实验问答21,908,852 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问为什么QPCR结果中内参某一样本的CT值极高，达到了28点几，其它样本的均小于20

四月清风小兔

要看这个样品的质量和浓度怎样，如果质量差或浓度过高，都会导致这样的结果！

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问大肠菌p没有目的条带

申东熙老伯

引物二聚体都没有就考虑是引物降解了。

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问为什么PCR cq值都是0

Dr_劉医生

应该是检测区域选错了，只要加了样品，不可能会是0。

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问我的pcr阴性对照一直有条带，而且是很杂的条带，样品的目的片段正确，而且没有杂带，前后换了条件和循环数，还有引物也换了，还不行

申东熙老伯

可能出在阴性对照的水或者别的试剂上面，应该是水污染了。

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问PCR扩增产物测序跟目标扩增子的序列会100%一致吗，是否可以用于准确性的参考

土井挞克树

可以用作准确性参考，99%是一致的。

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问如何确定合适的内参基因用于泛肿瘤某个目标基因的RNA表达水平。

土井挞克树

高度或中度表达，排除低表达基因；稳定表达于各组织和细胞中；表达水平与细胞周期以及细胞是否活化无关；其稳定的表达水平与目标基因相近；不受任何内源性或外源性因素的影响，如不受任何实验处理方法的影响。

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问CAP认证时，PCR实验按照LDT的标准每个指标都需要验证通过才算实验验证成功吗？

土井挞克树

是的，最起码你的主要检测指标都要通过验证。

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问qPCR高靶标梯度内标

土井挞克树

相对的扩增你可以改变一下引物，在不影响灵敏度的前提下提高扩增率

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问细菌分类树状图怎么画

宁静LWS0

细菌分类树状图像，把细菌作为主干，从主干出来每一个分支再分出下一级分支，依此类推，依次是界、门、纲、目、科、属、种。

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问分子对接

Dr_劉医生

用刚性对接，适用于一般大分子蛋白和酶

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问请教pcr问题

Dr_劉医生

高标准差就是阈值，RT-qPCR的阈值就是指基线标准差的10倍。

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问Prospero上的Meta注册还有审核吗

huarenqiang5

在PROSPERO平台进行免费的Meta注册后，需要审核通过后获得注册号。

3 回答1713 围观

问pcr克隆问题请教

土井挞克树

上样量的问题，看不到目的条带可能是存在裂解。

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问电激法农杆菌转化，菌落pcr只有微弱条带，摇菌后，第一次没有，第二次也只有微弱条带

土井挞克树

考虑还是转化的问题，可以延长转化时间。

4 回答563 围观

问设计qPCR中circRNA对应线性转录本的引物？

土井挞克树

可以上circBase数据库设计qpcr中的线性引物

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问medicine杂志投稿外审意见

土井挞克树

需要全部回来后由网站更新为外审结束你才能看到

3 回答576 围观

问探针法与染料法有什么异同点？

土井挞克树

探针法由于有参考曲线的存在，可以得到正确的定量值，而染料法只能大致估算。

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问PCR时，为什么不是分离的两条DNA链重新结合复性，而是在引物后面接着合成新的链呢？

土井挞克树

这样可以保证结合的碱基对是高保真配对的。

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问RT-PCR扩增后跑胶，孔这么亮是什么原因呢？好几次了。

申东熙老伯

应该是上样问题，样品沉降系数不够。

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问Taqman探针扩增的荧光值问题

huarenqiang5

你的这个情况可以将设计好的序列在blast中核实一次，看有无非特异性互补区，如果发现有非特异性互补区，还是建议重新设计引物探针。

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