百泰派克-李工
Western Blot(WB)实验中出现的条带空白且发光(通常指在成像时出现过曝光的现象)可能由以下原因造成:
1、样品蛋白浓度过高:
如果加载的样品蛋白浓度过高,可能导致信号过强,造成条带处发光。解决方法是稀释样品,减少加载量。
2、一抗或二抗浓度过高:
抗体浓度过高会导致非特异性结合,增强背景信号。应调整抗体的稀释比例。
3、曝光时间过长:
如果成像时曝光时间过长,可能会导致图像过曝,呈现白色发光。调整曝光时间,避免过度曝光。
4、阻断不充分:
如果阻断步骤不充分,可能导致抗体在膜上非特异性结合,增强背景。确保充分并正确地进行阻断步骤。
5、膜的处理问题:
膜的处理不当(如过度洗涤或干燥)也可能导致条带发光。确保遵循正确的膜处理步骤。
通常,通过控制样本的加载量、抗体的稀释比例以及成像的曝光时间,可以有效避免此类问题的发生。
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