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科研学霸天团,48小时有问必答
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关于毕赤酵母电转化验证的问题
Eason老歌迷
如果挑的菌落都是500bp的话,那就是你pcr跑胶回收的时候切错条带了,或者你的目的片段中有你选择的限制内切酶的酶切位点,被切断了。
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问
求助!请问有人分离出较纯的腹腔间皮细胞吗
Eason老歌迷
可以参看1999年第19卷第一军医大学学报的这篇文献“人腹膜间皮细胞的分离培养”,讲解的很清楚。
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问
发夹DNA片段制好后存放到4℃还是-20℃,能存放多久,会影响发夹结构不呢
你好几和户
-20放上个半年一年的也是没有问题。4度的话放个一两个星期也是可以的。
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问
羊毛硫肽类化合物跟硫肽类化合物是一种吗?硫链丝菌素(thiostrepton)是羊毛硫肽类化合物吗?
Eason老歌迷
是一种,可以看看这篇文章”羊毛硫肽类化合物(Lanthipeptide)生物合成新进展”里面讲的很清楚。硫链丝菌素(thiostrepton)是羊毛硫肽类化合物。
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问
感受态细胞里面发生重组反应
申东熙老伯
可能是培养细菌的时间过久,一般培养12-16小时就很够了。
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问
cums抑郁模型小鼠出现自残行为?
Eason老歌迷
遇到过,有时候会有出现断尾、耳朵坏死发黑、耳朵萎缩、脱毛等现象。我感觉这不属于自残行为吧。
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问
无水硫酸钠柱是什么,一般是直接购买还是需要自己制作
你好几和户
是利用固体吸附剂将液体样品中的目标化合物吸附,与样品的基体和干扰化合物分离,然后再用洗脱液洗脱或加热解吸附,达到分离和富集目标化合物的目的,都是购买的。
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问
质粒转染遇到的几个问题
bamboopiggy
1.慢病毒的质粒不能作瞬转,因为包慢病毒还需要几个包装质粒。2,原因同1.3,扔掉,重新作,一般作慢病毒的shRNA的序列都是公司直接合成的,除非是合成有问题,否则不会出现突变。
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问
流式检测
Eason老歌迷
第一个问题,小鼠在进行4%多聚甲醛心脏灌注后,会对脑肿瘤中浸润的免疫细胞的流式结果有影响。第二个问题,脑中的小胶质细胞用percoll分离液或者淋巴细胞分离液分离出来,具体可以看下图。
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问
FC载体构建
Eason老歌迷
是的,每次做抗原还要进行酶切去除,那也太麻烦了。换成羊驼的FC可以省去酶切这一步试一试,看看效果。
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问
求问Coip后质谱分析结果中蛋白评分多少比较可信啊?
Eason老歌迷
如果验证三次都没有验证出来,可能是假阳性,这种结果不太可信,过不了审核。
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问
Tunel染色染到了膜上
whilt-shirt
有可能是染色时间不够或者染色剂质量不行导致的
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问
大鼠心电问题
Eason老歌迷
可能会影响对结果判定的准确性,大鼠标准肢体导联比较杂乱,对心肌缺血的判定也很不是很敏感。可以用胸导联试一试,你可以找3只5.1K或5.6K的精密电阻(误差<0.5%)。将3只电阻的一端绞在一起,接生物放大器输入“-”极。生物放大器输入“+”极,接胸导联的某个部位,如V3或V4。生物放大器输入“地”极,接动物右下肢。这样就可得到比上述ECG漂亮的胸导联ECG图
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问
遇到一个病例,APTT一直100多,用当天凝血正常的血浆10人做正常混合血浆
Eason老歌迷
建议你参看一下这篇文章,鼓楼医院写的,”《出血与止血系列讲座》第三讲:凝血实验中的APTT纠正实验”。我之前也遇到过一个这样的情况。
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问
microRNA有没有转染量多促进靶基因表达,转染量低抑制靶基因表达的现象
bamboopiggy
你用luciferase实验验证一下它们之间的相互关系。microRNA mimics下调蛋白的表达,这个是定论。感觉你要么是mimics有问题,要么是你的目的蛋白的wb有问题。
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问
抑郁模型夹尾实验,小鼠使用什么夹尾呢?
bamboopiggy
可以用动脉夹,或者在止血钳上缠上胶布以后再去夹鼠尾
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问
请问提取植物总蛋白的方法有哪些?
你好几和户
提取方法主要有SDS-PAGE loading buffer煮沸法、苯酚提取法、TCA丙酮沉淀法等。
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问
microRNA过表达后与靶蛋白表达升高?
bamboopiggy
一般加入microRNA 的mimics以后,蛋白是会降低的。你先确保你wb的实验没问题,内参齐。然后另外找个公司再合成一个mimics试试,可能是mimics的合成有问题
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问
用PEG6000纯化慢病毒没有沉淀
bamboopiggy
我用的是PEG8000,但是原理是一样的,你对光看一下管子的侧壁,尤其是15ml管,有的时候,沉淀会直接挂在侧壁
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问
蛋白跑胶
bamboopiggy
可能是你蛋白的浓度太高了,或者是蛋白出现降解了。
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