利用加尾法 real-time PCR 方法检测 miRNA，PCR 上游引物设计有什么诀窍和原则吗？

miRNA引物设计很麻烦，如果不差钱的话找靠谱的公司设计吧。就是那种能保证引物设计没有问题的公司，就是价格要比自己设计的高一些，但是省心。

1.不太明白你说的第一种方法，是直接miRNA反转录吗，cDNA跟miRNA一样长吗？因为miRNA片段非常小，PCR检测会比较困难。 2.你说的第二个方法可能就是环状引物法，就是反转录的引物带有一个环状结构的，反转录后，环状结构会打开，就相当于是把原来的片段延长了，这样后续PCR就好做了，用SYBR Green或者探针检测都可以。现在这个方法用得很多，很多做miRNA检测服务的公司用的也是这种方法。