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科研学霸天团，48小时有问必答

问人血清中能测量出胆绿素还原酶A浓度吗

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问酵母在少量腺嘌呤的培养基上培养会变红

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问WB跑出来的条带一片空白，白的发光，是什么原因呢

百泰派克-李工

Western Blot（WB）实验中出现的条带空白且发光（通常指在成像时出现过曝光的现象）可能由以下原因造成：1、样品蛋白浓度过高：如果加载的样品蛋白浓度过高，可能导致信号过强，造成条带处发光。解决方法是稀释样品，减少加载量。2、一抗或二抗浓度过高：抗体浓度过高会导致非特异性结合，增强背景信号。应调整抗体的稀释比例。3、曝光时间过长：如果成像时曝光时间过长，可能会导致图像过曝，呈现白色发光。调整

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问elisa上清液实验需要几个点呢

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问纸基传感，t线不显色或者显色很浅，但是做斑点金实验是可以的，请问这是什么原因呢

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问WB实验怎么安排样本顺序？

百泰派克-李工

在Western Blot (WB) 实验中安排样本顺序时，主要考虑以下几点：1、对照样本：将正对照（表达目标蛋白的样本）和负对照（不表达目标蛋白的样本）放在实验的开始和结束位置，以便于结果的比较和确认。2、重复样本：如果实验中包括重复样本，应将重复样本并排放置，以便于结果的比较和分析。3、内参蛋白：确保每组样本中都包含内参蛋白（如GAPDH或β-actin）的检测，以用于加载量的标准化。安排样本

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问蛋白用pbs超滤去除咪唑，发现蛋白量明显变少

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问WB实验趋势不一致怎么办？

百泰派克-李工

Western Blot（WB）实验中趋势不一致通常指的是重复实验之间结果差异较大。应对这一问题时，主要策略是仔细检查实验的各个步骤，以确保一致性和准确性。具体措施包括：1、样品制备：确保样品的蛋白质浓度一致。使用蛋白酶抑制剂以防止蛋白质降解。确保样品在实验过程中的处理方式一致。2、电泳条件：确保凝胶的制备和电泳条件一致（如电压、时间）。3、蛋白质加载量：确保每次实验加载到凝胶中的蛋白量相同。4、

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问在高效液相实验中测样品时，用50%的甲醇溶解样品跟用100%的甲醇溶解样品时再上液相测量的话，测量结果有啥不一样嘛？

百泰派克-李工

在高效液相色谱（HPLC）实验中，使用不同浓度的溶剂（如50%的甲醇和100%的甲醇）溶解样品，可能会对测量结果产生以下影响：1、溶解性：不同浓度的甲醇可能会影响样品的溶解度。如果样品在50%的甲醇中溶解性不好，可能会导致样品部分沉淀，这样在高效液相色谱中就无法完全检测到所有的组分。2、峰形和分辨率：溶剂的浓度会影响色谱峰的形状和分辨率。使用不同浓度的甲醇可能会导致色谱峰变宽或变尖，峰形的改变可能

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问请问WB实验封闭时转速被误调为130r，对结果会有影响吗

百泰派克-李工

在Western Blot实验中，如果封闭（阻塞）步骤的转速被误设为130 rpm，一般情况下对实验结果的影响不大。封闭步骤的主要目的是阻止非特异性抗体结合，而这一过程主要取决于阻塞剂的类型和浓度，以及封闭时间的长度。转速的调整主要是为了确保阻塞剂在膜上均匀分布，避免出现干斑或未覆盖区域。通常情况下，轻微的转速变化不太可能显著影响阻塞效果。不过，如果转速过高可能导致膜的破损或失去样品，而转速过低可

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问高糖内皮细胞成管实验

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问wb大佬帮我看看，我这膜怎么这样？

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问求助，为什么p-mtor跑出来会有两条呀

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问国内有无兔源一抗，单克隆抗体，测皮肤IL-17A蛋白的抗体厂家

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问为什么用Alix蛋白抗体，实验WB上样细胞裂解液会显示两个条带？哪个为准？

百泰派克-李工

使用Alix蛋白抗体在Western Blot（WB）实验中出现两个条带可能有以下原因：1、蛋白质同源异构体：Alix蛋白可能存在不同的同源异构体，这些异构体在分子量上略有不同，从而在凝胶上表现为不同的条带。2、蛋白质降解产物：如果Alix蛋白在细胞裂解过程中部分降解，这可能导致生成较小的降解片段，这些片段也会被同一抗体识别并在WB上显示为较低分子量的条带。3、磷酸化或其他蛋白质修饰：蛋白质可能因

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问转膜marker颜色很浅且感觉条带飞了是为什么

百泰派克-李工

WB转膜出现以上情况可能是由下面几个因素造成的：1.膜转移效率不足：如果膜转移效率不高，可能会导致marker颜色浅。这可能是由于电转膜的电压或时间设置不当，或者使用的膜与蛋白质的亲和力不足。2.样品过载或电泳条件不当：如果样品加载过多或电泳条件不适宜（如电压过高或运行时间过长），可能导致蛋白质条带在凝胶中迁移不均匀，导致转膜后条带模糊或“飞了”。3.膜处理不当：在转膜过程中，膜的处理也非常重要。

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问胶体金纸基传感，t线不显色，把pbs换成糖水，显色了，但是会晕，缓冲液尝试了peg20000，bsa，甲醇，吐温20都没有固色

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问GAPDH电泳出来是这样的，电压120v跑全程，用的快速电泳液（说明书是电压200v），用的8%的胶

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问WB蛋白块，每个颜色都是两边深中间浅请问是啥原因？

百泰派克-李工

在Western Blot (WB) 分析中，如果出现蛋白带两边深中间浅的现象，最可能的原因是样品过载。当在凝胶槽中加载的蛋白质量超过了其分离能力时，蛋白质在电泳过程中可能无法均匀迁移，尤其是在凝胶的中心部位。这会导致蛋白在边缘处迁移得更快或更远，造成带的中间部分相对较浅。为了解决这个问题，可以尝试减少加载到凝胶中的蛋白量，确保蛋白浓度和体积适宜，以便获得更均匀的带。同时，也建议检查电泳和转膜步骤

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问为什么溴芬兰这样了不理解

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