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请问一下大家,pcr溶解曲线出现这种情况是什么原因啊?

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姜笙只念凉生好


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5 个回答

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dxyc42u

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这是非特异性扩增,考虑引物设计的不好,可以重新设计引物试下

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土井挞克树

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主要是样品存在降解,而且扩增循环不太够

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晓雨知春来

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1.多种模板或目标序列:如果PCR反应中存在多种不同的DNA模板或目标序列,每个序列的扩增特性可能会导致在溶解曲线中出现多个峰。这可能是由于样品中存在多个不同的物种、基因家族或基因变体。

2.二聚体形成:PCR反应中的特定条件(如高浓度的引物或DNA)可能导致二聚体形成,即两个引物结合在一起,而不是与目标序列扩增。这些二聚体可以在溶解曲线中表现为附加的峰。

3.引物或模板的非特异性扩增:有时,引物或模板的非特异性扩增可能发生,导致PCR反应中出现多个产物。这可能是由于引物序列的相似性或模板中存在的重复序列等因素引起的。

4.PCR反应条件不恰当:PCR反应条件(如温度、引物浓度、缓冲液成分等)可能不适当,导致PCR反应的非特异性扩增。这可能导致多个产物在溶解曲线中出现多个峰。

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sswei

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有以下原因:非特异性扩增:主要原因为引物特异性不好、Tm值较低或模板质量不高,可以根据设计原则设计新引物或者通过梯度 PCR 对引物退火温度(Tm值)进行优化,上调Tm值,选购质量较好的离心柱法核酸提取试剂,提高核酸提取质量,等等。

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loveliufudan

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下面是一些可能的解释:

1. 多种模板或目标序列:如果PCR反应中存在多种不同的DNA模板或目标序列,每个序列的扩增特性可能会导致在溶解曲线中出现多个峰。这可能是由于样品中存在多个不同的物种、基因家族或基因变体。

2. 二聚体形成:PCR反应中的特定条件(如高浓度的引物或DNA)可能导致二聚体形成,即两个引物结合在一起,而不是与目标序列扩增。这些二聚体可以在溶解曲线中表现为附加的峰。

3. 引物或模板的非特异性扩增:有时,引物或模板的非特异性扩增可能发生,导致PCR反应中出现多个产物。这可能是由于引物序列的相似性或模板中存在的重复序列等因素引起的。

4. PCR反应条件不恰当:PCR反应条件(如温度、引物浓度、缓冲液成分等)可能不适当,导致PCR反应的非特异性扩增。这可能导致多个产物在溶解曲线中出现多个峰。

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