PCR引物的设计原则是什么？

相关实验：逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR，rtpcr）

tanniuniu

2013-01-24

引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否。我想了解下PCR引物的设计原则是什么？

1 个回答

赵栋2012

2013-02-26

有帮助

1. 引物最好在模板cDNA的保守区内设计。2. 引物长度一般在15~30碱基之间。3. 引物GC含量在40%~60%之间，Tm值最好接近72℃。4. 引物3′端要避开密码子的第3位。5. 引物3′端不能选择A，最好选择T。6. 碱基要随机分布。7. 引物自身及引物之间不应存在互补序列。8. 引物5′端和中间△G值应该相对较高，而3′端△G值较低。9. 引物的5′端可以修饰，而3′端不可修饰。10. 扩增产物的单链不能形成二级结构。11. 引物应具有特异性。具体可以参考实验技术的PCR引物设计：
http://www.biomart.cn/experiment/430/457/690/index.htm