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问
为啥我做的胶有这个东西,是玻璃漏胶吗?
Miracle星
1)每次电泳完后,洗净玻璃、胶条和其它附件,下次用之前,用75%酒精擦拭玻璃和胶条,能有效防漏,且利于剥胶。 2)避免玻璃边缘(与胶条接触处)破损很重要,尤其是下面和胶条接触的地方 3)关键是找一块很平的桌面,使两块玻璃底面非常齐就行了 4)胶条一定要干,跑完电泳后,胶条就放在实验台上晾着。 5)下面的胶条注意不要老化,如果有裂纹的话用保鲜膜垫在上面,也可以有效防止漏胶,或者反过来用。 6)玻璃在
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问
半干转显示 no detected 是什么原因?
天一湖医者
检测金属丝,是不是洗的时候断了? 联系厂家工程师咨询是最专业且最快的方式。
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问
WB做的表面蛋白,总是有两条条带
Miracle星
估计跟常温放置有关系,要是多余的那个条带比你的目的蛋白条带小的话,那么可能就是目的蛋白降解了,你可以重新电转再杂交试试。电转后的膜最好要4℃保存。而且,你也可以查查目的蛋白的相关资料,看这个蛋白是不是有不同的多聚体形式,也有可能是这种情况导致的。
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问
WB跑完用丽春红染色什么都没有?
喵喵喵柏
你在跑之前有没有定量测浓度呢?跑的时候看到了溴酚蓝的颜色不代表真的有蛋白
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问
做蛋白与蛋白免疫共沉淀时,前提必须得是使用高表达目的蛋白和诱饵蛋白的细胞株嘛?
Miracle星
免疫共沉淀既可以用于检验已知的两个蛋白质在体内的相互作用,也可以找出未知的蛋白质相互作用,不管是两者的哪个,其原则都是一样的,都需要用特异性的抗体与其中的一种蛋白质结合,之后通过蛋白质A或蛋白质G-琼脂糖微珠将复合物沉淀下来,然后用SDS-PAGE鉴定。 免疫共沉淀中设置正确的对照非常重要,因为该方法可能出现假阳性的概率比较高,设置的对照包括:在对照组中使用对照抗体,以缺失目的蛋白的细胞系作为阴性
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问
为什么用超滤膜包过滤出来的样品浑浊
天一湖医者
过滤后滤液仍然浑浊的原因1.滤纸破裂(1)玻璃棒下端紧靠在一层滤纸处,滤纸被戳破。(2)盛混合物的烧杯没有紧靠玻璃棒,滤纸被混合物冲破。2.混合物没有经过滤纸(1)液面高于滤纸边缘,混合物直接从滤纸和漏斗的间隙直接流下。(2)仪器不干净:漏斗下端不干净;下面收集滤液的烧杯不干净。
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问
为什么用考马斯亮蓝法,空白值比样品吸光度值高
天一湖医者
出现这个情况可能是你的样品中的蛋白质含量确实很低,低过一定浓度时,结果就没有参考价值了。也有可能是考蓝工作液存放时间太久失效了,可以用一些蛋白标准品(比如BSA)来检验一下考蓝工作液是否正常。如果要用缓冲液做空白组的话,就用和蛋白样品一样的缓冲液就可以了
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问
为啥我36kd出来的不好,而15kd出来的就好很多呢
bamboopiggy
不同的抗体,杂出来的条带形状会不一样,可能你15kd的抗体好
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问
电源时有时溴酚蓝晕染特别厉害,都快超过1cm了,有时却很细,这是为什么?成分没换过。
Miracle星
我觉得是不均匀,重新配一下,换下缓冲液电泳缓冲液的问题:因为我以前跑双向的时候也遇到过此现象,后来换用新鲜的电泳缓冲液后溴酚兰就跑得成一条细细的直线了,原理不太清楚。2、分离胶内浓度不均:灌胶的时候胶要混匀,否则胶内浓度不均也会有此现象。3、分离胶凝固不均一:如玻板没洗干净,玻板在灌胶前用吹风吹干时没冷却至室温就灌胶,造成玻板内外温差等。 不知正确与否,请大家多讨论。
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问
为什么我跑出来的蛋白很圆?
天一湖医者
可能上样量没点好,PAGE胶凝的时间短。
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问
跑wb,目的蛋白是p-p65,为何40附近的那条带明显
天一湖医者
原因:一抗非特异性与蛋白结合。解决办法:更换一抗。
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问
非细胞提取物做wb如何选取内参
天一湖医者
样本的种属来源不同,内参的选择也是不一样的。哺乳动物的样本需要选择哺乳动物中稳定表达的蛋白作为内参;同样的,植物样本需要选择植物中稳定表达的蛋白做内参;
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问
WB实验中,电转时出现条带弥散是怎么回事?
天一湖医者
可能是电场不均匀,尝试换转膜设备和缓冲液。
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问
凯氏定氮法怎么去除掉非蛋白质氮?
天一湖医者
硫酸铜在碱性溶液中,可将蛋白质沉淀,且不溶于热水,过滤和洗涤后,可将纯蛋白质和非蛋白质含氮物分离,再用凯氏定氮法测定沉淀中的蛋白质含量。 二、仪器设备 (1)烧杯:200mL。 (2)定性滤纸。 (3)其它设备与粗蛋白质测定性相同。 三、试剂及配制 (1) 100g/L硫酸铜溶液:分析纯硫酸铜(CuSO4 5H2O)10g溶于100mL水中。 (2) 25g/L氢氧化钠溶液:将2.5g分析纯氢氧
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问
WB一直跑不出条带咋办
doczp1
先测一下浓度是不是太低啦?还有就是没有表达出来蛋白
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问
已知基因序列如何在NCBI上面看蛋白质大小?
天一湖医者
首先打开NCBI网站首页,然后在search一栏中选择nucleotide,在框中输入你要的基因序列名称,点击search就行。然后会出来很多结果,因为很多基因是同名的,或是一个基因在不同种属中不一样,寻找你要的基因序列就行了。注意的是,要确定你的基因名称是否是统一的,我以前就是找一个基因费了很多事,之后发现是自己没有用通用的。找到基因序列,蛋白序列就很容易了,因为结果中会显示该基因的蛋白序列。你
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问
想问下细胞状态不好具体是指什么?状态不好对wb结果有什么影响?
bamboopiggy
一般是细胞形态是否饱满,增殖速递是否正常,死细胞是不是增多。细胞的状态可能会影响你要研究的信号通路的表达
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问
电泳时为什么出现两条线,样品晕开了
bamboopiggy
如果能转膜过去,不影响显影,问题不大,我以前也遇到过,跟loading的染料有关
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问
高效液相色谱仪的光电二极管阵列检测器可以检测糖类物质吗?比如葡萄糖、蔗糖、海藻糖这些。
天一湖医者
高效液相色谱仪的光电二极管阵列检测器可以检测糖类物质。
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问
请问做co-ip孵育磁珠时总是结块是为什么?
bamboopiggy
你用手指弹开就好啊,结块,影响结合啊
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