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读硕读博期间，导师对自己的影响不言而喻。好导师个个相似，令人无语的导师各有各的不同，能够遇到好导师必然是三生有幸。那么，那些被导师辱骂过的研究生后来都怎么样了？笔者采访了多位有故事的同学，以下来自导师辱骂的5个关键词「没有资格、没有天赋、没有意义、没有未来、没有廉耻」的故事分享。 01 没有资格男 / 29 岁 / 上海科研不行，你没有资格谈恋爱今年是我读博的第 4 年，课题依旧没有稳定的数据和表型。看着实验室同级的女生已经开始着手写第 3 篇文章，我既羡慕又懊恼。同级不同命，同专业不同运这句话在我和她身上体现得淋漓尽致。导师对我越来越不满，在组会上反复打断我的发言，轻蔑的眼神像一根刺般插穿我的心。在这 40 余人的科研团队中，没有 SCI 论文的研究生就像没有子嗣的嫔妃，如何能获得他人的青眼？端午节后，见完异地女朋友的我被导师叫到办公室训话。他不耐烦地说道：像我这种知识分子家庭，我的儿子尚且努力拼搏，丝毫不敢懈怠。你这种小地方出来的农家子弟，怎么就不知道勤奋呢？导师一贯秉承先立业后成家的理念，在他眼里，我只是一个比寻常男生多了求学经历的穷小子，哪有资本谈恋爱呢？前路漫漫，即使艰难，我

何谓「幸福」？ 这是先贤从人类混沌懵懂时期就开始思考的问题。 无论是柏拉图在《理想国》中对幸福引发的深思，亦或是孔子「一箪食，一瓢饮，在陋巷，人不堪其忧，回也不改其乐」中所赞颂的幸福观。 每个人，对幸福都有自己的理解。 在哲学和心理学史上，无数学者都对「幸福」的本质与定义给出了自己的解读，也针对人类幸福感的得失进行了不同层面的探索。在分析工具更加发达的现代，科学家能够对幸福感给出更加准确的评判，也终于能够验证孔子的观点，那就是物质上的得失与生命中的逆境是否能够影响我们的幸福感。 菲利普·布里克曼图片来源：Wordpress 在这条道路上走的最远的学者中，有一位名叫菲利普·布里克曼 (Philip Brickman) 的心理学家。从博士生涯开始，菲利普就对幸福的获得产生了极大的兴趣，并花了十多年来探究这个问题。可就是这样一位对幸福无比了解的专家，在自己 38 岁事业巅峰时，选择了结束自己的生命。 幸与不幸 在多数欧洲的语言中，幸福与幸运是同一个单词。所以幸运似乎是幸福的充分条件，反之，不幸则会使人失去幸福。 这个观点在很多逻辑中似乎是不言自明的。 一位中了千万大乐透的幸运儿，与一位在事故

干细胞研究，是二十一世纪最火爆的研究领域之一。可同时，它也是学术丑闻最多的领域。从韩国首尔大学黄禹锡的胚胎干细胞造假丑闻，到日本小保方晴子的 STAP 事件，干细胞领域的造假，总是能造成极大的社会影响。 可今天我们要聊的，是诺贝尔奖的诞生地-瑞典的一次造假丑闻。这次事件，在科学史上的影响力虽不及 STAP ，却直接导致了 7 名患者的死亡！魔法般的入职 2015 年 10 月 6 日，当时任诺贝尔奖委员会秘书长 Urban Lendahl 在斯德哥尔摩公布屠呦呦获得诺贝尔医学奖时，这位给予人类最杰出科学家赞誉的学者，无法料到自己会因为给予一名科学家支持，而落到「引咎辞职」的地步。 Urban Lendahl在公布诺贝尔奖图片来源：诺奖官网 2010 年，Urban 与瑞典著名的卡罗林斯卡学院（Karolinska Institutet, KI ）高层决定聘用保罗·马基亚里尼（Paolo Macchiarini）。那时，欧洲学术圈都以为保罗这位来自意大利的科学家，给 KI 的领导层施加了什么魔法。 由于在意大利等国的黑历史，KI 在保罗应聘之初就收到了来自欧洲各国关于保罗的「黑料推荐信」

为帮助食品行业的小伙伴们，正确选择实验室检测用水，默克 Milli-Q® 特邀食品检测业内专家段效辉、李春华老师，以及默克Milli-Q®纯水应用专家李子超老师，为大家解读食品检测用水的选择和使用相关要求。为了让错过直播以及笔记没有记好的小伙伴们不留遗憾，Q博士专门为大家整理了直播中互动较多的话题和提问，快快收藏起来吧~​Q1:刚安装的水机七天内不建议验收，这个有出处吗？A1: 没有任何文件限制验收时间。但是，系统内部没有经过充 ...

