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        求助!!双荧光素酶检测海肾荧光素酶值低!!求求!!

        相关实验:双萤光素酶实验

        user-title

        dxy_mw5zyqyr

        是这样的,我用的双荧光素酶载体分别是pGL6,pRL-SV40,然后我的空白组是只有细胞,对照组是pGL6+pRL-SV40,实验组是在pGL6载体上连接了我的目的启动子+pRL-SV40,下面是我测的值,萤火虫荧光素酶看起来还正常,实验组是有萤火虫荧光素酶表达的。

        但是!海肾荧光素酶的值很奇怪!对照组的海肾荧光素酶值我觉得算正常,说明pRL-SV40转到细胞里了,但是!实验组的海肾荧光素酶值跟空白差不多,跟没转进去一样,怎么会呢,都是一样的量,一样的操作。

        对照组和实验组唯一的区别就是我的启动子,难道是启动子的交互作用,影响了海肾的表达?我之前按5:1的比例转染,对此,我又进行了10:1,20:1,40:1进行转染,发现实验组的海肾值依旧接近空白,我实在是找不到原因了,特来寻求帮助。

        球球各路朋友们看一下,帮我分析一下,特别感谢!!图片描述图片描述

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        3 个回答

        user-title

        初秋丶NI0Q

        有帮助

        求助!! 我也是在敲低和NC组中转染TOP/FOP质粒、海肾的荧光值只有几千,而TOP和FOP都是几千万。  已经是TOP:海肾RLUc的质粒比1:10了

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        根据你提供的数据,萤火虫荧光素酶的表达看起来是正常的,因此可以排除萤火虫荧光素酶的问题。而海肾荧光素酶的表达在实验组中非常低,与空白组相似,可能存在以下几种可能性:

        转染效率不足:你已经尝试了不同的载体比例和浓度,但如果转染效率低,可以使用正常化对内参进行校正,或者使用其他方法提高转染效率,如电穿孔或磁转染等。

        启动子不活性或与报告基因不兼容:你使用的启动子可能不活性,或者与报告基因不兼容,导致无法正常表达。你可以尝试在其他载体中测试启动子活性,或使用其他报告基因进行验证。

        干扰素反应:如果你的启动子会诱导细胞产生干扰素反应,则可能会抑制海肾荧光素酶的表达。你可以使用抗干扰素的方法进行验证。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        重新构建启动子,考虑是启动子构建失败

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