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        求助,小肠蛋白应该怎么提取?想检测小肠zo1表达水平,应该取小肠哪一部分合适?

        相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

        user-title

        dxy_hjsavfow

        我现在提取小肠蛋白的操作:取靠近盲肠端处的肠组织,简单冲洗,加含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RAPI裂解液,低温研磨组织,翻转提取蛋白60min,再4度12000g离心15min,取上清加loading buffer 99度蛋白变性10min.

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        1 个回答

        user-title

        百泰派克-李工

        有帮助

        一、蛋白质提取

        1、样品制备

        将选定的小肠部分从实验动物中切除,并立即放入冷的生理盐水中以清洗掉残留的内容物。

        2.组织均质化

        3.离心

        将均质物通过离心分离,以去除未破碎的细胞和组织碎片。通常在4°C下高速离心约10-15分钟。

        4.蛋白质浓缩和纯化

        收集含有蛋白质的上清液。此时,可以使用盐沉淀、透析或蛋白质纯化柱等方法进一步纯化和浓缩蛋白质。

        将提取的蛋白质在适当的条件下存储,如-80°C冰箱中,以防止蛋白质降解。

        二、小肠样品截取

        一般来说,小肠由十二指肠、空肠和回肠组成。ZO-1蛋白在整个小肠上皮细胞中均有表达,但其表达水平可能在不同部位有所不同。为了特定的实验目的,建议选择空肠部分,因为空肠是吸收营养和水分的主要部位,上皮细胞结构和功能保持较为一致。


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