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        碱变性法、煮沸法、碘化钠法提取制备模板核酸

        互联网

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        碱变性法
        取血清20ul,加入1mol/L NaOH 20ul,37℃30min,离心,加 1mol/L HCl 20ul,离心后,取上清5ul,用于PCR扩增.亦有用10ul血清加NaOH至 0.2mol/L,37℃1h,再加HCL中和离心后取上清10ul做PCR,其特异性和敏感性较前法 更好.

        煮沸法
        经离心洗涤过的组织细胞,分泌物及血液标本,加适量无菌蒸馏水或PBS,混匀 后,100℃煮沸10~15min,14000r/min 10min,取上清做PCR.

        碘化钠法
        取组织细胞及抗凝血液10~100ul,加等体积的6MNaI,反复轻混 20s,加等体积氯仿:异戊醇(49:1)振匀后,离心取上清加0.6体积的异丙醇,混匀后 置室温3min.14000r/min 10min,沉淀加10~100ul,TE溶解,取5~10ul做PCR,亦有 用100ul血清加裂解液300ul(6M NaI,0.5%十二烷基肌酸钠,10ug糖原,26mmol/L pH8.0 Tris-HCL,13mmol/LEDTA)混匀后,60℃15min,加等体积异丙醇,离心沉定 后,加TE液用于PCR扩增,其产量和质量较高.

         

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