「疤痕」，是成人伤口愈合的产物，也是万千仙女们痛恨的存在。 这种由过度纤维化导致的皮肤变化，在机制层面与肺部纤维化及心脏纤维化高度相似，如果我们能解决皮肤上的「疤痕」，就意味着我们也有了治疗心脏纤维化与肺部纤维化可能。 可正如肺纤维化与心脏纤维化无法治疗一样，无论市面的所谓的「祛疤」产品再怎么宣传，都无法真正解决成人皮肤受伤后的留疤问题。 学术界与工业界，也无时不刻不在探索治疗「疤痕」的办法。因为谁能解决疤痕问题，谁就能在美容市场中获得巨大的商业成功。 图片来源：Science 2021 年 4 月 23 号，来自斯坦福大学医学院的 Geoffrey C. Gurtner 团队与 Michael T. Longaker 团队联合在 Science 发表了题为 Preventing Engrailed-1 activation in fibroblasts yields wound regeneration without scarring 的论文 [1]，报道了他们如何通过抑制特定谱系成纤维细胞的激活，来彻底避免小鼠疤痕的形成。为爱美人士梦寐以求的「无疤愈合」，带来了可能。 研究内容：

1 样品RNA的抽提①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的氯仿，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚氯仿相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其完全溶解，获得的RNA溶液保存于-8

实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。具体操作：1. 将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板。2. 将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间，静置3min，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。3. 计算板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按公式计算：细胞数/mL=四大格细胞总数/4×104说明：公式中除以4，因为计数了4个大格的细胞数。公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为：1.0mm（长）×1.0mm（宽）×0.1mm（高）=0.1mm3 而 1ml=1000mm3（注意：镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液）

免疫荧光技术是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。它是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光基团，再用这种荧光抗体（或抗原）作为探针检查细胞或组织内的相应抗原（或抗体）。利用荧光显微镜可以看见荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质和定位，以及利用定量技术（比如流式细胞仪）测定含量。 免疫荧光实验的主要步骤包括细胞片制备、固定及通透（或称为透化）、封闭、抗体孵育及荧光检测等。细胞片制备（通俗的说法是细胞爬片）是免疫荧光实验的第一步，细胞片的质量对实验的成败至关重要，原因很简单，如果发生细胞掉片，一切都无从谈起。这一步关键的是玻片（Slides or Coverslips）的处理以及细胞的活力，有人根据成功经验总结出许多有益的细节或小窍门，非常值得借鉴。固定和通透步骤最重要的是根据所研究抗原的性质选择适当的固定方法，合适的固定剂和固定程序对于获得好的实验结果是非常重要的。免疫荧光中的封闭和抗体孵育与其它方法（如ELISA或Western Blot）中的相同步骤是类似的，最重要的区别在于免疫荧光实验中要用到荧光抗体，因

流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）是一种对液流中排成单列的细胞或其它生物微粒（如微球，细菌，小型模式生物等）逐个进行快速定量分析和分选的技术。作为应用流式细胞术进行检测的技术平台，现代流式细胞仪产生于上世纪六七十年代。经过近四十年的发展和完善，今天的流式细胞仪已经十分成熟，并被广泛的运用于从基础研究到临床实践的各个方面，涵盖了细胞生物学、免疫学、血液学、肿瘤学、药理学、遗传学及临床检验等领域，在各学科中发挥着重要的作用。流式细胞术 - 概述一种在液流系统中，快速测定单个细胞或细胞器的生物学性质，并把特定的细胞或细胞器从群体中加以分类收集的技术。其特点是通过快速测定库尔特电阻、荧光、光散射和光吸收来定量测定细胞 DNA含量、细胞体积、蛋白质含量、酶活性、细胞膜受体和表面抗原等许多重要参数。根据这些参数将不同性质的细胞分开，以获得供生物学和医学研究用的纯细胞群体。目前最高分选速度已达到每秒钟3万个细胞。现代流式细胞术综合了流体力学技术、激光技术、电子物理技术、光电测量技术、计算机技术、荧光化学技术及单克隆抗体技术，是多学科多领域技术进步的结晶。随着现代科技的高速发展，为了满

Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。深圳子科生物技术部主要通过以下几个方面来详细地介绍一下Western Blot技术：一、 原理与 Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝 酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗 体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋 白水平的表达。二、分类western显色的方法主要有以下几种：i. 放射自显影ii. 底物化学发光ECLiii. 底物荧光ECFiv. 底物DAB呈色现 常用的有底物化学发光ECL和底物DAB呈色，体同水平和实验

一、荧光素酶报告基因的检测原理荧光素酶（Luciferase）是生物体内催化荧光素(luciferin)或脂肪醛(firefly aldehyde)氧化发光的一类酶的总称，来自于自然界能够发光的生物。自然界存在的荧光素酶来自萤火虫、发光细菌、发光海星、发光节虫、发光鱼、发光甲虫等。细菌荧光素酶对热敏感，因此在哺乳细胞的应用中受到限制。目前，以北美萤火虫虫(Photinus pyralis)来源的荧光素酶基因应用的最为广泛，该基因可编码550个氨基酸的荧光素酶蛋白，是一个61kDa的单体酶，无需表达后修饰，直接具有完全酶活。发光机制生物荧光实质是一种化学荧光。萤火虫荧光素酶在Mg2+、ATP、O2的参与下，催化D2荧光素(D2luciferin) 氧化脱羧，产生激活态的氧化荧光素，并放出光子，产生550～580 nm 的荧光，其化学反应式如下。这种无需激发光就可发出偏红色的生物荧光，其组织穿透能力明显强于绿色荧光蛋白(GFP)。荧光素酶是靠酶和底物的相互反应发光，特异性很强，灵敏度高，由于没有激发光的非特异性干扰，信噪比也比较高。二、荧光素酶报告基因的检测流程1、重组质粒制备: 制备含有

常见限制性内切酶识别序列(酶切位点)（BamHI、EcoRI、HindIII、NdeI、XhoI等） 在分子克隆实验中，限制性内切酶是必不可少的工具酶。 无论是构建克隆载体还是表达载体，要根据载体选择合适的内切酶（当然，使用T载就不必考虑了）。先将引物设计好，然后添加酶切识别序列到引物5' 端。常用的内切酶比如BamHI、EcoRI、HindIII、NdeI、XhoI等可能你都已经记住了它们的识别序列，不过为了保险起见，还是得查证一下。 下面是一些常用的II型内切酶的识别序列，仅供参考。先介绍一下什么是II型内切酶吧。 The Type II restriction systems typically contain individual restriction enzymes and modification enzymes encoded by separate genes. The Type II restriction enzymes typically recognize specific DNA sequences and cleave at constant posit

梅雨季节，听着外面淋淋沥沥的雨声，静静地了解最新学术进展，也是一件舒心的事。 1. Cell：鉴定出肾癌复发新的潜在标志物 肾透明细胞癌是免疫原性肿瘤，复发率为 40%。2021 年 5 月 20 日，来自美国哥伦比亚大学的 Charles G. Drake 教授团队在 Cell 杂志上发表了研究论文 Single-cell protein activity analysis identifies recurrence-associated renal tumor macrophages。该工作发现 TREM2/APOE/C1Q 阳性巨噬细胞浸润是肾透明细胞癌的潜在预后生物标志物，能够作为一个候选治疗靶点。 图 1：来源 Cell 2. Cell Research：揭示代谢物诱导焦亡的新机制 细胞命运与代谢稳态密切相关。 2021 年 5 月 19 日，厦门大学吴乔教授团队在 Cell Research 杂志上发表研究论文 The metabolite α-KG induces GSDMC-dependent pyroptosis through death receptor 6-ac

