• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购

        PCR跑胶时目的引物和GAPDH引物同时进行逆转录扩增,为什么会出现Gapdh引物跑胶出现拖影?

        相关实验:任意引物 PCR

        user-title

        dxy_7d4tlk84

        PCR跑胶时目的引物和GAPDH引物同时进行逆转录扩增,为什么会出现Gapdh引物跑胶出现拖影,出了Gapdh引物出现问题还有其他原因吗

        如下图,maker左边是目的引物,右边是gapdh引物。图片描述

         

        wx-share
        分享

        2 个回答

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        同时进行PCR反应时,不同引物之间可能存在相互干扰的情况。其中,GAPDH引物比目的引物更容易引起拖影的原因有以下几个可能:

        GAPDH是高表达基因,GAPDH引物的扩增产物数量可能比目的引物多,如果模板DNA量过多或扩增的周期过多,就会产生非特异性扩增,从而形成拖影。

        GAPDH引物的Tm值相对较低,可能会与PCR体系中的其他非特异性产物结合,从而形成拖影。

        GAPDH引物的设计可能存在问题,例如引物序列与模板DNA的同源性较差,引物的长度、GC含量等可能不适合PCR反应条件,从而导致非特异性扩增和拖影的形成。

        除了GAPDH引物本身的问题,其他可能导致拖影的原因包括:PCR反应体系中存在的污染物、PCR扩增条件的不恰当等等。为了确定问题的具体原因,可以逐一排除可能的干扰因素,并尝试改进实验条件和PCR体系,如适当调整引物浓度、PCR反应温度、扩增周期等等。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        可能是模版不够纯,有杂质,可以提纯一下模版

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序