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问
同时跑的同样品的内参差别有点大,这是什么问题呀?
dxy_u7ff8bo
其实也是正常的,我经常也跑出来这样。如果是不同的内参,就需要预实验,看哪个内参更稳定,更适合你的样品,就用哪种内参。如果用的是同一种内参,那就需要从电泳本身找原因了,导致这个现象的原因很多,比如电泳液,电级电压,跑胶时间,上样人为误差等,就需要多跑几次摸索一下,一次就满意很难。
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问
WB的样品变性后可以在4℃放吗?大概能放多久
bamboopiggy
我放过4度,overnight没问题,估计放一周问题不大
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问
在做ELISA实验中,最后要显色多久可以加终止液进行终止,显色的原理是什么呀?
bamboopiggy
看你用的kit的说明书,一般在kit给的范围就可以。
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问
关于WB灰度值量化为柱状图的疑惑
Eason老歌迷
这两个没啥区别,都可以用。灰度直方图实质就是一个大小为256的数组,数组的下标为0 ~ 255,分别代表了图像采样量化后从0 ~ 255的每个灰度级。计算灰度直方图,其实就是通过遍历图像的每个像素点,统计0 ~ 255的每个灰度级在图像中出现的次数,而统计后的总次数或者归一化后的频率就作为这个数组对应下标的元素取值。
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问
Elias实验问题寻找?
dxy_082oaia6
如果不是偶然现象每次都这样的话考虑捕获抗体和二抗或者检测抗体可能存在交叉偶然现象可能是所用buffer污染
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问
为什么通过elisa、WB能检测到的蛋白在itraq实验中没有检测到?
Eason老歌迷
质谱不是专一性检测的,而是选择样品中丰度较高的蛋白质优先检测,而丰度较低的蛋白质则因为肽段信号过弱被淹没而不能被检测到。因此,如果样品中待检测的目标蛋白质丰度较低(或者蛋白质分子量较小),即使 WB 能够检测到,质谱并不一定能检测到
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问
磷酸化抗体的检测样本制备时是否一定要加NaF等?
bamboopiggy
NaF属于危险品,现在很难买了。一般这样的样品,你可以在lysis里面加点磷酸酶抑制剂。
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问
今天跑的wb又歪条带之间也没有分开,是什么原因呢
麻黄连翘赤小豆
歪可能是胶灌的不均匀,没分开可能是跑的时间太短,没跑开
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问
WB条带总是歪的,加样也很正,不知道什么原因
秋秋欣欣
那可能是你配胶没混匀的问题,没凝好吧
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问
三色预染蛋白marker是怎么用染料上色的?怎么选择合适的染料呀?求指教?
秋秋欣欣
预染蛋白Marker是一些纯化好的蛋白混合物,通过与染料共价耦联,在电泳过程中或者转膜时可以直接观察到。
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问
转膜marker没有全部转过去
balalaLy
用的多少浓度的胶,胶浓度太大也会导致大分子很难转过去
3 回答
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问
蛋白泳道黑
麻黄连翘赤小豆
感觉像蛋白降解的问题,重新提蛋白再看看
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问
WB实验有关问题
n0y0j7
你的大鼠模型,一抗就是a抗鼠,二抗就是b抗a.一抗是a身上取得,就叫a抗。二抗是b身上取得,叫b抗。常用的是兔抗鼠、羊抗兔组合。人体的标本就是鼠抗人,兔抗鼠。或者兔抗人,羊抗兔。
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问
【求助】HEPES可以用PBS代替嘛?
东北的雪狼
联系不要用PBS代替,会影响实验结果。
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问
线粒体亚基蛋白怎么提取呀
Eason老歌迷
先破碎细胞保存线粒体活性,在分离线粒体,最后破碎线粒体,提取线粒体蛋白
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问
为什么WB曝光后,sample图里的marker变白色,背景变黑色?
Eason老歌迷
可能是你的膜在实验过程中变干了,可能是洗膜不充分,可能是检测时曝光时间太长了。
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问
WB实验内参经常性出现不齐,重新定量后也会有同样的情况,怎么解决?
麻黄连翘赤小豆
每次上样前可以试一下把蛋白摇一下,长时间冻融可能会导致管子里面蛋白不均匀
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问
求助Western blot的结果如何量化?
Eason老歌迷
可以用ImageJ软件进行Western Blot的量化,
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问
蛋白提取SDS-PAGE相关问题?
申东熙老伯
可能是蛋白浓度太低,浓缩一下试试。
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问
请问在显影过程中胶片变黑了是什么原因,是拿出来之后就曝光了还是其他原因,求解答
Eason老歌迷
是不是在显影液里泡的时间太长了,如果时间太久就容易黑黑一片。
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