背景介绍众所周知，几乎所有动物都遵循与日照相关的昼夜节律。自然光的周期变化会带动饮食和睡眠等有「节律」的行为。生物钟使动物体的生理过程与昼夜光周期同步，从而可以预测环境的变化。在哺乳动物中，生物钟是由复杂的转录因子网络，在 24 小时的周期内驱动基因「有节律」的表达而实现的。生物钟几乎存在于机体所有组织中，并通过来自大脑「中央时钟」的神经元和激素信号与实现与环境光周期的同步。肠道中的许多生物过程均表现出由生物钟产生的日常节律效应。然而，肠道的独特之处在于它的许多昼夜节律同样也需要肠道微生物群的参与。例如，微生物群与生物钟协调，在控制脂质代谢的基因表达中产生节律。摄食过程中动物会接触环境中或与食物有关的微生物，因此进食行为也会对食源性病原体产生有「节律」的接触。为了防止感染，哺乳动物肠道上皮会产生先天免疫效应物，包括抗菌蛋白（AMP）。这表明肠道先天免疫同样可能表现出「昼夜节律」特征。尽管近年来相关研究对微生物群-时钟相互作用如何调节代谢的了解越来越多，但我们对这些相互作用如何调节肠道先天免疫知之甚少。在最近一项研究中，来自美国德克萨斯大学西南医学中心的 Lora V. Hooper 课

大脑是神经系统的最高级部分，由左、右两个大脑半球组成，两半球间有横行的神经纤维相联系，结构和功能十分复杂。从大脑这个复杂的系统中获得清晰的、高分辨率的图像信息，同时保持理解系统功能所需的全局视角，是生物学的一项挑战 [1]。近年来，国内外对于脑功能结构的研究日渐增多，脑科学成为研究热点。但由于大脑结构复杂，神经元众多且交联复杂，无法直观明确地看到大脑完整的结构。科学家们要构建单细胞分辨率的脑图集，必须准确识别整个大脑中的细胞 [2]。研究者通过将脑组织染色，显微镜下观察从而得到脑组织中神经元、胶质细胞之间的网络结构图，但脑组织中的脂质、血细胞等成分阻碍了对于神经系统和大脑结构的观察，所以透明化是十分有必要的。但传统的方法，如冷冻切片存在明显的缺点，无法观察连续的 3D 层面上的结构网络，工作量大且破坏神经组织，拍摄成像速度慢，一般至少需要数周，所以需要建立完整的大脑透明技术。BABB, DISCO, CLARITY, PACT/PARS, CUBIC 和 Scale 等在内的有效的组织清除方法的最新发展 [3-8]，可以与光片荧光显微镜结合使用对成年小鼠大脑进行快速高分辨率成像 [9-

导读RAS 是肿瘤患者中最常见的致癌基因之一，目前包括 KRAS、NRAS 以及 HRAS 三种亚型。其中，NRAS 突变多见于黑色素瘤和急性髓系白血病，HRAS 突变多见于膀胱癌和头颈癌，而 KRAS 突变比其他两种更常见，最常发生在肺癌、胰腺癌以及结直肠癌。由于在癌症中的 Ras 蛋白经常发生突变，因此 Ras 突变成为了科学家们着力攻克的热点。RAS 曾被医学界称为「不可成药靶点」，科学家们在研究有效的 RAS 抑制剂方面已经摸索尝试了 30 余年，直至近几年才获得了重大进展。当前已经开发了多种针对 Ras 突变的共价靶向药物，但大多数停滞在临床前阶段，因为这些药物对 Ras 亚型没有选择性，而给身体带来了极大的副作用。因此，亟需开发新的 Ras 的非共价靶向治疗策略。Ras 突变可能导致其异常激活，这种激活过程是通过 Ras 特异性鸟嘌呤核苷酸交换因子 Sos（Son of sevenless）催化的。Sos 通过特定的结构与野生型和致癌型 Ras 接触，形成非共价结合，以调节下游信号传导。因此，针对 Sos 介导的 Ras 抑制剂的设计将成为癌症干预的有效策略，而纯天然的 R

自身免疫性疾病是免疫系统对自身抗原做出免疫反应从而导致自身组织损伤或功能障碍而引起的一系列疾病。由于自身免疫性疾病的确切发病机制尚不清楚，目前也只是进行早期治疗干预，以防止疾病的发展。来自瑞典卡罗琳斯卡大学医院及研究所妇女儿童健康中心的 Petter Brodin 教授领衔的研究团队在 Cell 发表了题为 Bifidobacteria-mediated immune system imprinting early in life 的研究性论文。研究结果表明：新生儿的肠道菌群会影响其自身免疫系统的发育，而减少全身炎症的关键窗口期就在于出生后的几个月时间里。研究中通过额外补充双歧杆菌，可以协助新生儿消化吸收母乳中的人乳低聚糖（HMO），其代谢产物可以调节免疫细胞的发育。图片来源：Cell背景介绍肠道微生物与人体健康息息相关，肠道微生物对宿主的影响主要与微生物代谢有关，而肠道微生物的组成也会影响其代谢行为。随着年龄的增长，肠道微生物在体内多样性和组成会随之变化，肠道微生物多样性在儿童时期逐渐增加，然后在青春期和成年期达到相对稳定的状态。通常，定植于肠道的微生物主要帮助代谢外源和内源性物质为

