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        做QPCR需要跑电泳吗?

        相关实验:实时荧光定量 PCR(realtime PCR)

        user-title

        萌翻1314

        新手求指教:请问做实时荧光定量PCR还需要跑电泳吗?感觉跑电泳也就是看RNA的完整性,直接用紫外分光检测器不是可以直接测出浓度和纯度吗?总觉得跑电泳没必要啊。。。
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        2 个回答

        user-title

        修玛杨

        有帮助
        紫外分光光度计检测的是RNA的浓度及是否有蛋白、酚类(就是在氯仿离心取上清的时候是不是吸到了中间层和下层,已经酒精洗异丙醇是否完全)的污染,而RNA电泳则是检测提取的RNA这个过程中是否有降解,如果是miRNA还好一些,如果是mRNA,一旦你的目的mRNA被降解了(也就是RNA电泳出现了3条以上的条带或者18s,28s不合格),那后续实验也就没有必要了。所以,我认为,要想出一个靠谱的实验,也为了避免实验结果显示的乱七八糟,还是做一下比较好。 还有一种电泳则是cDNA电泳,那是半定量必须要做的一步,但对于QPCR来说,做了无非是锦上添花,不做也无可厚非。甚至有时候就是浪费时间而已。。。。
        user-title

        phhcrab

        有帮助
        不知道你说的跑电泳是PCR之前还是之后呢? 1.如果是之前的RNA电泳,所指的完整性为是否是标准的三条带:5S、18S、28S。紫外测OD是指总体的完整性,一般以1.9-2.0为指标看有没降解,还可以顺便看下有无蛋白残留和盐离子浓度。RNA的质量对做反转录和基因表达的结果非常重要。 2.如果你指的是PCR之后的…………不对,PCR之后没RNA了。不过还是多嘴说一句吧,定量PCR之后还想跑下电泳的情况一般是,怀疑扩增曲线可能不是目的片段,那可以辅助跑个电泳对比marker看扩增产物是不是你要的东西。 3.这个实验做出来容易,做出你想要的结果不容易,如果是刚开始做的话,还是多尝试多摸索吧!
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