片段连接总是连不上是为什么？
简辞jjjj
如图所示，我们要做的是单体经酶切后再连接成2bp，两个2bp酶切后再连接成4bp以此类推。但是现在2bp酶切后死活就连不上，哪位大神指点一下？
3 个回答
dxyc42u
有帮助
有可能是酶的问题，可以换个其他牌子的酶试一试
土井挞克树
有帮助
可能是末端不匹配，先确定酶切位点没异常然后更换特异性的内切酶，确保切割末端无异常再重连
loveliufudan
有帮助
可以尝试以下方法：
• 重新选择酶：尝试其他酶来切割和连接2bp的片段，确保酶能够在目标DNA序列中正常工作。
• 优化酶切条件：调整酶切反应的条件，例如酶的浓度、反应时间和缓冲液成分，以寻找最佳的切割效果。
• 改变连接方法：尝试不同的连接方法或试剂盒，以找到适合2bp片段连接的最佳条件。
• 检查DNA序列：仔细检查目标DNA序列，确保没有不利于酶切和连接的结构或序列重复。
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