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        提取血清中microRNA及后续实验

        相关实验:用T4 RNA 连接酶连接 RNA 分子

        user-title

        caremmmm

        广大科研家人朋友们,我想请教一下,提取血清中microRNA

        1.提取血清中microRNA时,最好用专用的microRNA提取试剂盒呢?还是TRIZOL方法提取也可以呢?

        2.逆转录分别用目的microRNA的茎环结构下游引物去逆转录、内参基因U6的常规下游引物去逆转录就可以是嘛?

        3.qPCR的试剂选择普通的SYBR方法就可以嘛?因为确实看到一些需要用探针法上定量PCR检测的

        救救孩子吧

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        4 个回答

        user-title

        dxy_8j2maf52

        有帮助

        我一般是用trizol直接提总RNA后进行miRNA反转录。  请问楼主用trizol提取血清总RNA后,测出浓度和OD值如何?我用250ul血清提取,但出来浓度值和OD值都很低,不知是否有步骤改善的地方

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        1. 对于血清中的microRNA的提取,专用的microRNA提取试剂盒和TRIZOL方法都是可以的。试剂盒通常更加方便,而且更容易获得高质量的RNA,尤其是对于microRNA这种较小的RNA分子。然而,TRIZOL方法也可以有效提取RNA,包括microRNA,只是可能需要更多的优化。具体选择哪种方法,取决于你的实验室条件和预算。

        2. 通常情况下,对microRNA的逆转录是需要使用特定的microRNA的茎环结构下游引物的,同时你也需要一个内参基因,比如U6,来校准和控制你的实验条件。这个内参基因的引物通常是常规的下游引物。

        3. 对于qPCR的试剂,普通的SYBR Green方法是可以的,尤其是在预算有限的情况下。但需要注意,SYBR Green是会与所有的双链DNA结合,所以有可能会检测到非特异性的扩增产物。探针方法如TaqMan则更为特异,因为它们设计的探针只有在目标序列存在时才会发出信号。所以选择哪种方法,又一次取决于你的实验需求和预算。

        user-title

        huarenqiang5

        有帮助

        提取血清中microRNA,TRIZOL方法也可以提取。建议使用专用试剂盒提取更好。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        有专门的提取试剂盒,trizol方法也可以用于提取,就是纯度和效率可能不如专门的试剂盒

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