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实验问答23,608,255 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

PCR

问384孔板，rt-qpcr实验结果的处理？

balalaLy

跟96孔板的处理一样啊，只是工作量大了而已

3 回答420 围观

问为什么细菌的16s用KOD酶有时候跑不出来，同样的条件taq酶可以呢

bamboopiggy

kod是高保真的酶，不会产生错配，但是效率有点低，taq酶保真性差，但是扩增能力强。

3 回答795 围观

问在进行线粒体DNA PCR扩增时用限制酶酶切有什么作用，除了分段，获得目的的DNA还有别的吗？

bamboopiggy

不知道你的实验目的，但是一般酶切就是为了分开或者验证什么。

3 回答447 围观

问乙肝病毒荧光定量多少正常？

汤姆卜丽波

乙肝病毒荧光定量也就是PCR检测，正常值小于100IU/ml，如果大于100IU/ml，就是阳性的结果，也就是携带了乙肝病毒。

4 回答482 围观

问荧光定量pcr检测解脲支原体dna阳性说明什么？

秋秋欣欣

解脲支原体阳性，提示存在解脲支原体的污染

4 回答670 围观

问怎么确定很好的荧光定量PCR的引物，具体看哪些参数进行区分呢？

汤姆卜丽波

引物最好位于编码区5’端的300-400bp,无二级结构（自由能小于58.61KJ/mol），长度一般在17-25碱基之间，G+C含量45-55％，TM58-62

3 回答549 围观

问请问克隆引物和qPCR引物有什么区别，可以用qPCR引物做基因克隆用吗？

bamboopiggy

看你的实验目的，克隆的引物一般是在基因的起始和结尾设计，但是qPCR的引物的产物一般是50-200bp左右的，如果你要克隆50-200bp左右的片段，就可以用qPCR的引物。

3 回答1835 围观

问请问qPCR引物合成出来大概多久内要用完？怎么样验证一下我放了很久的qPCR引物是否还可以用？

天一湖医者

如果放入-20度的话，可以一年。

5 回答917 围观

问请问我的目的基因的本身GC含量就比较高，该怎么样设计克隆引物？

秋秋欣欣

克隆引物就正常设计就可以，退火温度可稍微设置高一点

3 回答378 围观

问荧光定量的标准曲线是否是必需的？

天一湖医者

荧光定量的标准曲线是非常必需的。

4 回答544 围观

问qPCR曲线形状解释

汤姆卜丽波

模板浓度太高了，在基线期内就起峰了，仪器会默认起峰的线条仍为基线部分，将扩增曲线往基线位置下拉，因此你的曲线下滑，这种情况大家也不要慌，可以减小基线终点（例如基线期默认 3 - 15 个循环，改为 3 - 10 个循环），重新分析数据，一般都能得到一个比较好的结果

3 回答492 围观

问PCR条带弥散严重，怎么解决呢？

天一湖医者

1.酶量过高。减少酶量;酶的质量差,调换另一来源的酶。2.dNTP浓度过高。减少dNTP的浓度。3.MgCl2浓度过高。可适当降低其用量。4.模板量过多。质粒DNA的用量应<50ng,而基因组DNA则应<200ng。

4 回答2176 围观

问1.引物二聚体严重是怎么回事？2.CT值偏大（CT值的大于等于30）是什么原因呢？3.体系双扩增的原因？

天一湖医者

引物设计不合理，两条或一条引物的3`端有互补序列，造成自己配对延伸而扩增。建议重新设计引物，，或者降低退火温度、增加模板和引物的量试下。

3 回答582 围观

问无特异性扩增，全为引物二聚体是怎么回事？

李小栋UI65

引物效果不好可能是由于引物间存在互补序列

4 回答308 围观

问PCR求助

bamboopiggy

你这不是正常的melt curve，数据不能用了。找一下原因，是试剂还是机器的原因。

4 回答416 围观

问UCSC验证别人已发表文献的引物出现no match，什么原因？

bamboopiggy

是不是方向问题？有的软件要求reverse方向的引物要反向互补才能对比上

3 回答558 围观

问OT-1和OT-2小鼠的鉴定

bamboopiggy

OT-1小鼠是体内CD8+T特异性识别OVA，OT-2小鼠是体内CD4+T特异性识别OVAOT-1 的原始参考文献，Enhancement of Adaptive Immunity by the Human Vaccine Adjuvant AS01 Depends on Activated Dendritic Cells 以及另外一篇文献：Quantitative PCR for detecti

4 回答8779 围观

问Taqman探针怎么设计？荧光基团怎么选择？

未来9

探针设计的基本原则：1．保守：探针要绝对的保守，有时分型就单独依靠探针来决定。理论上有一个碱基不配对，就可能检测不出来。若找不到完全保守的片段，也只能选取有一个碱基不同的片段。且这个不同的碱基最好在探针的中间，对探针与目的片段的杂交影响不大，不相同的碱基最好不要在两端，因为两端不利于探针的杂交。且最好为A或T，而不能为G或A，因为A、T为双键，而G、A为三键。2．探针长度Taqman探针的长度

4 回答1666 围观

问弱弱的问一句，所以文献中经常看到的qRT-PCR就是Real-time RT-PCR（RT-qPCR）吗？

whilt-shirt

是的，qRT-PCR就是Real-time RT-PCR

4 回答7900 围观

问请问普通PCR一般退火温度大致在多少范围？是否可根据实际情况微调？

bamboopiggy

退火温度以55度为起始，一般是primer的low temperature-5,要是不低于55，就可以用

4 回答1705 围观

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