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基于病毒载体的不同基因调控方式的原理和选择

1. 病毒载体可以进行哪些方面的基因操作?基因功能研究主要涉及功能获得和功能缺失,功能获得主要包括外源的过表达,内源性激活,功能缺失主要包括基因干扰和敲除等。借助病毒载体可以进行基因过表达、干扰、敲除和内源性激活等操作,其中基因包括编码基因和非编码基因。2 不同基因调控方式的原理外源过表达:基因功能研究中通常需要上调目的基因的表达来观察表型的变化。过表达是将目的基因在宿主细胞大量表达的过程,其基本原理是将目的基因构建 ...

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慢病毒载体基础知识及应用

1.慢病毒载体概述慢病毒载体(Lentivirus)是一类改造自人免疫缺陷病毒(HIV)的病毒载体,是逆转录病毒的一种,基因组是RNA,其毒性基因已经被剔除并被外源性目的基因所取代,属于假型病毒。可利用逆转录酶将外源基因整合到基因组中实现稳定表达,具有感染分裂期与非分裂期细胞的特性。慢病毒基因组进入细胞后,在细胞浆中反转录为DNA,形成DNA整合前复合体,进入细胞核后,DNA整合到细胞基因组中。整合后的DNA转录 ...

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MCD饲料诱导大/小鼠NASH模型的对比研究

非酒精脂肪性肝炎(NASH)是一种无过量饮酒,以肝脏细胞脂肪变性、气球样变、弥散性肝小叶炎症为主要临床病理特征的综合征。它是非酒精脂肪性肝病(NAFLD)发展为肝硬化和肝癌的一个重要阶段。据报道 NAFLD 在发达国家的发病率表现为成人 30%、儿童 13%,其中大约有 10% 的 NAFLD 患者发展成为 NASH,而 NASH 患者中的 10% 会发展成为肝硬化,甚至肝癌。非酒精脂肪性肝炎已经成为研究的焦点,然而 NASH 的发病机制尚未明确,研究发现其与胰岛素抵抗、氧化 ...

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AAV 和 LV 载体在神经系统中的应用

病毒是由核酸分子(RNA 或 DNA)和 / 或蛋白质组成的非细胞形态,这是一种无法独立生长的生命体,其复制过程必须通过感染宿主细胞,将遗传物质导入宿主细胞,并依靠宿主细胞进行复制,组装成病毒颗粒。对病毒的研究可以分为「抗病毒」和「利用病毒」两种思路,而病毒载体正是「利用病毒」的思路。二十世纪七十年代,分子生物学家 Paul Berg 利用病毒的这一特性,改造 SV40 病毒感染猴子肾脏的培养细胞,做成第一个病毒载体。后来,科学家们开始从利用自然界中存 ...

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同天两篇 Science,揭晓 miRNA 靶向降解机制,解了悬而未决近 30 年的谜题

背景介绍:MicroRNAs (miRNAs) 是一类由内源基因编码的长度约为 22 个核苷酸的非编码单链 RNA 分子,参与转录后基因表达调控,抑制信使 RNA (mRNAs)。Argonaute (AGO) 蛋白是 RNA 介导的转录后基因调控的关键蛋白,为 miRNA 提供锚位点,形成 RNA 诱导沉默复合体 RISC 达到降解靶基因或者抑制翻译的目的。 自 1993 年 miRNAs 被发现以来,研究人员已经积累了数百种不同 miRNA 分子及其生成、成熟在发育、生理和疾病中的作用机制。尽管人类早已明确 ...

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聊一聊血清学研究中的表面封闭剂

Serologic assays are a very important method of detecting antibodies in the bodily fluids of patients and have a broad applicability in confirming a patient’s immunological response to an infection or a vaccination. When new pathogens like SARS-CoV-2 emerge and spread epidemically arou ...

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Nature 子刊:头秃元凶「真面目」首次被揭穿,鹅厂程序员立功了

Nature 子刊:头秃元凶「真面目」首次被揭穿,鹅厂程序员立功了好消息,好消息。打工人的噩梦,脱发的元凶,它的高清大头照现在科学家扒!出!来!了! 就是它,脱发之源 SRD5A2(II 型 5a 还原酶)↑↑↑这是 SRD5A2 的高分辨率三维蛋白质结构首次被破解,并且分辨率达到了 2.8 埃(1 埃 = 10-7 毫米)。也就是说,疗效更好的防脱新药,现在有了研发的关键靶点。同时,知名治脱药物「非那雄胺」的防脱机制也在这项研究中被揭示。这一来自南科大(Zhiyi Wei's lab)、匹兹 ...

