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问
双酶切鉴定实验有目的条带,但是底部也出现非特异性条带。
Eason老歌迷
可能是出现了非特异性酶切。是不是你的酶切时间过长,我试过最长切过8小时,有一些内切酶会出现这种情况了。是不是配的酶切体系当中,酶的体积超过了总体积的10%,过量的甘油会影响。
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问
想用流式细胞术测凋亡,应该用双染法么?代理商给我推荐的BD的这种试剂盒。还请问流式细胞术测凋亡应该注意的tips是什么
balalaLy
操作的时候动作要轻柔,染色后尽快检测
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问
如何对分光光度计的数据进行处理?还有一些实验上的细节性问题?有人能搭理一下我吗?
Eason老歌迷
测出标准的已知浓度值溶液对某一波长光的吸收率E,做出吸收率E与溶液浓度N的曲线.然后,对未知浓度溶液在同一波长光下,测出其吸收率,从曲线上就可以求出其浓度值,改变波长,可以重新做出对这一波长的吸收率E与溶液浓度N的曲线,再进行测量。
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问
wb出现2个条带怎么回事?
bamboopiggy
可能是抗体不特异,可能是胶的浓度出现问题,也可能是buffer的问题,或者有的蛋白就是两条带,如果LC3B
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问
转染microRNA minics失败
Miracle星
1.准备不足做细胞转染的时候,在开展正式实验前要多做预试验,优化转染条件。优化转染条件包括:转染试剂的用量、DNA密度、细胞密度、试剂和DNA混合孵育时间等等。2.细胞污染细胞污染也是造成细胞死亡,转染效率低下的一大原因。首先,转染细胞用的质粒必须保证无菌。而现在市场上的一般的质粒提取试剂盒都做不到绝对无菌。分享一个小秘诀:将提完质粒后或者提的最后一步,用75%乙醇沉淀,这样就除菌了。3.质粒质量
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问
RNA转染时所用培养基需要全新的吗
bamboopiggy
只要你的枪尖是高压灭菌过的,就没有问题。但是要用无血清的。
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问
氧化铁纳米颗粒虽然粒径很小,但很难过0.22um的滤膜,大家有什么解决方案吗?
Eason老歌迷
虽然可能是粒径很小,但是考虑有没有吸附的作用?
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问
组织片TUNEL染色后凋亡率计算
Eason老歌迷
可以用iamgeJ来计算。也可以人工来算,首先是选取5个高倍视野,找500个细胞来数凋亡数,然后比值。
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问
RNA稳定放线菌素D实验,结果曲线在某一时间点忽然翘起的原因?
Eason老歌迷
放线菌素D抑制RNA合成,是不是在这个时间点实验条件抑制了它的作用
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问
上周蛋白浓度要不要调一致?
秋秋欣欣
最好是调成一致,结果才能达到半定量
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问
一种上皮细胞中剪切的caspase3和9丰度不够,如何避免蛋白降解?
Eason老歌迷
可以用0.22um的膜过滤啊,别的膜过滤还是会有细菌存在,0.22的可以达到无菌要求,这样样本因为细菌导致的蛋白降解就不会产生了。
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问
分子量小于1万道尔顿的,使用什么蛋白marker?电泳条件是什么?
bamboopiggy
你去一些卖marker的官网上找,保证有小于10KD的marker可以用,建议你用15%的胶跑就可以
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问
我做的是小鼠海马组织,4度生理盐水灌注,4%多聚甲醛灌注,沉糖.OCT包埋,-20度切片,但是细胞大部分有空洞
balalaLy
一般说速冻是把组织放进液氮中速冻,我试过,效果并不理想。有同学建议用防冻液可以很好地防止冰晶产生,不会有空洞。你可以试试。
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问
所有WB实验都用总蛋白就可以完成吗?
balalaLy
大部分蛋白是只需要看总蛋白,有些蛋白失活、激活状态分别在不同的地方表达,就得看总蛋白和活化部分的比例,比如NF-kB需要看入核部分和胞浆部分。
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518 围观
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问
顺铂带进SPF如何消毒
balalaLy
顺铂溶液本身是无菌处理过的吧,外包装酒精擦拭之后放入消毒后的铁饭盒或者用锡纸包裹,放入传递窗紫外消毒。
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问
我想找一些预测实验依据的网站或者软件?求助
461 围观
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问
做RNA转染实验时铺板的时候需要在无RNA酶的环境下操作吗
whilt-shirt
需要的,RNA酶会裂解RNA导致转染效率低或者失败
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510 围观
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问
蛋白分子量标准品200kD的条带经常分层,如何解决呢?
whilt-shirt
选用浓度更低的胶,比如8%或者6%,marker选10-250kd
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481 围观
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问
DNA检测时,蛋白消化效果怎么评估?
天一湖医者
对消化后的蛋白残留量进行评价WB比较好。
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问
树突状细胞的流式细胞分析
bamboopiggy
你如果没有做过,最好找平台的老师帮你弄,做好阴性对照。阴性对照和阳性结果之间会有很明显的差异的。
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