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科研学霸天团，48小时有问必答

问请问透射电镜观察细胞线粒体，自噬小体前的收样准备工作时，可以用胰酶消化法收集细胞样本吗？胰酶会破坏细胞超微结构吗？

loveliufudan

为了尽量保护细胞的超微结构，在进行透射电镜样本的制备时，一般推荐采用更为温和的细胞分离方法，比如机械搅拌或使用酶混合物如胰酶和EDTA的低浓度溶液。并且要尽量缩短酶的作用时间，避免对细胞的超微结构产生破坏。总的来说，可以用胰酶进行细胞分离，但是需要严格控制胰酶的作用条件，以保护细胞内部的超微结构。同时，在收集细胞样本后，需要迅速进行固定和包埋等后续步骤，以防止细胞结构的进一步破坏。

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问求完整的DASH饮食评分表，以及计分原则？

loveliufudan

关于DASH饮食的评分表，不同的研究中可能会有所差异，因为评分可能会根据研究的特定目标或人群进行调整。但基本的原理是根据个体的食品类别和摄入量进行评分，与DASH饮食指南的建议相符者得分更高。下面是一个基本的DASH饮食评分示例（每日摄入）： 1. 全谷类：每日6-8份，每份对应1分。 2. 蔬菜：每日4-5份，每份对应1分。 3. 水果：每日4-5份，每份对应1分。 4. 低脂奶制品：每日2-3

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问DEAE Sepharose fast 离子交换柱上样前是否需要过0.45μm的膜

loveliufudan

DEAE Sepharose Fast Flow是一种阳离子交换色谱介质，常用于蛋白质纯化。其颗粒大小通常在90-165微米范围内，因此理论上，对样品进行0.45微米或0.22微米的过滤并不会影响到色谱柱的填充物。过滤样品的目的主要是为了去除可能阻塞柱的大颗粒物质，比如细胞碎片或未溶解的沉淀物。如果你的样品已经通过其他方法（例如离心或超速离心）去除了这些大颗粒物质，那么可能不需要再进行过滤。但是，

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问蛋白质分离纯化过程中各种缓冲液如何配制

loveliufudan

这些缓冲液的配制主要涉及到以下化学物质：Tris，盐酸，NaCl，EDTA，NaH2PO4，PMSF和protease inhibitor cocktail。下面是每种缓冲液的具体配制方法： 1. 匀浆缓冲液：先在适当体积的去离子水中溶解适量的Tris和NaCl，再加入EDTA。之后使用盐酸或者氢氧化钠调整pH到8.0。所有物质应配成最终浓度为200 mM Tris-HCl，150 mM NaCl

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问GC-MS前处理怎么判断是否需要衍生

loveliufudan

判断样品是否需要衍生化的关键因素包括： 1. 样品的挥发性：如果样品中的化合物不能在GC的工作条件下挥发，则需要进行衍生化。这通常涉及到极性、热稳定性和分子大小的问题。 2. 样品的化学稳定性：如果样品中的化合物在GC的工作条件下会分解或反应，则可能需要进行衍生化以提高其稳定性。 3. 需要提高化合物的检测灵敏度或选择性：通过衍生化，可以改变化合物的化学性质，提高其在GC-MS中的检测灵敏度或选择

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问Protocol 里面写的PBS清洗细胞的时候，是每次都需要重新离心细胞并吹匀吗？

loveliufudan

在很多情况下，使用PBS洗涤后，会通过吸取去除PBS，而不需要再进行离心。然后加入新的缓冲液或试剂直接进行下一步的实验操作。这样操作的原因是，频繁的离心可能会对细胞造成压力，甚至可能导致细胞损伤。但在某些情况下，例如在需要完全清洗掉PBS，或者需要收集细胞进行下一步实验时，你可能需要在PBS洗涤后进行离心，并用吹管吹匀悬浮细胞。

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问检测细胞的GFP绿色荧光表达，样品需要计数吗？

烧伤科常医生

可以取一部分细胞进行流式，细胞密度不同会有影响

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问用种子液提质粒的时候没有条带

dxyc42u

很可能是质粒没有表达目的蛋白。

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问请问哪里有培训ISO15189注册内审员的培训会？

dxyc42u

SO15189注册内审员培训会我们医院检验科搞的

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问如果学校的流式细胞仪没有PI 的荧光通道的话，可以用PE通道来代替吗？

loveliufudan

尽管PE通道可能在理论上能检测到一定程度的PI信号，但由于光谱特性不完全匹配，因此检测效果可能不理想。更关键的问题是，如果你同时使用PE标记的抗体和PI，那么在PE通道上就会发生荧光补偿问题，这可能会使你的结果难以解读。在这种情况下，你需要找一个和PI光谱匹配并且不会和你其他荧光标签产生干扰的染料，比如7-AAD。

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问可以用4%的多聚甲醛来固定细胞吗？

烧伤科常医生

可以用4%的多聚甲醛来固定细胞

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问临界点干燥样本大小要求

烧伤科常医生

选取组织块长宽小于十毫米，高度小于五毫米

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问R语言gemtc包的结果里好多参数，哪个才是贝叶斯因子？

dxyc42u

要在R中通过专门的包进行转换的

4 回答348 围观

问给六十个受试者做了全外基因检测之后怎么确定研究哪个基因和某个确定的疾病的关系呢

土井挞克树

可以做一个统计学分析，看哪个基因与致病性具有统计学意义，如果都是阴性可以适当提高样本量

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问请问中国人群基因数据库有网站吗？

土井挞克树

有中国基因数据库，里面可以查询突变等中国基因相关信息

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问肝脏细胞与肌肉体外如何共培养？

土井挞克树

共培养步骤：1. 将40-60ul的肌肉细胞悬浮液种到slide中间小室，密度控制在5-10×104cells/ml；2. 将40-60ul的肝脏细胞悬浮液种到slide的其他8个小室；3. 细胞贴壁后，移去各小室培养基，并洗脱掉未贴壁细胞，再加400-600ul培养基到大well，两种细胞共享同一培养体系。

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问细胞毒性实验可以只测一个时间点吗

蓝莓小布丁

只测一个时间点数据不足，所得结果不够充分。

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问SEM观察多肽可以自然干燥吗？还是必须临界点干燥？谢谢！

dxyc42u

自然干燥效果稳定，还是做临界点干燥好些

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问SDS凝胶电泳时电压120V一直不变，会不会对样品有影响？

mistll8

有可能你可以把电压调低一点试一下

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问用sem观察多肽需要临界点干燥吗？还是正常烘干就好？

烧伤科常医生

用sem观察多肽，需要临界干燥，不建议正常烘干

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