OmniPur® 琼脂糖 PCR Plus，9012-36-

目的基因片段的PCR扩增与克隆

  10 min        保温 step8      End 扩增产物于0.8%的琼脂糖凝胶80伏电泳2 h，溴乙锭染色，凝胶成像仪观察分析扩增结果。若扩增谱带明显，并具有特异性，则挖带进行进一步扩增；若扩增谱带不明显，或特异性较差，则改变PCR条件，直到扩增出特异谱带。 凝胶加样缓冲液：0.25%溴酚兰；0.25%二甲苯青FF；40%（w/v）蔗糖水溶液；1×TAE 在琼脂糖凝胶中溴酚兰相当于35bp，二甲苯青相当于130bp。 目的DNA片段的进一步扩增 1 在长波紫外

PCR和RT-PCR

PCR基础 聚合酶链式反应（PCR）过程利用模板变性，引物退火和引物延长的多个循环来扩增DNA序列。这是一个指数增长的过程，因为上一轮的扩增产物又作为下一轮扩增的模板，使其成为检测核酸的一种非常灵敏的技术。一般，经过20-30个循环得到的扩增产物就足够在溴化乙锭染色的凝胶上观察到。反应包括几个成分（表1）。模板可以为纯化的基因组或质粒DNA；由RNA转化得到的cDNA；或未经纯化的粗制生物样品，如细菌克隆或噬菌斑。引物确定了扩增产物的序列和长度。最常用的热稳定聚合酶是Taq DNA

RT-PCR原理与实验技术

PCR产物，加上样缓冲液充分混合，点样于事先做好的琼脂糖凝胶点样孔中，10V/cm电泳45－60min。成像系统成像分析。 分离不同大小DNA片段的合适琼脂糖浓度 六、需注意的问题：1. 注意避免有毒、有害试剂伤害自己和他人：氯仿、溴化乙锭（EB）、酚、异硫氰酸胍、紫外线等。2. 注意避免试剂污染。3. 始终注意避免RNA酶的污染。 4. 保管好自己专用的试剂，公用试剂保管好，相互协调，注意实验室卫生。