实验问答22,283,385 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问大家进行细胞给药时，加血清吗？一般正常条件是不是给药都加血清啊？

dxy_gwrp7ndq

还是要看你的细胞种类的，有些细胞生长比较好，并且药物作用时间短可以不加血清的。一般我都是加含5%的血清的。肯定不能等细胞长满板子才加

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问免疫共沉淀的相关问题

dxywode

在细胞裂完离心之后、加入抗体ip之前吸出来的细胞裂解液。可以在wb曝光时显示目的条带的位置以及比较不同泳道之间用于IP反应的细胞蛋白量。

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问做WB转膜时发现marker没转上，但是全程做完扫膜以后内参是有的，目的淡到约等于无是怎么回事儿？

dxywode

marker应该在转完膜孵育抗体之前就可以看到是否成功转至膜上了。在显影时，如果用的是带有CCD相机的仪器读取结果，目的条带读取化学发光信号，而marker要用明场单独拍摄；如果是采用压片，显影定影，则需要提前标记。

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问做WB的时候加入抗体后条带出不来，要怎么快速判断出来是用的抗体有问题还是样本有问题？

dxy_gwrp7ndq

降低抗体浓度,增加二抗对照(不加一抗)。抗体未经纯化使用亲和纯化的抗体,减少非特异性条带。

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问免疫荧光双标操作方法以及注意事项有哪些？

府宅

两种一抗同时孵育，然后两种二抗同时孵育。

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问请问老师，pcr序列分组的秘籍与小技巧都有哪些？可否分享一下经验？

dxy_gwrp7ndq

退火温度过低，可致非特异性扩增而降低特异性扩増效率退火温度过高影响引物与模板的结合而降低 PCR 扩増效率。

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问在新冠疫苗中，免疫细胞到了什么作用，为什么两到三针疫苗还没有建立有效的免疫机制？

府宅

通常第1、2针疫苗产生初始和免疫记忆，使接种者产生抗体。第3针称「加强免疫」，使产生的抗体效价更高，从而使得疫苗的预防效果更为持久。

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问有什么药物可以诱导小鼠结肠癌从而得到结肠癌小鼠模型？

小布丁瑶瑶

诱变剂氧化偶氮甲烷(AOM)和致炎剂葡聚糖硫酸钠(DSS)可以得到

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问结肠癌小鼠模型如何制备？

lzy必有我师

1)小鼠皮下移植瘤模型的建立(2. 1)将肿瘤组织放置在含庆大霉素的生理盐水中浸泡2min，取出组织，反复用生理盐水冲洗三分钟，冲洗后标本组织无血液，将肿瘤组织用无菌眼科剪分割成直径1. 5mm 大小，放在无菌培养皿中；(2. 2)用20号套管针把剪好的肿瘤组织分别移植到裸小鼠及BNX小鼠右侧背部近腋部皮下，压迫伤口，无出血。每次套管针在电热真空灭菌器中灭菌； (2. 3)将小鼠放入小鼠IVC

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问实验动物饲养密度

soso2007

我一般按照标准一个笼子里养3只，笼子大约是4undefined5undefined40，具体我也没有量过。而一个房间可以养多少只，这个就不知道啦。

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问细菌培养问题

雕刻者

液体培养基和摇床应该都没有问题，因为我准备感受态（同样菌株）时就是用同样的液体培养基（就是不加AMP）和摇床的，感受态细菌长得很好，还有我做了阴性对照，没长细菌。这些问题我以前也考虑过。LB-AMP固体转到LB-AMP液体中的细菌主要问题是细菌生长不良，我现在用固体平板上转种2－3代（挑取生长较快的较大的菌落）后最后挑取较多的细菌转种到液体培养基中，液体培养基中的生长的细菌量增加了。但是液体培养基

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问请教细菌培养是否污染？

鱼小

我的判断是：1、没有染菌。2、同一条链上大小不一很正常，我很多实验都是这样。这个和菌种、生长时间等都有关的。3、那些非常小的应该是刚分裂出来的。4、枯草杆菌一般都不是成链状的，不过我有几次摇瓶出来染色后也成链状。5、真的感觉没有染菌，可以做做16s rna鉴定！

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问做出来的有差异表达的蛋白，又做了一批用WB的无差异？

Du杜杜杜

p 0.03，这个值很大的了，假阳性率很高，一般至少都是p＜0.05.蛋白质组学是一个非靶向的实验，并不是一个靶向实验，所以有假阳性的结果是很正常的，即使验证也是选取的P值较小的，且FC值变化较大的。

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问流式与werstern的区别？

sk1981521

1、Western 是检测蛋白表达的金标准，可用于检测细胞多种类型的蛋白；流式细胞术的方法多用于检测细胞膜蛋白，虽然也可通过Triton-X100给细胞打孔的方法来检测胞内蛋白，但对于分泌蛋白却是无能为力的； 2、Western测蛋白含量对抗体的量需要很少，一般1：1000左右，而流式对抗体的需要量很大，一般1：50（很浪费抗体）； 3、采用Western方法检测细胞蛋白含量的变化一般要有内参，而

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问怎样用流式细胞仪来鉴定小鼠BMDC？

西柚味的芋圆

这个BMDC是从小鼠骨髓冲洗出来的细胞，在体外用IL4和GM csf1刺激七天培养行成的细胞吗？单纯看纯度的话，我觉得 CD11c就可以了吧

8 回答2652 围观

问请问流式细胞术单抗直接荧光需要几种对照？

dxy_zutyknhe

先确定你用的直标抗体的荧光染料，然后确定该抗体的来源总属，选择相应的同型对照

12 回答316 围观

问流式细胞仪检测细胞凋亡结果分析问题

莹啊免疫啊

感觉分群分的不太好，至少得重复三遍才行，试试看第二遍时候会不会好一点。

7 回答2524 围观

问凋亡分析处理细胞时大部分细胞都处于pi坐标的负轴是什么原因？如何处理？

西柚味的芋圆

电压太低了，你做的时候一定要用单染管去调好电压

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问流式细胞技术测定细胞内游离钙浓度为何要使用氯化钙？

peaceful13

主要为了保持缓冲液的钙离子浓度～避免影响最终实验结果，因为胞内外离子浓度差异较大～会快速引起钙离子的变化

7 回答472 围观

问除了流式细胞仪pi法还有有哪些实验可以检测细胞周期？

西柚味的芋圆

好像有跟周期比较密切的一些蛋白，Ki67、PCNA可以看下

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