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问
救救孩子的WB
bamboopiggy
不知道你的问题是什么?是问有些条带背景深么?有的时候抗体特异性不是那么好,会出现背景,但是如果不影响你的结果的趋势的话,可以用。
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问
原核蛋白诱导表达
冷泉港蛋白
你的蛋白理论计算应该是20+46=66kd,1.上面的条带略高吧,也可以解释通。2.下面的条带应该是目的蛋白降解了,没有其他解释了,这个蛋白应该是超级不稳定。3.下面的条带如何证明是目的条带,抠胶打个质谱,花钱,也没有必要;纯化出来,37℃放置,第二天跑胶,估计就降解很多了4.如何解决这个降解问题,更换缓冲估计不行了,换载体吧
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问
蛋白不进胶
bamboopiggy
是不是你的lysis 坏了,或者是5xSDS的SDS坏了,导致蛋白没有裂解开?
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问
跑蛋白封闭的时间只能两个小时吗?我做实验有时候忘记时间,封闭了3-4小时反而跑的更好看
富婆贴贴
封闭时间不是固定的,但是要超过45min
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问
我的NLRP3有两个条带是怎么回事呀?
bamboopiggy
无图,只能靠猜,你是不是灌胶或者是buffer,有新配的?或者可能是你转膜的夹子有问题了?建议你重新跑一遍再看看。
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问
请问如何鉴别糖蛋白上的糖的类型呀?
你好几和户
先做SDS-PAGE,然后进行质谱分析,得出质量指纹谱,然后区别类型。
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问
smad2/3
Eason老歌迷
http://www.phosphosite.org/proteinAction?id=540&showAllSites=true。不同的磷酸化位点产生的功能请详细看此链接吧。如果你不研究具体的磷酸化途径,是可以的。
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问
邻联茴香胺甲醇溶液会在磷酸盐缓冲溶液中析出,有什么解决办法呢?
Eason老歌迷
你可以过滤一下,这样就可以把杂质过滤掉。跟你介绍一下我们实验室配的过程吧,称取125mg邻联二茴香胺于50mL棕色容量瓶中加25mL甲醇,振摇使其溶解,加50mg活性炭,振摇5min过滤,取20.0mL滤液置于另一50mL棕色容量瓶中,加盐酸(1+11)至刻度。临用时现配并避光保存。
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问
内参的选择
Hatcher_Qin
BCA蛋白定量准确的前提下,一多一少说明UUO对你选的这个内参有影响,建议换其他内参。
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问
求助 各位大佬帮帮忙啊raw264.7细胞抗炎做wb一直压不出条带来,有什么原因啊,转膜丽
麻黄连翘赤小豆
如果是压不出差异条带的话,你就要考虑是不是你养细胞的问题或者药物问题
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问
WB目的条带应该有两条,但是只出来一条
麻黄连翘赤小豆
蛋白降解,可以重新提取蛋白,或者胶的质量问题,没跑出来,或者换个显影液
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问
白介素6的WB检测
还在陆上surg
这个要看你的实验设计,一般来说两个都可以检测。
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问
为什么敷出来的wb条带是这个样子的,会变成浅条带
麻黄连翘赤小豆
板子没夹好,再跑一次就行了,转膜不均匀,滤纸可以换一下新的排除滤纸的问题
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问
请问为什么IP的igg会出现目的条带呢
你好几和户
原因可能是没洗干净,随便再用几种其它抗体,可能也能检测到类似条带。
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问
细胞培养基里的分泌蛋白怎么提取?提出来以后还要加到另一个细胞培养基里
天一湖医者
将要浓缩的蛋白溶液放入透析袋(无透析袋可用玻璃纸代替),结扎,把高分子(6 000-12 000)聚合物如聚乙二醇(碳蜡)、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可.也可将吸水剂配成30%-40%浓度的溶液,将装有蛋白液的透析袋放入即可.吸水剂用过后,可放入温箱中烘干或自然干燥后,仍可再用.
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问
Wb拔梳子之后发现碎胶
dxy_n0zw4do0
一般在拔梳子时,先把制好的胶板放入电泳槽中后,加上缓冲液后,如果制好的胶板比较久,可以在缓冲液稍等一两分钟,然后用两手同时均匀的用力去拔。这样胶不易碎。
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问
PI3K/AKT/mTOR信号通路 WB相关疑问?
天一湖医者
一个是PI3K/AKT/mTOR信号通路这个是存在磷酸化的,我觉得你在提蛋白的时候需要加磷酸化抑制剂。二个是你可以跑个18s看看,我觉得大概已经出来了有几个下调的,整体上抑制这个通路
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WB目的蛋白底下出现一条非常强烈的条带
天一湖医者
有可能是因为多克隆抗体,特异性不强。识别其他蛋白含量比较多的蛋白,所以非目的蛋白颜色就比较深。
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问
【求助】间接ELISA的一个空白对照孔的OD450值高过样品孔,这是咋回事呢?有改进办法不
Eason老歌迷
如果不是竞争ELSIA法的话,也是有可能的。正常情况是样品OD值和空白孔OD值都比较低,样品OD值略低于空白孔OD值。但是如果样品OD值比空白0D值低得多,恐怕就要考虑空白孔设定是否合适的问题了。
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问
PI3K/AKT/mTOR信号通路 WB求助
Eason老歌迷
有几个原因。一个是PI3K/AKT/mTOR信号通路这个是存在磷酸化的,我觉得你在提蛋白的时候需要加磷酸化抑制剂。二个是你可以跑个18s看看,我觉得大概已经出来了有几个下调的,整体上抑制这个通路。
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