dxy_7d4tlk84
PCR跑胶时目的引物和GAPDH引物同时进行逆转录扩增,为什么会出现Gapdh引物跑胶出现拖影,出了Gapdh引物出现问题还有其他原因吗
如下图,maker左边是目的引物,右边是gapdh引物。
loveliufudan
同时进行PCR反应时,不同引物之间可能存在相互干扰的情况。其中,GAPDH引物比目的引物更容易引起拖影的原因有以下几个可能:
GAPDH是高表达基因,GAPDH引物的扩增产物数量可能比目的引物多,如果模板DNA量过多或扩增的周期过多,就会产生非特异性扩增,从而形成拖影。
GAPDH引物的Tm值相对较低,可能会与PCR体系中的其他非特异性产物结合,从而形成拖影。
GAPDH引物的设计可能存在问题,例如引物序列与模板DNA的同源性较差,引物的长度、GC含量等可能不适合PCR反应条件,从而导致非特异性扩增和拖影的形成。
除了GAPDH引物本身的问题,其他可能导致拖影的原因包括:PCR反应体系中存在的污染物、PCR扩增条件的不恰当等等。为了确定问题的具体原因,可以逐一排除可能的干扰因素,并尝试改进实验条件和PCR体系,如适当调整引物浓度、PCR反应温度、扩增周期等等。
土井挞克树
可能是模版不够纯,有杂质,可以提纯一下模版
相关产品推荐
相关问答