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        用T4 RNA 连接酶连接 RNA 分子

        相关实验:用T4 RNA 连接酶连接 RNA 分子

        最新修订时间:

        材料与仪器

        步骤

        一材料与设备

        1)10XT4RNA 连接酶缓冲液:50 mmol/LTris (pH7,8),l0 mmol/L MgCl2,5 mmol/LDTT,1 mmol/L ATP

        2) 无核酸酶的水

        3)FEG(polyethyleneglycol)40%

        4)RNA 酶抑制剂

        5)T4RNA 连接酶

        6) 供体(donor)RNA

        7) 受体(acceptor)RNA


        (二)操作方法

        1) 进行 RNA 与 RNA 分子连接的反应体系如下:

        供体 (donor)RNA                                              100-500ng

        受体 (acceptor)RNA                                            250ng

        10XT4RNA 连接酶缓冲液                                     4ul

        RNasin 核酸酶抑制剂 (40U/ul)                             1ul

        PEG,40%                                                             20ul

        T4RNA 连接酶 (9-12U/u1)                                   1ul

        补无核酸酶的水至终体积为                                 4u1

        2)37℃ 孵育 30 min,或 16℃ 反应过夜.

        3) 纯化回收,一 20℃ 保存。

        注意事项

        1) 供体(donor)RNA 分子如Poly(A)+RNA) 必须包含 5'磷酸基团。

        2)RNA 分子能有效的被多聚核苷酸激酶磷酸化。

        来源:丁香实验

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