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        PCR引物的设计原则是什么?

        相关实验:逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR,rtpcr)

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        tanniuniu

        引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否。我想了解下PCR引物的设计原则是什么?
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        1 个回答

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        赵栋2012

        有帮助
        1. 引物最好在模板cDNA的保守区内设计。2. 引物长度一般在15~30碱基之间。3. 引物GC含量在40%~60%之间,Tm值最好接近72℃。4. 引物3′端要避开密码子的第3位。5. 引物3′端不能选择A,最好选择T。6. 碱基要随机分布。7. 引物自身及引物之间不应存在互补序列。8. 引物5′端和中间△G值应该相对较高,而3′端△G值较低。9. 引物的5′端可以修饰,而3′端不可修饰。10. 扩增产物的单链不能形成二级结构。11. 引物应具有特异性。具体可以参考实验技术的PCR引物设计:
        http://www.biomart.cn/experiment/430/457/690/index.htm
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