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        有人做LCR扩增吗?请教~

        相关实验:通过PCR扩增在扩增DNA产物末端引入限制性核酸内切酶酶切位点

        user-title

        dxy_2qd1ojar

        我跑LCR产物,Marker都模糊了,不知道什么原因,有人知道嘛图片描述

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        4 个回答

        user-title

        z流沙z

        有帮助

        首先配制琼脂糖凝胶的时候要充分煮沸和混匀,然后跑胶的时候电压不要太高,100-120v电泳20-30min差不多了

        user-title

        sswei

        有帮助

        Maker不清晰可能有以下几个原因:

        1. 错误的染色条件:蛋白胶染色时需要严格控制染色时间、染色剂的浓度和温度等条件。如果这些条件控制不好,就可能导致染色不均匀或者过度染色等问题,进而影响到Maker的清晰度。

        2. 胶的固定不充分:蛋白胶染色前需要进行胶的固定,以避免染色过程中胶脱离或变形等现象。如果固定不充分,也会对Maker的清晰度产生影响。

        3. 洗涤次数不够:在蛋白胶染色过程中,洗涤次数非常重要。如果洗涤不彻底,残留的染色剂会干扰Maker的解读。

        4. 胶的质量问题:如果胶的制备过程存在问题,例如胶的pH值不合适,都会影响到Maker的清晰度。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        marker这么模糊一般首先考虑引物的原因,引物可能裂解了或者断裂了

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        建议您从以下方面排查:

        检查反应温度是否稳定,是否达到PCR反应所需的最佳温度。

        确认引物的浓度是否正确,引物的质量是否纯净,是否存在污染。

        确认PCR反应体系中酶的浓度是否足够,是否过多或过少。

        检查DNA模板的质量和浓度,可能存在DNA质量差或者浓度低的情况。

        如果您的PCR产物存在多个尺寸的DNA片段,尝试优化反应条件,或者设计新的引物或者使用高保真酶。

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