登录
搜索
提问
我要登录
|免费注册
首页
>
实验问答
>
蛋白质
实验问答
22,150,953 科研人在看
科研学霸天团,48小时有问必答
我要提问
全部
细胞
免疫
蛋白质
PCR
DNA
RNA
微生物
动物
遗传
生物信息
其他
问
新手小白WB实验内参总是跑的不好?
Eason老歌迷
这个条带最好是别用,不太好。可能是你的电泳液使用次数太多。可能是你的抗体特异性不好,出现了非特异性条带。
3 回答
932 围观
3 回答
932 围观
去回答
问
WB怎么做才是杂志要求的原始条带?
麻黄连翘赤小豆
蛋白分子相近的一抗最好不要放一起混,后面说不清,距离远的可以。如果只能相近的就把内参跑完,洗掉一抗然后重新孵育那个一抗。主要还是看杂志要求,不能裁膜只是相对的,看你的抗体蛋白分子量
5 回答
3013 围观
5 回答
3013 围观
去回答
问
蛋白原核诱导表达与纯化
冷泉港蛋白
问题是蛋白挂柱不好。两个因素填料和蛋白1.填料是否有问题,把镍剥离,再挂一次2.蛋白his暴露的不好,his超级小,容易被卷进去:A.看下his是在N端还是C端,B.更换不同体系缓冲液C.可以考虑两段都加个hisD.如果实在不行,换成gst标签
4 回答
540 围观
4 回答
540 围观
去回答
问
如何提纯动物标本的目的大分子蛋白
cab2
我们取动物肝脏蛋白,用液氮把组织速冻,用pe手套包裹,用陶瓷杵敲碎,取适合大小的碎块,称重,1g加入1ml裂解液,加入3个钢珠,2大1小,研磨仪中研磨,离心,取上清
4 回答
367 围观
4 回答
367 围观
去回答
问
WB内参很奇怪,用的actin
bamboopiggy
不知道你跑胶的时候,条带齐不齐,如果跑胶的时候齐,感觉还是转膜的时候出来问题,不是加抗体孵育的问题。因为颜色够深。
4 回答
763 围观
4 回答
763 围观
去回答
问
救救孩子的WB
bamboopiggy
不知道你的问题是什么?是问有些条带背景深么?有的时候抗体特异性不是那么好,会出现背景,但是如果不影响你的结果的趋势的话,可以用。
3 回答
430 围观
3 回答
430 围观
去回答
问
原核蛋白诱导表达
冷泉港蛋白
你的蛋白理论计算应该是20+46=66kd,1.上面的条带略高吧,也可以解释通。2.下面的条带应该是目的蛋白降解了,没有其他解释了,这个蛋白应该是超级不稳定。3.下面的条带如何证明是目的条带,抠胶打个质谱,花钱,也没有必要;纯化出来,37℃放置,第二天跑胶,估计就降解很多了4.如何解决这个降解问题,更换缓冲估计不行了,换载体吧
3 回答
1618 围观
3 回答
1618 围观
去回答
问
蛋白不进胶
bamboopiggy
是不是你的lysis 坏了,或者是5xSDS的SDS坏了,导致蛋白没有裂解开?
5 回答
591 围观
5 回答
591 围观
去回答
问
跑蛋白封闭的时间只能两个小时吗?我做实验有时候忘记时间,封闭了3-4小时反而跑的更好看
富婆贴贴
封闭时间不是固定的,但是要超过45min
7 回答
2859 围观
7 回答
2859 围观
去回答
问
我的NLRP3有两个条带是怎么回事呀?
bamboopiggy
无图,只能靠猜,你是不是灌胶或者是buffer,有新配的?或者可能是你转膜的夹子有问题了?建议你重新跑一遍再看看。
3 回答
290 围观
3 回答
290 围观
去回答
问
请问如何鉴别糖蛋白上的糖的类型呀?
你好几和户
先做SDS-PAGE,然后进行质谱分析,得出质量指纹谱,然后区别类型。
3 回答
557 围观
3 回答
557 围观
去回答
问
smad2/3
Eason老歌迷
http://www.phosphosite.org/proteinAction?id=540&showAllSites=true。不同的磷酸化位点产生的功能请详细看此链接吧。如果你不研究具体的磷酸化途径,是可以的。
3 回答
557 围观
3 回答
557 围观
去回答
问
邻联茴香胺甲醇溶液会在磷酸盐缓冲溶液中析出,有什么解决办法呢?
Eason老歌迷
你可以过滤一下,这样就可以把杂质过滤掉。跟你介绍一下我们实验室配的过程吧,称取125mg邻联二茴香胺于50mL棕色容量瓶中加25mL甲醇,振摇使其溶解,加50mg活性炭,振摇5min过滤,取20.0mL滤液置于另一50mL棕色容量瓶中,加盐酸(1+11)至刻度。临用时现配并避光保存。
2 回答
288 围观
2 回答
288 围观
去回答
问
内参的选择
Hatcher_Qin
BCA蛋白定量准确的前提下,一多一少说明UUO对你选的这个内参有影响,建议换其他内参。
4 回答
453 围观
4 回答
453 围观
去回答
问
求助 各位大佬帮帮忙啊raw264.7细胞抗炎做wb一直压不出条带来,有什么原因啊,转膜丽
麻黄连翘赤小豆
如果是压不出差异条带的话,你就要考虑是不是你养细胞的问题或者药物问题
5 回答
548 围观
5 回答
548 围观
去回答
问
WB目的条带应该有两条,但是只出来一条
麻黄连翘赤小豆
蛋白降解,可以重新提取蛋白,或者胶的质量问题,没跑出来,或者换个显影液
4 回答
408 围观
4 回答
408 围观
去回答
问
白介素6的WB检测
还在陆上surg
这个要看你的实验设计,一般来说两个都可以检测。
4 回答
1137 围观
4 回答
1137 围观
去回答
问
为什么敷出来的wb条带是这个样子的,会变成浅条带
麻黄连翘赤小豆
板子没夹好,再跑一次就行了,转膜不均匀,滤纸可以换一下新的排除滤纸的问题
5 回答
379 围观
5 回答
379 围观
去回答
问
请问为什么IP的igg会出现目的条带呢
你好几和户
原因可能是没洗干净,随便再用几种其它抗体,可能也能检测到类似条带。
5 回答
3036 围观
5 回答
3036 围观
去回答
问
细胞培养基里的分泌蛋白怎么提取?提出来以后还要加到另一个细胞培养基里
天一湖医者
将要浓缩的蛋白溶液放入透析袋(无透析袋可用玻璃纸代替),结扎,把高分子(6 000-12 000)聚合物如聚乙二醇(碳蜡)、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可.也可将吸水剂配成30%-40%浓度的溶液,将装有蛋白液的透析袋放入即可.吸水剂用过后,可放入温箱中烘干或自然干燥后,仍可再用.
3 回答
2034 围观
3 回答
2034 围观
去回答
1
•••
107
108
109
110
111
•••
172
跳至
页
意见反馈
合作咨询
提问
扫一扫
实验小助手
扫码领资料
反馈
TOP
打开小程序