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求助大佬
Eason老歌迷
把细胞放入0.2%的PFA中,4°过夜,然后换成30%的蔗糖过夜(组织沉入瓶底即可)。放入OCT中包埋(需准备液氮瓶和包埋的小塑料盒)。切冰冻切片,-80°保存。取出切片,在室温中静置10min左右。切片放入0.2%的PFA中,冰上10min。用PBS+2mMMgCI2清洗,冰上10minX2次(500mlPBS+1ml 1M MgCl2)c将切片放入detergentrinse中,冰上10min
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问
某疾病的热点致病突变位点该如何寻找
府宅
可通过基因突变数据库如果想知道一个基因与哪些疾病有关或者某一种疾病与哪些基因有关,都可以在OMIM中查询。
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问
预测转录因子
Eason老歌迷
可以用JASPAR,也可以先用meme比对多个同源基因的启动子,找出保守motif,再用这个motif通过tomtom比对到一些已经发表的数据库,就知道可能结合的转录因子了。
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问
flox/flox小鼠与KO小鼠有什么区别啊
bamboopiggy
flox/flox小鼠与特定的cre小鼠交配,就可以得到ko小鼠,分为全身的和tissue-specific的。
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问
琼脂糖核酸电泳跑出峰状,求原因
爱吃水稻的小呆瓜
可能有以下原因供参考:1.点样方式不对。是否枪头戳到了凝胶;2.样品本身有问题。是否有杂质比如蛋白质污染等,建议点一个maker看一下条带;3.电泳缓冲液是否混匀。建议TAE或者TBE充分混匀,制胶和电泳液要一致4.电泳槽要水平
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问
菌种保种太长回影响质粒吗?
府宅
菌体老化死亡会发生菌体自溶,1.会影响质粒产出率,2.菌体自溶后可能会有小片段的基因组DNA污染提取的质粒.
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问
请问sh-sy5y用维甲酸诱导浓度
Eason老歌迷
你这个可能是药物浓度给高了,细胞发生了死亡,不贴壁。
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问
二代慢病毒质粒
bamboopiggy
你可以试试2:1:1,我一般用的是这个浓度,病毒的产量还可以。
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问
筛选稳转细胞系用质粒还是慢病毒
府宅
1安全性高:由于慢病毒剔除毒性基因,目前实验未发现致病性,已被用于CAR-T治疗于人体;2 表达时间长:慢病毒通过将外源基因整合到宿主细胞基因组上,可实现目的基因长时间稳定的表达,不随着细胞分裂传代而丢失,是细胞实验的首选;3 免疫原性低: 直接注射活体组织不易造成免疫反应,适用于动物实验。
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求助 为什么我1000bp的条带pcr产物跑胶跑到了250的位置,之前跑都是正常的
n0y0j7
和之前肯定有不一样的地方,pcr试剂,引物,模板其中总有弄错的
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问
琼脂糖凝胶电泳结果求助
bamboopiggy
你是用kit提完质粒才酶切的?还是直接用菌体,粗提一下就酶切的?感觉是质粒酶切产生的杂质。
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问
求助:把目的基因连接PET32a的质粒转化入BL21中,有单菌落,但是摇不起来是怎么回事呀
爱吃水稻的小呆瓜
1.检查抗生素有没有弄错;2.看一下这个质粒是多大,目的基因是多大,如果相对比较长的话,长的会比较慢,我之前一个8k的载体,连了一个11k的片段,长了三天才有;3.摇床的频率和温度是不是对的,有些菌要左右晃,有些要转圈晃
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问
用lipo3000包病毒,把AB液混合之后才想起来加包装质粒,能包成功吗
balalaLy
不一定,病毒包装的过程步骤太多,影响因素太多,所以建议还是按照常规的步骤来,不然到时结果不行还得排除各种原因
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问
求助 BCA测蛋白浓度样品加多了有影响吗
whilt-shirt
这个不影响,结果是直接能用的。
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问
外源基因插入质粒实验
bamboopiggy
不是吧,太短了也不好,并且太短了,可以直接合成。
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问
ot-1小鼠有没有pcr鉴定纯合和杂合的引物?
bamboopiggy
这个小鼠是transgenic小鼠,没法鉴定杂合纯和,只能鉴定有没有,但是如果你有的小鼠配到一起,然后得到的小鼠再跟wt鼠配,得到的小鼠都是杂合子的话,可以间接认为小鼠是纯合的。
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问
请问有没有什么好方法能让磁珠在裂解液里面待的更久
bamboopiggy
可是试着调整裂解液和缓冲体系的PH,来确保磁珠的稳定性。
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问
关于PLKO.1测序
balalaLy
多挑几个菌落试试,我试过一个板反复测了几次,最后才测成功
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问
菌落总RNA提取
Topmicro
手提不行的话就买个试剂盒试试,如果是因为乳杆不好破壁导致没提取出来的话,液氮研磨可以解决问题。
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问
Plo和Laminin包被板子回收几次呀?
冷泉港蛋白
问题1.板子不能二次使用的原因:首先看下贴壁的原理,板子—Laminin—细胞,类似三明治结构,培养过后用胰蛋白酶消化,Laminin蛋白就被降解了,就不存在Laminin了。所以就不能二次了 问题2.可以通过elisa测定Laminin的浓度。 问题3.理论上可以铺到新板子就行贴壁生长。 了解了细胞贴壁培养的原理(板子只能用一次)就没有问题3了
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