抗孵育时间缩短一点，封闭时间长一点，洗干净

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问蛋白质组学里面检索数据库要怎么选择？

百泰派克-李工

蛋白质组学研究中选择合适的蛋白质数据库是关键一步，因为它直接影响到质谱数据的解析和鉴定的准确性。一些常用的蛋白质数据库及其适用情形如下：1.UniProt (Universal Protein Resource)：这是最全面的蛋白质数据库之一，包含了大量物种的蛋白质序列信息。适用于多种物种的蛋白质组研究，特别是那些已经有较完善基因组注释的物种。2.NCBI RefSeq (Reference Se

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问用his标签蛋白免疫小鼠，用Gst标签的蛋白检测血清效价，血清100倍稀释时OD值1.9左右，还不到2，有点低怎么办

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问有没有大佬解答一下为什么沉默组的目的基因表达会比对照组更高啊 pcr跑出来呈现的是对照组低于沉默组沉默组低于空载组

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问wb蛋白鉴别实验凝胶脱色后 marker泳道相比于样品泳道背景更透明

百泰派克-李工

在Western Blot (WB) 蛋白鉴别实验中，凝胶脱色后发现marker泳道相比于样品泳道背景更透明，是实验过程中常见的现象，通常是由几个因素造成的：1.蛋白质浓度差异：样品中的蛋白质浓度可能远高于marker。在染色和脱色过程中，高浓度的蛋白质可能导致更强的染色，相应地，在脱色时也更难以完全去除染料。2.蛋白质组成差异：样品中的蛋白质可能与染料有更强的亲和力，或者样品中含有某些染料难以去

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问BSA和BSA fraction有什么区别啊？怎么选择呢？

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