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她被医生私自摘取组织,帮全球科研人发了 6 万篇论文,时隔 70 年才获得科学界的赔偿

「我会相信一切都有尽头…… 没有什么永垂不朽……」写这句歌词的人,大概不知道 HeLa 细胞系。这个没有生命尽头(无限分裂)的细胞系以一己之力奠定和推动了现代癌症、遗传学、病毒学和空间微生物等学科的进步,没有什么比它更能永垂不朽。一个无意的举动造就了一株永生的细胞系1951 年,在约翰・霍普金斯医院里,一位名叫 Henrietta Lacks 的女黑人被诊断为宫颈癌。约翰・霍普金斯的研究人员 George Otto Gey 博士按照往常的操作流程,从她的宫颈 ...

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有个在 Nature 子刊论文致谢里求婚的男友,是什么体验?

说起「凡尔赛文学」,大家不一定十分熟悉,但大家不熟悉,并不影响它的火。是的,这两天,凡尔赛文学突然又火了起来,从微博热搜到新闻头条,在互联网的每一个角落里,各种凡学语录,比比皆是。「凡尔赛文学」,又称「凡学」,是网友对于热衷于通过先抑后扬、自问自答或第三人称视角,不经意间露出「贵族生活的线索」的人的调侃。一些网络社区,尤其是某书、某乎,因其较高的含「凡」度,成为了网友的调侃对象。事实上,科研圈虽然是科研狗的聚集地,但是只要想「凡」, ...

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高脂饲料诱导大鼠建立非酒精性脂肪肝模型

非酒精性脂肪肝(NAFLD)包含了一系列的疾病发展阶段,从一般脂肪变性进展到脂肪变性与炎症并发的非酒精性脂肪肝炎(NASH),随后进展为肝纤维化、肝硬化和肝癌。大多数肥胖的成年人有脂肪肝型态,他们的患病率达到 30% 以上,因此,NAFLD 的患病率会随着肥胖率的升高而升高。为研究 NAFLD 的发病机制并找出治疗方法,建立动物模型是至关重要的一步。科研人员大多利用高脂饲料诱导大鼠建立 NAFLD 模型,但近几年建立的 NAFLD 动物模型所采用的 ...

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WB 也有潜规则?内参不对,实验白费

即便新兴蛋白检测工具层出不穷,WB 的地位依旧坚挺,但要做好却并不简单。如何避免各种高背景、非特异性、假阳性结果?你可以从实验设计必备对照——「内参」里找到答案。什么是内参?内参是指一种高表达或广泛表达的蛋白,且在各组织和细胞中的表达相对恒定,可作为 WB 技术分析蛋白水平的标准化参考。为什么要使用内参?在 WB 开始之前,常使用生物化学测定法(例如 Bradford,BCA 等)测定样品中的蛋白总量,确保在各孔加入等量蛋白。内参可帮助确认所有样 ...

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如何正确的选择摇床振幅?

什么是摇床的振幅?摇床的振幅指托盘在做圆周运动时候的直径,有时候我们也叫“振荡直径”或“轨道直径”符号:Ø。作为标准,Infors提供振幅为3mm,25mm和50mm的摇床。什么是氧气传递效率(OTR)?氧气传递效率是指,氧气从大气中传入到液体中的效率。 OTR数值越高,氧传递效率越高。振幅和转速的影响这两个因素都会影响培养瓶中培养基的混合。 混合效果越好,氧传递速率(OTR)就越好。遵循这些指导原则,可以选择最适合的振幅和转速 ...

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绝处逢生,靳令经/李华/叶克强等开发双靶点抑制剂,间接靶向EGFR来治疗胶质母细胞瘤

胶质母细胞瘤是一种较为常见的致死性恶性脑瘤,约占原发性恶性脑瘤的 45.6% ,平均存活时间仅有 12 个月。胶质母细胞瘤常发生表皮生长因子受体(EGFR)过表达或突变,其中表皮生长因子受体 III 型突变体(EGFRVIII)是最常见的突变体。目前临床常用的 EGFR 靶向抑制剂已有三代,主要用于肺癌等癌症的治疗(NEJM:提前 2 年揭盲!吴一龙联合全球 284 个中心团队,发现手术 + 精准分型靶向治疗降低早中期肺癌术后 83% 复发风险)。第一代靶向药主要有易瑞沙、凯美 ...

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只因没选对它,WB、IF、IHC 统统都白搭....

科研生活总有熬不完的夜,别人养老鼠做实验,我养熊猫黑眼圈。实验的不顺遂,往往不是不够认真,而是没有使用好的工具。抗体是蛋白研究最常使用的工具,正所谓用对抗体早回家,用错抗体甭回家,选抗体就像挑媳妇,可是会影响后半实验的幸福。那要怎么挑选呢?2016 年 Nature 子刊建议的 5 种抗体验证方式,即是挑选抗体的金标准。一、啥是 5 大验证? 5 大验证包含基因敲除敲弱验证、比较抗体验证、免疫捕获与质谱分析、生物特性与正交策略、蛋白过表达策略五项验证方 ...

