实验问答22,322,104 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问细胞膜上有很多蛋白质，如何鉴定膜转运蛋白？（亲和标记膜重建）

whilt-shirt

可以采用荧光标记或者His探针试试

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问在质粒的双酶切以及回收中，为什么DNA的甲基化程度会影响核酸限制性内切酶的活性？

未来9

DNA甲基化以后，就不再被限制性内切酶识别和切割。

3 回答1022 围观

问用Heochst33342直接染色如何看细胞是否发生凋亡

bamboopiggy

图二发生凋亡，Heochst33342染色后，直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。细胞发生凋亡时，会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染

3 回答2740 围观

问PDB序列氨基酸残基和末端修饰

bamboopiggy

lol，如果二楼可以的话，您也可以参考一下这个帖子：https://www.novopro.cn/articles/201804241174.html

3 回答374 围观

问基因转录时两条链均可作为模板链吗？转录过程需要注意什么？

天一湖医者

DNA的两条链不能同时作为转录的模板链。

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问DNA琼脂糖凝胶电泳

dxywode

电泳时间可能过长，一般75v×30min左右，但是具体看溴酚蓝得离孔距离和目的条带离孔距离。利用电泳可以确定胶体微粒的电性质，向阳极移动的胶粒带负电荷，向阴极移动的胶粒带正电荷。金属氢氧化物、金属氧化物等胶体微粒吸附阳离子，带正电荷；非金属氧化物、非金属硫化物等胶体微粒吸附阴离子，带负电荷。

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问巨噬细胞造泡沫细胞模型?

天一湖医者

是不是细胞已经处于发炎状态了？

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问直扩型核酸检测，不用核酸提取步骤，这么方便的话，为什么没有大批量的替代传统的柱式法/磁珠法DNA提取？有什么弊端呢？

bamboopiggy

1.直扩适用于哪些DNA样品？2.直扩时间短、效率高，为什么没有在这次新冠检测上大批量铺开？3.直扩和传统DNA提取有什么区别和优劣其实直扩型相当于是菌落pcr，dna的得率和纯度不够。结果假阴性假阳性都可能出现。你也就知道为什么没有大面积铺开了。直扩型适用于genotyping等样本量多，只需鉴定有或无，大或小的实验。传统dna提取，适用于pcr产物回收，进行连接，转化的。

2 回答669 围观

问柱式法核酸提取和磁珠法核酸提取原理都差不多，只是固定项不一样，那么二者的裂解、结合清洗一套试剂是否可以互换通用？

bamboopiggy

原理是一样，但是不建议你互换或者是混合使用试剂，因为公司给的试剂，都是配套的采取了最优化的PH和盐浓度。并且硅胶柱法核酸的回收效率高、纯度好，而磁珠法适合于低浓度核酸的提取，只是通量大。你二者混用也没啥意思啊。

2 回答684 围观

问Frank-starling机制在大鼠心肌上验证

bamboopiggy

这不就是生理上的异长调节么？Frank当时是在离体的蛙心上做的，你可以考虑做离体的大鼠心脏，然后改变灌流液中钙离子的浓度，来进行检测。

1 回答404 围观

问在设计RCA环状模板时，模板长度在什么范围内合适

bamboopiggy

RCA的模板，不是取决于你实验的目的么？如果用phi29 DNA聚合酶可连续合成长达70kb的DNA片段。

2 回答515 围观

问转染质粒做基因敲入，效率太低，怎么提高？

bamboopiggy

cripsr cas9的质粒是比较大的，不建议用lipo2000转，建议用电转，效率高。

3 回答916 围观

问酶切目的基因及质粒载体后加Loading buffer终止反应,然后要直接进行连接反应,可以吗?要是不行,还有一种方法就是加热灭

bamboopiggy

酶切目的基因及质粒载体后加Loading buffer终止反应,不能直接进行连接反应，需要跑胶进行胶回收后，再进行连接反应。不建议用加热灭活限制酶的方法，因为酶切后跑胶，1是可以鉴定酶切产物对不对，2是可以进行纯化，去掉酶切带来的盐，有利于进行下一步的连接。

3 回答6032 围观

问PCR扩增到特异性产物后，回收PCR产物，PCR产物用BamHI和EcoRI（NEB公司的酶）在随EcoRI的BUFFER中双酶

bamboopiggy

蓝斑说明没有连接成功，NEB公司的酶，不需要酶切那么长的时间，并且酶切后，你跑胶鉴定了么？如果有条带，再进行胶回收和连接。一般QIAGEN quick spin column的柱子出问题的可能性不大，最大的可能就是你酶切完，没有跑胶鉴定。

3 回答847 围观

问基因扩增时候以cDNA为模板，为何扩增出一片弥散的带？

dxywode

我也是用cDNA做模板的，没有出现过弥散带的情况，但经常出现非特异性条带。出现弥散带的原因可能是你在做凝胶电泳时电泳液被污染或者是做的胶有问题，也可能是你的cDNA部分降解了，至于降解的原因主要是由于时间和温度。扩增完的东西要立即进行电泳，其次电泳的室温不宜太高时间不要太长，一般最多半个小时左右。另外在扩增过程中，由于气候的缘故，部分PCR仪在室温超过30度后就不能正常工作了，这要看PCR仪的型号

4 回答4844 围观

问吲哚美辛腹腔注射试剂怎么制备

dxywode

本试验处方中以二甲基甲酰胺和注射用水作为混合溶媒，提高吲哚美辛的溶解度，乙醇胺调节PH值，进一步增大吲哚美辛溶解度，乳酸调节pH值减少刺激性。吲哚美辛易溶于二甲基甲酰胺，但当加入等体积注射用水后吲哚美辛易析出。此外pH值的变化也能影响吲哚美辛的溶解。因此本处方中的影响因素主要有吲哚美辛的投药量，二甲基甲酰胺用量，乙醇胺用量及pH值的大小，根据主要影响因素设计如下的三个处方，通过观察是否有药物析出以

3 回答847 围观

问感染细胞不同时间点收样，怎么确定什么时候收样？

dxywode

转染的质粒和promoter不同，细胞表达的时间也不尽相同。一般在24-48小时之间。你第一次做的话，就勤快点常观察。

3 回答2623 围观

问求教！小鼠丘脑定向注射给药如何不容易反流？

天一湖医者

小鼠丘脑定向注射给药具体方法及步骤，希望可以帮到你。

2 回答567 围观

问请问形成包涵体的融合蛋白，能使用包涵体裂解液之后，用Glutathione Sepharose 4B亲和层析吗？

天一湖医者

使用包涵体裂解液之后，最好选择Glutathione Sepharose这样载量更高,流速更快.

1 回答387 围观

问请问大家常用于亚细胞定位做内质网标记都有哪些？

bamboopiggy

ER-Tracker™ Green (BODIPY® FL Glibenclamide)，或者用ERp72 ，PDI 抗体都可以

2 回答933 围观

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