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20世纪50年代Watson和Crick提出了DNA双螺旋结构模型，标志着分子生物学作为一门独立学科的诞生，70年代以来，分子生物学已成为生命科学领域最具有活力的学科前沿。由于分子生物学理论和技术方法不断地被应用于临床，在疾病和预防、预测、诊断、疗效地评价等多方面发挥着愈来愈重要的作用。分子生物学与临床医学的广泛交叉和渗透，产生了一个崭新的学科方向—分子医学；70年代末，美国科学院院士 ...

一、Chelex-100法提取生物检材中的DNA Chelex 100能有效除去非核酸有机物，主要用于提取全血或血痕、精液或精斑、混合斑、毛发、培养细胞等。但因生物样本来源不同其操作方法有所差异，以下分别介绍: （一）全血 (1)取3～10μl全血加到0.5ml离心管中，加人500μl纯水，剧烈振荡，室温下放置15分钟。 (2)13000rpm离心3分钟，去上清，收集沉淀。（必要 ...

【摘 要 】FISH技术是80年代开始发展起来的一种新的定位技术。在人类基因组研究中得到了广泛的应用。通过中期染色体的FISH可以进行SCP，Cosmid和YAC的染色体定位，嵌合克隆的鉴别；通过间期核的FISH可以在50kb的分辨率下进行基因作图；最新的研究进展已可以进行伸展的染色质丝（chromatin fibre）的FISH，直接测量基因的长度，从而达到高精度基因作图的目的，总之，随着FIS ...

本方法有多种用途，主要包括： 从琼脂糖凝胶中分离纯化DNA片段； 从DNA反应物中纯化目的DNA片段，如回收纯化PCR产物、酶切连接反应中的DNA片段； 从探针制备反应物中去除未标记上的核苷酸以及小的DNA片段（比如引物）； DNA浓缩、去盐及去除杂质。 本试剂盒的主要成分“基因纯”试剂是无毒、无味、无腐蚀作用的白色颗粒，能专一性结合0.2kb到50kb大小的DN ...

1 主要配制试剂 1）0.5M Na2EDTA PH8.0 2) Proeinase K(20 μg/μl) 3)6M GuSCN 10ml GuSCN 7.2g 加D·W至10ml 水浴60℃～65℃溶解 4） 二氧化硅悬浮液（Silica susponsion、用前混匀） Silica 12g加D、W至100l ↓ 充分混匀置于100ml量筒内 ...

同步双酶切是一种省时省力的常用方法。选择能让两种酶同时作用的最佳缓冲液是非常重要的一步。NEB每一种酶都随酶提供相应的最佳NEBuffer，以保证100%的酶活性。NEBuffer的组成及内切酶在不同缓冲液中的活性见《内切酶在不同缓冲液里的活性表》及每支酶的说明书。能在最大程度上保证两种酶活性的缓冲液即可用于双酶切。由于内切酶在非最佳缓冲液条件下的切割速率会减缓，因此使用时可根据每种酶在非最优缓冲 ...

下面的简单方案是Clhen等（1972）所用方法的变通方案，常用于成批制备感受态细菌，这些细菌可使每微克螺旋质粒DNA产生5x106-2x107个转化菌落，这样的转化效率足以满足所有在质粒中进行的常规克隆的需要。该方法完全适用于大多数大肠杆菌菌株，并且比方案I快速，重复性更好。该法制备的感受态细胞可贮存于-70℃，但保存时间过长会使转化效率在一定程度上受到影响。 1）从于37℃培养16-20小时 ...

一、 病毒标本中提取DNA(支原体、腺病毒)处理方法 （1）将擦拭过的咽拭纸放入1.5ml装有1ml生理盐水的eppendorf管中。 （2）以10000r/min离心5分钟，去上清液。 （3）沉淀物加入30 ml TE液混匀后煮沸10分钟，4℃保存备用。 二、 从细菌中提取DNA 1．NG（淋球菌）DNA的提取 标本可取自尿道、生殖道或结膜分泌物。 （1）取男性尿道口或女性宫颈处分 ...

一、目的 掌握从动物组织中DNA基本原理和方法，了解利用电泳技术分离、鉴定核酸的原理和方法。 二、原理 真核生物DNA主要以核蛋白形式存在于细胞核中，因此制备DNA必须先粉碎组织，裂解细胞膜和核膜，使核蛋白释放，在除去蛋白质、脂类、糖类和RNA等物质，得到纯化的DNA。在本实验的提取DNA反应体系中，SDS（十二烷基磺酸钠）破坏细胞膜和核膜，并使蛋白质变性，将核蛋白中的DNA与蛋白质分开，ED ...

TSS方法制备感受态细菌（又称一步法） 一、 准备工作 1、 缓冲液1×TSS的配制： 事先配制1M的氯化镁――20.3g氯化镁(6分子水结晶)/定容于100ml去离子水后封装，不用灭菌。 取干净的100ml 量筒和100ml 烧杯，用量筒量取100ml去离子水，加入至烧杯中，取 1 g 蛋白胨，0.5g 酵母抽提物，0.5g 氯化钠，10 g PEG(MW= 3350) 5ml DM ...

DNA Extraction from Archival Formalin-fixed Paraffin-embedded Tissue Sections Author: Shi et al. Source: Contributed by APostodoc Abstract: Describes two methods of extracting DNA from archived paraff ...

The Minion Lab College of Veterinary Medicine at Iowa State University http://mycoplasmas.vm.iastate.edu/lab_site/methods/DNA/SmaIvector.html ...

Has anyone used CTAB to remove polysaccharide during DNA extraction? I tried to use it under high NaCl but have had coprecipitation problem. My lysis buffer contains Tris EDTA NaCl and SDS. After solv ...

Table of Contents 10X TBE 40% Acrylamide Stock Alkaline lysis solution 10X TBE: 216 g Tris base 110 g boric acid 16.6 g EDTA Add water to 2 liters. 40% Acrylamide/Bisacrylamide (40% A&B): 38 ...

Purification of PCR fragments for cloning (adapted from Bruce A. Roe Department of Chemistry and Biochemistry The University of Oklahoma Norman Oklahoma 73019 broe@ou.edu) After an aliquot of the PCR ...

稀释限制性内切酶时，建议使用稀释缓冲液（A，B，C）。建议临用前稀释且稀释终浓度不要小于1000 units/ml。目录及说明书中标注了每一种内切酶相应的稀释兼容性。 注：以下稀释液不适用于耐热DNA聚合酶。欲了解稀释耐热DNA聚合酶的相关情况，请参见相应章节。 稀释缓冲液成份： 稀释液A： 50 mM KCl 10 mM Tris-HCl 0.1 mM EDTA 1 mM DTT 200 &m ...

Most recent version of protocol: 2/14/96 Dr. Paul J. Zambino Research Plant Molecular Pathologist U.S.D.A. Forest Service North Central Forest Experiment Station Forestry Sciences Laboratory 5985 Hwy. ...

Has anyone any experience of using a semi dry blotter for Southern blotting. At present I am tranfering overnight using a weight I think there is a blotter that is suitable for nucleic acids and can t ...

Quick question as I have read all sorts of views on this before: How long can bisufite-treated DNA be stored in -80℃ freezer before it degrades. Is there any reason why it should degrade quicker than ...

Reagents: Soln 1: 50 mM glucose/10 mM EDTA/25 mM Tris pH 8. Autoclave before use. Add 2 mg/ml Lysozyme just prior to use. Soln 2: 0.2 N NaOH/1% SDS. Keep solution at room temperature. Solution is norm ...