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        trizol法怎么提取血中rna?

        相关实验:实时荧光定量 PCR(realtime PCR)

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        小鱼儿吐泡泡泡


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        3 个回答

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        土井挞克树

        有帮助

        trizol提取rna步骤:

        1. 取血液2-5ml,4℃,离心2 min,去掉上清液体。
        3. 在上述EP管中,按照每1ml Trizol后加0.2ml氯仿的量加入氯仿,盖上EP管盖子,在手中用力震荡15秒,在室温下(15~30℃)放置2~3分钟后,12000g(2~8℃)离心15分钟;
         
        4. 去上层水相置于新EP管中,按照每1ml Trizol加0.5ml异丙醇的量加入异丙醇,在室温下(15~30℃)放置10分钟后,12000g(2~8℃)离心10分钟;
         
        5. 弃上清,按照每1ml Trizol加1ml 75% 乙醇进行洗涤,涡旋混合,7500g(2~8℃)离心5分钟,弃上清;
         
        6. 让沉淀的RNA在室温在自然干燥
         
        7. 用Rnase-free water 溶解RNA沉淀。
        user-title

        Dr_劉医生

        有帮助

        以下是Trizol法提取血液RNA的步骤:

        1. 提取血液细胞

        2. 加入0.2ml氯仿,振荡15s,静置2min。

        3. 4℃离心,12000g×15min,取上清。

        4. 加入0.5ml异丙醇,将管中液体轻轻混匀,室温静置10min。

        5. 4℃离心,12000g×10min,弃上清。

        6. 加入1ml 75%乙醇,轻轻洗涤沉淀。4℃,7500g×5min,弃上清。

        7. 晾干,加入适量的DEPC H2O溶解(65℃促溶10-15min)

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        使用TRIzol法提取血液中的RNA需要经过几个关键步骤。以下是简要的操作步骤:

        1.采集血样:

        首先,采集足够数量的血液样本。常见的体积是200至500微升,但实际需要根据实验目的和设计调整。

        2.混合与溶解红细胞:

        将血液样本加入到等体积的红细胞溶解液中(例如,10倍稀释的红细胞溶解液),充分混匀。静置5-10分钟,以使红细胞充分破裂和溶解。这一步是为了去除红细胞中的大量蛋白质和其他污染物。

        3.离心:

        将混合物离心(约300-400 x g,4°C,5-10分钟),收集上清液中的白细胞。弃去下层的红细胞沉淀。

        4.洗涤与离心:

        向收集到的白细胞上清液中加入等体积的PBS,充分混匀。再次离心(约300-400 x g,4°C,5-10分钟),弃去上清液,留下白细胞沉淀。

        5.TRIzol裂解:

        向白细胞沉淀中加入适量的TRIzol试剂(通常每100μL血液加入1mL TRIzol),充分混匀,使细胞充分裂解,释放RNA。静置5-10分钟,以确保充分裂解。

        6.混合与分层:

        向TRIzol裂解液中加入1/5体积的氯仿,充分混匀,然后静置2-3分钟。离心(约12,000 x g,4°C,15分钟),使混合物分为3层:上层是水相,中层是白色的蛋白质相,下层是有机相。

        7.RNA沉淀:

        转移上层水相到新的离心管中,避免触及中间相。向上层水相中加入等体积的异丙醇(或2.5倍体积的无水乙醇),充分混匀,使RNA沉淀。静置10-20分钟,以确保充分沉淀。

        8.离心与洗涤:

        将混合物离心(约12,000 x g,4°C,10-15分钟),以收集沉淀的RNA。

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