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断骨难愈合?中科院邹卫国等 Sci Adv 报道其中表观遗传学调控关键分子​

骨折常见于人体受到高冲击力或压力,以及骨质疏松症或一些癌症引起的骨损伤。一般情况下,骨骼具有快速有效自我修复的能力,但仍有 5% 到 10% 的病例在骨折后愈合不良,临床研究表明,糖尿病、甲状腺功能减退、衰老和血管疾病等都与骨折愈合缺陷有关。为了解决这一临床问题,需要进一步理解骨折愈合缺陷的机制,即调节骨再生所必需的信号通路。 初入 11 月,中科院生物化学与细胞生物学研究所(分子细胞科学卓越创新中心)邹卫国研究员连续在国际高水平杂志 JCI、S ...

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患病率可高达30%!​谭毅团队 Hepatology 报道 AMPK激动剂逆转非酒精性脂肪性肝病的机制

研究背景非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)正悄无声息的影响着全球大部分人的生活。据李红良教授 2019 年发表在 Hepatology 的文章显示,我国 NAFLD 患者数量在过去十年迅猛增长,涉及 200 多万人、392 项研究的 Meta 分析发现,我国的发病率已达到 29.2%!但是对于 NAFLD 的研究才只是「冰山一角」,致病机理相当复杂,同时也缺乏有效的治疗手段。成纤维细胞生长因子(FGFs)是广谱的促分裂原,在发育,代谢和组织稳态中起着至关重要的作用。FGF / FGF ...

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C. David/赵玉沛院士/吴文铭揭示「癌王发迹史」,为早期诊断与治疗提供潜在的靶点和思路

胰腺癌,因其难以早期发现且高致死率,被称为「癌症之王」。在许多组织中,致癌基因在组织干细胞中的激活,往往导致其癌变。但是相对于其它类型的组织来说,正常的胰腺细胞却很难被突变的 Kras 致癌基因所转化,即使超过 90% 的人类胰腺癌携带 Kras 基因突变 。 Kras 致癌基因除了在胰腺癌的发展早期非常重要,在胰腺癌阶段,甚至是转移的过程中都起到了非常重要的作用。研究发现,Kras 基因能够调控胰腺癌中大量的代谢通路和对胰腺癌的生存,增值所必须的信号 ...

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两个博士相亲,男博士私下一查发现对方多篇 SCI 在手,立刻慌了......

两个博士相亲,男博士私下一查发现对方多篇 SCI 在手,立刻慌了......近期,一段短视频在网上流传,描述了一位男博士在面对一位多篇 SCI 在手的女博士时,内心的慌张。当然,这个视频也从旁印证了「论文才是检验对方的最佳标准」,博士之间的相互了解,大都是从查一查对方有多少论文开始。但是,这一查,有时候就是「一念天堂,一念地狱」,面对一打论文在手的相亲对象,难免会生出一些自惭形秽的感觉。其实,这一切大可不必,科研人在脱单这个问题上自有其套路 ...

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常见的T细胞是αβ T细胞,那γδ T细胞又是什么细胞?

近日,Adicet Bio Inc. 宣布FDA已批准其ADI-001的IND申请,这是一种针对CD20的嵌合抗原受体(CAR)的异体γδ(gamma/delta)T细胞疗法,用于治疗非霍奇金淋巴瘤(NHL)。在肿瘤免疫细胞疗法中,我们最熟悉的是CAR-T,以及时下火热的CAR-NK和CAR-M疗法。小编在前几期的细胞疗法系列微信中,已经给大家介绍了CAR-M和CAR-NK的相关内容(点击橘色字体查看)。这一期,我们就来聊一聊这一“小众 ...

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这 才 是 科 研 打 工 人 的 真 实 面 目......

如果让你用一个词来形容科研人,你脑海里会浮现出什么? 科学家?高智商?闪闪发光?其实,这都是大家眼中的科研工作者,实际上,科研人不过是个搬砖狗而已,上上下下,左左右右,俨然都是一副「打工人」的模样。 接下来就让咱们来一起围观一波「科研打工人の真面目」。 01 学术追求 表面上的科研人: 什么 996 福报,咱们看不上,科研 007 才是我们的追求,实验乃真爱,论文是信仰实际上的打工人: 听说隔壁世一大不要求博士毕业必须发文章了,实名羡慕,好想再多摸一会鱼啊~02 金钱观 表 ...

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