实验问答21,888,875 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问pcr不起峰是什么原因

loveliufudan

PCR不出现特定的放大产物峰可能由以下原因引起： 1. 引物问题：引物是PCR反应中的关键组成部分。如果引物设计不当，可能会导致PCR不起峰或产物低效。检查引物序列是否正确，长度是否合适，是否存在互补、自身二聚等问题。 2. DNA模板问题：DNA模板可能存在质量问题，如降解、含有PCR抑制物质或浓度过低。检查DNA提取过程、保存条件和质量，确保模板DNA的质量良好且浓度适宜。 3. PCR条件问

3 回答1384 围观

问引物上写novel_174-RT是什么意思呀？

dxyc42u

表明这个引物是用于特意性逆转录的

3 回答311 围观

问求教，我跑的qpcr，同一组引物却有不同的Tm值，可能是什么原因？

土井挞克树

可能是计算方法不同，Tm值相差太大可以进行Touchdown摸索最佳的反应温度。

3 回答3850 围观

问基因的扩增，总是跑不出来，是什么原因呢？

土井挞克树

扩增失败，大概率是引物的原因。建议：拿到新引物后应从 Tm- 5℃ 寻找其适宜的扩增温度，在某温度起为特异性扩增。然后，在特异性扩增的温度下检测扩增效率：将 cDNA 梯度稀释（一般为 2×），测试稀释后的样本 Ct 值差异是否为 1 左右。1、若差值为 1，则扩增效率良好，可进行正式实验。2、若在特异性扩增的温度范围内不能使 Ct 值差异为 1，则需考虑重新设计引物

4 回答1608 围观

问带分离胶的采血管采集的全血在4度下可以放置多久，准备提取血清RNA用？

阿繁体哥哥

可以放置12小时，超过这个时间就开始溶血了

5 回答1222 围观

问超声破碎的基因组dna怎么连接到我的质粒载体上，听说要修复加接头，怎么修复，接头是自己合成还是有专门试剂盒

huarenqiang5

接头建议使用专用试剂盒进行比较好。

3 回答342 围观

问求教。我做qpcr的扩增曲线长这样，是什么情况，怎么解决？

土井挞克树

考虑是质粒模板浓度太高了，在基线期内就起峰了，这种情况可以减小基线终点，重新分析数据。

2 回答442 围观

问求助分子结构式

土井挞克树

HO-1的分子结构式如下所示：

1 回答458 围观

问菌液测序结果

dxyc42u

只测出1000是不正常的，后面测不出考虑还是引物设计的问题

3 回答529 围观

问紫色杆菌CV026遇粗提信号分子不显色怎么办？你有让她显色的诀窍吗？

科研顺利小张

您好，我也在做这块的实验，请问您最后显色了么，是怎么做到的，谢谢

3 回答956 围观

问求教。如何设计模板为基因组的引物？平时都是以cDNA为模板，一般在NCBI上找引物，现在抽提的是全血基因组该怎么设计引物。

土井挞克树

还是建议做dna引物，以某一基因为模版，打开ensemble官网，正确输入基因名称及物种，点击“go”进行检索。

1 回答307 围观

问求教。熔解曲线出现倒峰代表什么，是否需要去除，如果有效去除？

dxyc42u

可以通过优化扩增时的温度去除。

3 回答260 围观

问请问各位PCR大佬，做miRNA的时候，不同组之间内参必须保持一致吗吗？

dxyc42u

不同组之间内参不用保持一致，但也不能差太多

4 回答451 围观

问可疑污染的细胞还能提取RNA吗

dxy_3oa09ry5

视实验目的和污染类型而定。如果污染源对实验目的有干扰（比如假阳性或交叉污染等），就不能提取；如果污染源对所关注的实验对象无干扰，则可以提取。

5 回答1555 围观

问在CDNA加入量和体积不变的话，10ul体系SYBR Green多加0.5ul是否对CT值有显著影响，结果是否可用

是TTT

多加0.5不会对CT值有显著影响，没关系的，结果可以用

6 回答453 围观

问Pcr实验中出现这种线一般是什么问题，求大神解答。

大草原的小灰驴

非特异性扩增吧，查看一下核酸提取的过程有无问题，再看一下质控品和阴性、阳性对照的扩增曲线

3 回答432 围观

问怎样知道PCR反转录试剂盒的开始投入使用年限

loveliufudan

要确定PCR反转录试剂盒的使用年限，最好参考制造商提供的说明书或技术手册。在这些文档中，制造商通常会提供关于反转录试剂盒的储存条件、有效期限以及建议的使用年限等信息。

3 回答264 围观

问同一样本Pcr第一天测阳性，第二天又测不出

loveliufudan

这种情况可能有以下几个原因： 1. 恙虫感染的动态：恙虫病病毒在感染过程中的病毒载量可能会波动，特别是在早期感染时。因此，即使在不同时间点进行检测，病毒的存在和载量可能会有所不同，导致结果的差异。 2. 样本质量差异：样本的质量可能会影响PCR结果。可能存在一些样本中的抑制物质（如血液残留、纯化剂等），可能干扰PCR反应的进行。因此，即使使用新的试剂和水，质量差异仍然可能导致结果的差异。 3. P

3 回答278 围观

问抗菌肽设计引物

loveliufudan

设计引物时，抗菌肽序列较短（约100 bp）可能会带来一些挑战，因为引物需要足够长以确保特异性和合适的扩增效率。以下是一些建议来设计适合短序列的引物： 1. 引物长度：通常，引物长度应在18到30个碱基对之间。尽量选择长一些的引物，以增加特异性和扩增效率。如果可能，考虑在目标序列的两端选择引物。 2. 引物特异性：确保引物与目标序列的特异性，避免与其他可能存在的相关序列发生非特异性扩增。可以使用引

3 回答527 围观

问PCR，U6做内参

sswei

只要是样本质量合格，U6做内参的CT值在10-20之间都可。

4 回答1955 围观

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