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        TaqMan 探针荧光定量 PCR 的原理是什么?

        相关实验:实时荧光定量 PCR(realtime PCR)

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        君君子丶

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        3 个回答

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        dxywode

        有帮助

        Taqman探针法的定量PCR反应体系中,包括一对PCR引物和一条探针。探针的5’端标记有报告基团(ReporterR),如FAMVIC等,3’端标记有荧光淬灭基团(QuencherQ),如TAMRA等。当探针完整时,报告基团所发射的荧光被淬灭基团吸收,仪器不能检测信号。随着PCR反应的进行,Taq酶在链延伸过程中遇到与模板结合的探针,其3’→5’外切核酸酶活性被探针切断,报告基团远离淬灭基团,能量不能被吸收,就产生荧光信号。因此每经过一个循环,荧光信号就和目的片段一样有一个同步指数增长过程。

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        迟C迟

        有帮助

        PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5'-3'外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。再通过实时监测整个PCR进程荧光信号的积累,与标准曲线对比进行定量分析。

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        天一湖医者

        有帮助

         将标记有荧光素的Taqman探针与模板DNA混合后,完成高温变性,低温复性,适温延伸的热循环,并遵守聚合酶链反应规律,与模板DNA互补配对的Taqman探针被切断,荧光素游离于反应体系中,在特定光激发下发出荧光,随着循环次数的增加,被扩增的目的基因片段呈指数规律增长,通过实时检测与之对应的随扩增而变化荧光信号强度,求得Ct值,同时利用数个已知模板浓度的标准品作对照,即可得出待测标本目的基因的拷贝数

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