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        第一次跑qpcr,要把cDNA梯度稀释,选择内参Ct值在15-20的稀释倍数作为最佳吗?为什么要这样呢?稀释关注的指标是哪些呢?

        相关实验:实时荧光定量 PCR(realtime PCR)

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        dxy_zi661ko5


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        2 个回答

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        loveliufudan

        有帮助

        在进行qPCR实验时,需要将cDNA进行适当稀释以避免反应过饱和或过稀释。选择内参Ct值在15-20之间的稀释倍数作为最佳是因为这个范围内,内参基因的表达量适中,可以提供足够的信号量并且不会因表达量过高而饱和,也不会因表达量过低而无法被检测出来。同时,稀释倍数也应该选择在能够产生可靠的信号的范围内,而不是过高或过低。

        选择稀释倍数的关注指标包括反应信号强度和反应效率。在反应信号强度方面,需要确保反应在所有样品中都有足够的信号区分,而不是出现饱和或太弱的情况。在反应效率方面,需要确保不同稀释倍数的反应效率接近,否则将会对结果的准确性产生影响。

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        土井挞克树

        有帮助

        因为逆转录之后的cDNA里面可能含有抑制物,所以需要稀释

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