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ARK1B1条带有时能曝出来有时曝不出来怎么办?
inventbiotech
从结果来看,是转膜的问题,优化转膜条件,但是有没有是因为蛋白样品,ARK1B1蛋白在样本中丰度如何,丰度不高建议针对蛋白所在的亚细胞结构进行分离富集,增加上样量。
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问
为什么WB蛋白的杂带很多?
dxy_lgbve3zq
两个原因,可能是蛋白降解或者抗体浓度太高,特异性不强。解决办法是尽量冰上裂解,提出蛋白以后立刻煮蛋白使蛋白变性。另外可以适当调整抗体浓度,孵育时间,抗体不好的话需要更换抗体。
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问
为什么用His的抗体 杂出了GST的条带?
小镇少年在学习
可以考虑换个his的抗体,his抗体也是识别HHHHHH,如果你目的蛋白里面有两三个连续的,然后抗体特异性又不好,也是可以识别的。
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问
YTHDF2蛋白无条带
dxy_lgbve3zq
没有条带的原因有很多。你可以先用丽春红染膜,看在对应的位置有没有你要的条带,如果有,那就是抗体的问题或者曝光操作的问题。如果没有,那可能是上样量太低,转膜不成功,蛋白降解的问题。你也可以全膜摸一下这个目的蛋白的位置,因为有时候目的蛋白的位置和说明书上的不一定完全一致。
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问
电泳的marker师姐说要加中间不能加两边,有什么原因吗?
VisionPanMMCS
最边上的胶可能均匀性不好,跑出来会歪掉
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问
原核表达了目的蛋白融合蛋白88.3kDa,样品同时跑了两块SDS-PAGE一个做了考马斯亮蓝一个做了WB,但是WB条带很怪异
小镇少年在学习
第一建议Wb再重新做一下,弄个清晰的条带,方便确定蛋白是否表达。其次80多kd蛋白已经有点稍微大了,如果不表达,建议考虑真核系统
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问
WB实验中的转膜缓冲液该如何配制?在文献中有看到不一样的配方
whilt-shirt
我们实验室是tris3.03g,甘氨酸14.4g,加双蒸水至800ml,然后再加200ml的甲醇
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问
如果WB实验中需要检测的蛋白是牛乳蛋白,封闭液该怎么选呢?
天一湖医者
TBST进行稀释获得5%的牛奶封闭液(5g/100mL)
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问
出现多条条带时怎么处理?
申东熙老伯
可以适当稀释一抗,降低一抗浓度。
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问
Western-blot实验制胶时好多泡泡怎么办?
dxy_h96fmgnq
你多配一点,然后吸的时候吸取澄清部分就行
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问
western blot 实验怎样做内参照?
还在陆上surg
根据样本和目的蛋白分子量选择合适的内参。
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问
Western blot实验中条带中间或周围出现白圈原因是什么?
Eason老歌迷
可能是你转膜时,你膜和胶之间有气泡没有赶干净。
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问
WB蛋白提取的相关问题
Eason老歌迷
6孔板一般我是一个孔加100ul的裂解液。
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问
Western blot实验有阳性条带,但条带信号弱的原因是什么?
whilt-shirt
抗体浓度过低或者特异性不强,建议增加抗体浓度和敷育时间试试
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问
western blot试验中如何提高磷酸化抗体的检测质量?
Eason老歌迷
可以在提蛋白时,加磷酸酶抑制剂。然后可以延长封闭时间,调整一抗浓度。
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问
western blot试验中如何判断样品总蛋白的提取是否成功?
秋秋欣欣
蛋白提取后煮沸前可测定蛋白浓度判断蛋白提取浓度,或者变性后跑胶考马斯亮蓝染色或者转膜后丽春红染色判断
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问
细胞BSA蛋白定量怎么调整啊,每次跑出来条带都歪?
天一湖医者
我觉得有两种可能:一、做胶时没有充分混匀二,上样buffer 可能有问题
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问
wb同样的蛋白样品,跑三块胶,为什么有的内参齐,有的内参不齐?
天一湖医者
一般是跑胶时电流或电压太大。还有可能是样品中参杂着盐离子等其他物质也会造成跑不齐。
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问
分离胶中忘记加没加SDS会不会有什么影响?浓缩的加了
inventbiotech
,理论上是应该跑不动蛋白在里面,不要冒险,重新配一块比较好,做一次不容易,忘记了就重来吧,建议配置时,加一样在实验记录本上划一样,就记不错了,好记性不如烂笔头。
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问
小白做+WB
天一湖医者
减少抗原上样量,降低一抗浓度,改变一抗孵育时间和温度
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