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实验问答23,366,111 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

全部

细胞

免疫

蛋白质

问纸基传感，t线不显色或者显色很浅，但是做斑点金实验是可以的，请问这是什么原因呢

203 围观

问WB实验怎么安排样本顺序？

百泰派克-李工

在Western Blot (WB) 实验中安排样本顺序时，主要考虑以下几点：1、对照样本：将正对照（表达目标蛋白的样本）和负对照（不表达目标蛋白的样本）放在实验的开始和结束位置，以便于结果的比较和确认。2、重复样本：如果实验中包括重复样本，应将重复样本并排放置，以便于结果的比较和分析。3、内参蛋白：确保每组样本中都包含内参蛋白（如GAPDH或β-actin）的检测，以用于加载量的标准化。安排样本

1 回答1965 围观

问蛋白用pbs超滤去除咪唑，发现蛋白量明显变少

184 围观

问WB实验趋势不一致怎么办？

百泰派克-李工

Western Blot（WB）实验中趋势不一致通常指的是重复实验之间结果差异较大。应对这一问题时，主要策略是仔细检查实验的各个步骤，以确保一致性和准确性。具体措施包括：1、样品制备：确保样品的蛋白质浓度一致。使用蛋白酶抑制剂以防止蛋白质降解。确保样品在实验过程中的处理方式一致。2、电泳条件：确保凝胶的制备和电泳条件一致（如电压、时间）。3、蛋白质加载量：确保每次实验加载到凝胶中的蛋白量相同。4、

1 回答1230 围观

问在高效液相实验中测样品时，用50%的甲醇溶解样品跟用100%的甲醇溶解样品时再上液相测量的话，测量结果有啥不一样嘛？

百泰派克-李工

在高效液相色谱（HPLC）实验中，使用不同浓度的溶剂（如50%的甲醇和100%的甲醇）溶解样品，可能会对测量结果产生以下影响：1、溶解性：不同浓度的甲醇可能会影响样品的溶解度。如果样品在50%的甲醇中溶解性不好，可能会导致样品部分沉淀，这样在高效液相色谱中就无法完全检测到所有的组分。2、峰形和分辨率：溶剂的浓度会影响色谱峰的形状和分辨率。使用不同浓度的甲醇可能会导致色谱峰变宽或变尖，峰形的改变可能

1 回答650 围观

问请问WB实验封闭时转速被误调为130r，对结果会有影响吗

百泰派克-李工

在Western Blot实验中，如果封闭（阻塞）步骤的转速被误设为130 rpm，一般情况下对实验结果的影响不大。封闭步骤的主要目的是阻止非特异性抗体结合，而这一过程主要取决于阻塞剂的类型和浓度，以及封闭时间的长度。转速的调整主要是为了确保阻塞剂在膜上均匀分布，避免出现干斑或未覆盖区域。通常情况下，轻微的转速变化不太可能显著影响阻塞效果。不过，如果转速过高可能导致膜的破损或失去样品，而转速过低可

2 回答492 围观

问高糖内皮细胞成管实验

415 围观

问wb大佬帮我看看，我这膜怎么这样？

207 围观

问求助，为什么p-mtor跑出来会有两条呀

298 围观

问国内有无兔源一抗，单克隆抗体，测皮肤IL-17A蛋白的抗体厂家

233 围观

问为什么用Alix蛋白抗体，实验WB上样细胞裂解液会显示两个条带？哪个为准？

百泰派克-李工

使用Alix蛋白抗体在Western Blot（WB）实验中出现两个条带可能有以下原因：1、蛋白质同源异构体：Alix蛋白可能存在不同的同源异构体，这些异构体在分子量上略有不同，从而在凝胶上表现为不同的条带。2、蛋白质降解产物：如果Alix蛋白在细胞裂解过程中部分降解，这可能导致生成较小的降解片段，这些片段也会被同一抗体识别并在WB上显示为较低分子量的条带。3、磷酸化或其他蛋白质修饰：蛋白质可能因

1 回答617 围观

问转膜marker颜色很浅且感觉条带飞了是为什么

百泰派克-李工

WB转膜出现以上情况可能是由下面几个因素造成的：1.膜转移效率不足：如果膜转移效率不高，可能会导致marker颜色浅。这可能是由于电转膜的电压或时间设置不当，或者使用的膜与蛋白质的亲和力不足。2.样品过载或电泳条件不当：如果样品加载过多或电泳条件不适宜（如电压过高或运行时间过长），可能导致蛋白质条带在凝胶中迁移不均匀，导致转膜后条带模糊或“飞了”。3.膜处理不当：在转膜过程中，膜的处理也非常重要。

1 回答630 围观

问胶体金纸基传感，t线不显色，把pbs换成糖水，显色了，但是会晕，缓冲液尝试了peg20000，bsa，甲醇，吐温20都没有固色

300 围观

问GAPDH电泳出来是这样的，电压120v跑全程，用的快速电泳液（说明书是电压200v），用的8%的胶

305 围观

问WB蛋白块，每个颜色都是两边深中间浅请问是啥原因？

百泰派克-李工

在Western Blot (WB) 分析中，如果出现蛋白带两边深中间浅的现象，最可能的原因是样品过载。当在凝胶槽中加载的蛋白质量超过了其分离能力时，蛋白质在电泳过程中可能无法均匀迁移，尤其是在凝胶的中心部位。这会导致蛋白在边缘处迁移得更快或更远，造成带的中间部分相对较浅。为了解决这个问题，可以尝试减少加载到凝胶中的蛋白量，确保蛋白浓度和体积适宜，以便获得更均匀的带。同时，也建议检查电泳和转膜步骤

1 回答939 围观

问为什么溴芬兰这样了不理解

260 围观

问BL21表达蛋白时，越用表达量越小，重新转化也失败了，求助怎么解决

303 围观

问磷酸化蛋白质组在过柱富集分析等步骤后，怎么确定蛋白的磷酸化位点的？

百泰派克-李工

质谱技术是确定蛋白磷酸化位点的重要工具，在磷酸化蛋白质过柱富集分析后，接下来的实验流程如下：1、蛋白质消化将富集的磷酸化蛋白质用特定的蛋白酶（如胰蛋白酶）消化成较小的肽段。2、磷酸化肽段富集使用特定的亲和层析技术（如IMAC或TiO2）来富集磷酸化的肽段。这些富集方法能够特异性地结合磷酸化肽段，从而使其从非磷酸化肽段中分离出来。3、质谱分析将富集得到的磷酸化肽段进行质谱分析，最常见的是使用液相色谱

1 回答417 围观

问在elisa中，若一抗带有his标签，那包被的抗原是不是就不能带his标签了？

104 围观

问sds凝胶电泳上样时样品向上浮是什么原因啊？buffer和电泳液的浓度是配套的嘛

百泰派克-李工

SDS-PAGE（SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳）中样品向上浮的现象通常是由于以下原因造成的：1、样品准备问题：如果样品中含有大量的油脂或是有机溶剂，这些物质的密度可能低于水，导致样品在凝胶中上浮。确保样品在加入上样缓冲液后充分混合和加热，以保证蛋白质充分变性并与SDS结合。2、上样技术问题：在上样时，如果针头没有插入到凝胶的上样孔中，或者上样速度过快，可能会导致样品漂出上样孔。应缓慢、小心地将样品注

2 回答836 围观

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