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问
酶联免疫吸附试验中的酶结合物中对酶的要求有哪些?该怎么选择?
郭郭的郭郭
酶的要求:一个酶蛋白分子每分钟可催化103~104个底物分子转变成有色产物。用于标记的酶应符合:首先活性要强,催化反应的转化率高,纯度高。然后易与抗体或抗原偶联,标记后酶活性保持稳定,且不影响标记抗原与抗体的免疫反应性。并且作用专一性强,酶活性不受样品中其他成分的影响,受检组织或体液中不存在与标记酶相同的内源性酶或抑制物。还要用于均相酶免疫测定的酶还要求当抗体与酶标抗原结合后,酶活性可出现抑制或激
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问
染色不清楚的原因是什么?
dxywode
应该是染液的问题哦,缓冲液的PH也有关系,最好在显微镜下边染色边观察。
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问
包因溶液用什么替代呢
LFF520宣城
HNO3:HCl:H2O=1:1:1配备液替代
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问
关于免疫组化中染色不均的问题 出现花斑样染色,大小不均,部分连成片,该如何考虑?
txs900416
可能是1、封闭不完全;2、抗体浓度太高,导致区域性结块染色;3、pbs洗涤不完全,导致过量抗体的非特异性结合
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问
免疫透射比浊法有没有更显著的方法减少效果影响
郭郭的郭郭
透射免疫比浊法是根据抗原抗体结合后引起液体介质浊度改变,使光线透过量减少,在一定范围内,透射光被吸收量与IC量呈正相关,依所测吸光度值推算待测抗原量的分析技术 。主要注意抗原或抗体不要量大大过剩,可出现可溶性复合物,造成误差;可以减少效果影响。还有就是应维持反应管中抗体蛋白始终过剩;不要受到脂血的影响。
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问
红斑狼疮的药物治疗?
府宅
如果仅有关节或者皮肤粘膜的这种受累比较轻的红斑狼疮,我们可以在密切监测病情,不选择激素,而选择非载体药、抗疟疾药,或者沙利度胺,这些药也能让病情得到有效的控制。
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问
为什么乙肝表面抗原胶体金法阴性但是酶联免疫吸附试验阳性?
Kimser
酶联免疫法和胶体金免疫层析法均为测定乙肝表面抗原的可靠方法,但胶体金免疫层析法的灵敏度有待提高。
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问
琼脂糖凝胶电泳中在规定的时间内没有跑出很好的条带,导致染色出现不清晰,分辨率不高的情况有哪些影响因素
府宅
1、DNA降解:琼脂糖凝胶电泳试验中要避免核酸酶污染2、电泳缓冲液陈旧:电泳缓冲液多系使用后,离子强度降解,PH值上升,缓冲能力减弱,从而影响电泳实验,建议经常更换电泳缓冲液。3、所用电泳条件不合适:电泳时电压不应超过20V/cm,温度<30℃;巨大DNA链电泳,温度应该<15℃;检车所有电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力4、DNA上扬量过多:应减少凝胶中DNA上样量。5、DNA样含盐量过
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问
针对化学发光中使用的质控品是高浓度稀释比较好?还是选择各梯度的直接商品浓度比较好
yanxiaoyuhao
质控品是指将已知量的待测样品加入到生物介质中配制而成,用于质量控制。所以选择各梯度的会比较好
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问
用目标蛋白做IP,WB的时候孵Ub,但是目标条带位置没有ladder,该怎么改善条件?
dxywode
你可以加 NEM 抑制 去泛素酶(DUB)的活性,或者干脆用 denaturing IP 去拉目的蛋白,然后检测泛素化。如果真的很难做,可以试试看过表达目的蛋白,再 IP ,当然无论如何也要用 NEM 或者 denaturing IP.
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问
树突状细胞培养需要什么条件?
dxywode
在倒置显微镜下观察细胞生长状态: 如果没长满,将培养瓶用75%酒精消毒后在超净台内更换新鲜培 养液,继续培养。 如果细胞已经长满(约80%-90%)则传代后继续培养。
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问
免疫组化一抗敷育时间的问题,越长越好吗? 有的推荐说至少一小时,通常推荐3小时,避免造成假阴性,如果敷育过夜或者24小时会不会引
dxywode
一抗孵育条件包括孵育时间、温度和抗体浓度,三者之间是相对的关系。浓度是最重要的先决条件,温度决定反应的速度而时间决定反应的量。一抗孵育温度有:4℃、室温、37℃,其中4℃效果最佳。至于孵育时间,这与温度、抗体浓度有关,一般37℃1-2h,而4℃则要过夜。其中,4℃最佳,反应最温和,背景较浅。37℃反应速度较快,时间较短。室温个人感觉不如前两者,条件不好控制。最常见的就是4度过夜这种。
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问
我想设计一个实验研究的是姜黄素对小鼠作用,主要和一些介素有关,如小鼠介素2、IL-1B、IL-12、肿瘤坏死因子B。哪个最紧密?
peaceful13
你应该先搜索文献,这些因子主要跟哪些细胞相关,采取什么样的形式进行检测,需要有目标样本的确定性,再设计相关实验方法
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问
ELSA时酶与抗体交联,你们一般选择什么方法,郭春祥建立的HRP标记抗体的改良过碘酸钠法试过2次,效果一般,配方按照标准配的
bqejjh123
酶与抗体交联的方法有许多种,根据酶的结构不同可采用不同的方法。对于制备HRP结合物,可用戊二醛二步法和过碘酸钠发。尤以简易过碘酸钠法更为常用。
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问
二抗敷完了发现敷错了,怎嘛办?
bqejjh123
如果敷错了,可以洗一下再敷,不然二抗会污染
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问
大部分抗体收到后4 度短暂保存1-2 周对抗体活性有没有影响? 如果抗体很快(1-2 周)会使用,推荐在如何保存?
府宅
试剂盒中的抗体和酶在4度可以放半年
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问
流式细胞术最多能用几种抗体去筛选t细胞
府宅
淋巴细胞4.CD3 + T淋巴细胞5.CD4 +与CD8 + T淋巴细胞
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问
大家进行细胞给药时,加血清吗?一般正常条件是不是给药都加血清啊?
dxy_gwrp7ndq
还是要看你的细胞种类的,有些细胞生长比较好,并且药物作用时间短可以不加血清的。一般我都是加含5%的血清的。肯定不能等细胞长满板子才加
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问
免疫共沉淀的相关问题
dxywode
在细胞裂完离心之后、加入抗体ip之前吸出来的细胞裂解液。可以在wb曝光时显示目的条带的位置以及比较不同泳道之间用于IP反应的细胞蛋白量。
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问
做WB转膜时发现marker没转上,但是全程做完扫膜以后内参是有的,目的淡到约等于无是怎么回事儿?
dxywode
marker应该在转完膜孵育抗体之前就可以看到是否成功转至膜上了。在显影时,如果用的是带有CCD相机的仪器读取结果,目的条带读取化学发光信号,而marker要用明场单独拍摄;如果是采用压片,显影定影,则需要提前标记。
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