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        第二次pcr跑出来的条带和第一次pcr跑出来的位置不一样,这是什么原因?

        相关实验:逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR,rtpcr)

        user-title

        dxy_us7co4pq

        材料是植物叶片,想筛引物。提取rrna然后反转录,最后进行pcr。但是第一次pcr的时候条带大小大概是50bp左右,第二次p条带大概是250bp

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        4 个回答

        user-title

        灵枢天问

        有帮助

        可能是第一次的RNA有降解,逆转录出来的模板本身就有问题,所以p出来条带也有问题,太小了,你可以发个图片过来看看

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        1.确定一下你两个引物之间的产物大小应该是多少,2,然后看一下pcr的扩增时间是否一致。

        user-title

        dxy_us7co4pquser-title

        p出来的产物大概是250bp,我的2次循环数不一致,一次30个循环,一次34个循环,所以这就会导致2次p出来的结果不在同一位置嘛

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        土井挞克树

        有帮助

        首先你的确认你没有用错东西.
        如果没有问题,二次PCR的话,那得看你的延伸时间和退火温度了.
        2轮的退火温度最好调高些,以增强特异性.
        延伸时间上,看你的产物大小.如果需要大条带,那延伸时间意义不大,最好能对一轮产物进行预期条带的回收后再做2轮,或者进行巢式PCR;要是需要小条带那就简单了,直接缩短延伸时间就好了.

        user-title

        juyue2010

        有帮助

        主要是看自己设计的引物扩增片段长度,第一次的可能是引物二聚体

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