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        qPCR内参Ct值

        相关实验:PCR 产物的 TA 克隆

        user-title

        dxy_xy5jmqr3

        请问大家内参Ct值跑到了目的基因后面是为什么呀,内参引物应该是没问题的,同实验室同学前几天做了也没问题。是cDNA的问题吗

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        3 个回答

        user-title

        橙汁儿青柠味

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        模板cDNA稀释的比较多所以内参的ct值比较大,然后目的基因的表达丰度比较高,所以ct值比内参小

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        loveliufudan

        有帮助

        如果内参基因的Ct值跑到了目的基因后面,可能存在以下几种情况:

        样品中的内参基因表达量过高:内参基因表达量过高可能会导致其Ct值跑到目的基因后面。如果内参基因表达量太高,可能会饱和荧光探针或者引物,导致其Ct值增加。建议您重新评估内参基因的选择,并检查其表达量是否适合您的实验。

        反应混合不均匀:反应混合不均匀也可能导致内参基因的Ct值偏高。如果反应混合不均匀,可能会导致某些引物或探针的浓度不均匀分布,从而影响PCR反应。建议您在反应前充分混合反应体系,并进行更严格的控制。

        RNA提取和转录反应的质量问题:RNA提取和转录反应的质量问题可能会导致内参基因的Ct值偏高。如果RNA提取和转录反应的质量不佳,可能会影响内参基因的表达量和PCR反应效率。建议您重新评估RNA提取和转录反应的质量,并尝试使用新的RNA样品进行实验。

        cDNA合成反应的问题:如果cDNA合成反应的质量不佳,可能会导致内参基因的Ct值偏高。建议您检查cDNA合成反应的条件是否合适,并尝试重新合成cDNA。

        需要注意的是,内参基因的Ct值偏高并不一定表示内参基因的表达量高,也可能是由于其他因素导致。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        你把cDNA稀释10倍,100倍再做下看看,考虑是c DNA稀释不足

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