导读染色体是细胞生命活动的物质结构基础，与多种细胞过程息息相关，如基因表达、DNA 修复和染色体分离，其正确折叠至关重要。所有细胞都须将自身的基因组通过折叠压缩在一个小体积空间当中。与真核细胞不同，细菌细胞没有核膜，并且不会将其染色体 DNA 包装成类似于核小体的重复结构单元。然而，它们仍然折叠并集中它们的染色体物质，形成一个动态的、有组织的 DNA 网络，称为类核（nucleoid）。近日，美国耶鲁大学 Christine Jacobs-Wagner 研究小组在 Cell 杂志上发表了题为 Interconnecting solvent quality, transcription, and chromosome folding in Escherichia coli 的论文，揭示了大肠杆菌中的染色体折叠规律。图片来源：Cell在本研究中，作者采用细胞的简单聚合物物理学视角，将细胞质视为聚合物溶液，其中聚合物是 DNA，溶剂是细胞质中的其他所有物质（例如，水、代谢物、蛋白质、核糖体和 RNA）。根据聚合物-溶剂相互作用，溶剂的质量大致分为三种类型：理想、良好和差。在良好效应的溶剂中，

不知不觉几年下来自己也快毕业了，感谢丁香园这些年来的帮助。没有什么可回报的东西，就发个帖教教新人如何设计引物吧，尽量做到手把手的教，图文并茂。引物设计的帖子不少，以前很多战友会推荐Oligo、PrimerPremier、DNA man等等软件。这些软件设计完最后还是要去BLAST比对下，所以我教大家一种易懂实用的在线设计方法，觉得好的话请投个票。就以人的PTEN基因为例，首先你要找到他的基因序列，如果你要用的是cDNA，就找它的mRNA序列。如果你要做的是DNA，就找DNA的序列。以cDNA为例，普遍的一种方法是上PUBMED中GENE栏搜索找到cDNA那栏，但PUBMED导出序列不太方便，我介绍个网站 http://asia.ensembl.org/index.html1. 输入目的基因，进入2.在左侧栏选择TRANSCRIPT，选择后进入3. 选择PTEN-001中的TRANSCRIPT进入，点击左侧cDNA4. 然后点击CONFIGURE THIS PAGE进入设置你要显示的内容5. 除了第一栏SHOWEXONS选择YES外，其他的都选择NO，然后取个名字保存SAVE CONFI

那么如何通过改变抗体稀释液的配方，寻求抗体孵育的最佳条件呢？首先要认清，抗体稀释液没有一个绝对通用的配方；一种抗体一个脾气。其次，抗体稀释液的配方要兼顾与特异性抗体竞争抗原的强度，以及对其他区域的封闭强度两方面的平衡。目前，抗体稀释液中可以充当封闭蛋白的主要有milk，BSA和gelatin，似乎很少的样子 。。。可是，你有没有考虑过“复方”？--这下配方无限多了吧。1. 采用milk，BSA和gelatin的单方。3% milk，5% BSA，<=0.4%的gelatin，并根据实际情况改变（若出现白板，请降低封闭剂浓度。；黑板多加）。gelatin大家可能比较陌生，不过如果你翻翻抗体公司卖给你的原装抗体里面液体的配方，你会发现很多抗体溶液里都有它。2.很多情况下单方的浓度很高了，背景问题仍不能解决。那么请尝试两两或者三种不同比例混合。不过有些细节还是要自己摸索的，比如gelatin＋BSA时，gelatin浓度不能无限提高（会完全竞争掉抗原抗体特异性结合，导致白板），BSA的浓度较随意。3.抗体稀释液可用低盐浓度的TBST，也可用高盐浓度的缓冲液（NaCl 0.5M）以降低背