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科研学霸天团，48小时有问必答

问请问巢氏PCR与普通PCR相比有哪些优点？

府宅

巢式PCR操作简单，所需条件与常规PCR相同，但与常规PCR相比进一步提高了反应的特异性与灵敏性，在微生物学、生物信息学、生物医学等方面有着极其广泛的应用。例如巢式PCR技术与RFLP（限制性片段长度多态性）技术结合，通过设计高度保守序列的引物对待检物种DNA进行PCR扩增，对PCR产物进行RFLP分析，从而完成DNA分子水平上的多态性检测，该法常用于流行病学的调查和临床常规检测。

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问双酶切鉴定实验有目的条带，但是底部也出现非特异性条带。

Eason老歌迷

可能是出现了非特异性酶切。你确认一下有没有下列情况发生：1.限制性内切酶在你使用的buffer体系中存在非特异性酶切的情况。2.酶切时间过长，我试过最长切过8小时，有一些内切酶会出现这种情况了。3.配的酶切体系当中，酶的体积超过了总体积的10%，过量的甘油会影响。4.酶切温度不对，不是所有的酶都是在37℃下工作，同样，检查一下你的水浴锅的显示温度和实际温度是否一致。

2 回答439 围观

问有小伙伴知道上传蛋白质质谱数据至公共数据库需要多久时间，卡在检验这里2+小时正常吗？

Eason老歌迷

你可以重新退出重新进，刷新几次试试，因为你可能是网络延迟问题。

1 回答357 围观

问化合物应该是显弱酸性的，结果测的饱和水溶液的值为8.01，PH计结果三点较正，请教一下大神们可能出现的原因，谢谢。

Eason老歌迷

可能是这个化合物密封保存不佳，和空气接触，发生反应，不然它应该是弱酸性啊。

1 回答407 围观

问请问大家PC12细胞造抑郁模型，有成功的吗分享一下经历，我做了一年了，都没成

whilt-shirt

可以参考这篇文献：谷氨酸和皮质酮诱导的PC12抑郁症细胞模型差异性的1H NMR代谢组学研究

2 回答1600 围观

问孕激素受体亚型B在NCBI上应该输入什么进行搜索找到该基因序列？

whilt-shirt

孕激素受体 B 亚型的英文全称是Progesterone receptor B，检索这个就行

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问流式分析得到这样的图，该怎么解决。

Eason老歌迷

有几个原因，可能是你没有正确的使用活性染料。可能是没有正确地设置PMT电压。

1 回答385 围观

问慢病毒转染细胞死亡

Eason老歌迷

一个是调整细胞状态，感染时使用对数期的细胞：增加细胞膜的流动性。二个是降低感染时血清浓度，使用无血清/低血清的培养基：降低血清蛋白对病毒外壳蛋白的封闭。三，你是不是使用了Polybrene，Polybrene本身就具有细胞毒性，部分细胞对Polybrene敏感，容易导致细胞状态变差、形态发生变化、甚至死亡。

3 回答1858 围观

问停跳液配方

whilt-shirt

可以参考一下这个，应该差不了太多

2 回答788 围观

问M8 baffer是什么？求配方？

261 围观

问纤维素降解菌外膜蛋白的提取方法？

dxy_vgywnud6

我是想让细菌活着从纤维素上玻璃下来呢

3 回答505 围观

问成品成骨诱导液加入葡萄糖溶液后，细胞卷成团块，飘起。求助？

Eason老歌迷

可能是你的诱导液的问题，细胞都死亡成团了。建议你用我这个配方试一试，含10%FBS的DMEM培养液，10mmol/Lβ甘油磷酸钠，0.05mmol/L维生素C和100mmol/L地塞米松。我记得这个公司的成骨诱导液说明书里有建议用0.1%明胶包被器皿后再铺细胞，可以降低细胞脱落的可能性。

1 回答322 围观

问基因敲除结束后再进行回补，获得的回补菌株没有恢复到原先的水平怎么解释？

Eason老歌迷

要特别注意做回补的时候，移码突变的必须要做cDNA突变，就是同义突变，将CRISPR识别的PAM序列去掉才行，要不然，回补的cDNA也会被切割破坏掉。注意移码突变的过程中，有一定概率出现的WB背景杂带的问题比较麻烦。回补之后的序列可能会干扰到回补片段的表达鉴定。

1 回答2410 围观

问zea Longa评分法是在拔栓前还是拔栓后

Eason老歌迷

一般是插完2个小时，拔出线栓大概1cm后，就可以评分了。

2 回答706 围观

问如何添加CUMS噪声和电刺激？

Eason老歌迷

有专门的实验仪器，每个牌子的设置都不太一样。拿我们实验室的来举例吧，需要电流、电压：0.1A，36V，设定放电刺激T1时间为10秒，间隔T2时间为5秒，自动循环刺激。设置方式如下：按下刺激仪上方红色按钮，手动调整电流,到0.1A，再次按下刺激仪上方红色按钮，手动调整电压到36V。长按设置键，再按动上下键，模式调整到P-6，短按设置键调整T1时间到10，再次短按设置键，调整T2时间到5，再次短按设置

2 回答483 围观

问蛋白质和壳聚糖静电结合

Eason老歌迷

它两都发生反应形成复合物了，肯定在280的吸光度下降啊。壳聚糖的游离氨基与蛋白质羧基端的游离羧基在相关酶的催化下脱去一分子水形成肽键，形成以壳聚糖为辅基的蛋白质或壳聚糖-蛋白质复合物。

1 回答169 围观

问测维C 一个样就要调配测六个梯度吗？

Eason老歌迷

并不是一定要调配6个，你可以自由的变动，不过主流还是6个为好。目前研究维生素C测定方法的报道较多,有关维生素C的测定方法如荧光法、2，6-二氯靛酚滴定法、2，4-二硝基苯肼法、光度分析法、化学发光法、电化学分析法及色谱法等。

1 回答370 围观

问大鼠颈内动脉穿刺模型用的穿刺材料是什么？感觉鱼线不太好用。

Eason老歌迷

我们常用的还是鱼线。鱼线的选择是关键，根据大鼠重量（作的多了后根据动脉粗细就可选择了）选鱼线。我们的经验是250g以下的选0.26mm的线，250-300g的选0.26mm蘸腊的或0.28的都可以。

1 回答283 围观

问wb检测，需要多少外泌体，颗粒数？

Eason老歌迷

外泌体是由细胞分泌而来的微小囊泡，直径约为30-200 nm，密度在1.13-1.21g/ml，具有杯状形态、双层膜结构。如果拿外泌体做wb，需要大概10的8次方个。

1 回答1172 围观

问α淀粉酶抑制实验结果超过1是为什么？

Eason老歌迷

前两天刚看了一篇文章，阿卡波糖在一定浓度内对淀粉酶抑制作用良好。可以发给你看，做个参考。

1 回答782 围观

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