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一、概述 ...

【基本原理】 此试剂盒用于质粒DNA小量纯化。该试剂盒采用了传统的SDS碱裂解法，结合DNA制备膜技术，具有高效、快速、方便之特点，全套操作只需1小时便可完成。 使用本试剂盒可从1-4ml 的过夜培养的菌液中纯化得到1～20μg的高纯度质粒DNA，此质粒DNA可直接用于DNA序列分析以及各种酶促反应等。 【器材】 1．离心机 2. Spin Column 3. Collection Tu ...

在已知基因部分核苷酸序列或全部核苷酸序列的情况下，基因的制备方法主要可分为两大类：一类是基因化学合成法，一类是基因生物制备法。一般又可将基因生物制备法分为文库法、cDNA 文库法和PCR法等。 1 化学合成法。 就化学本质而言，基因是一段具有特定生物功能的核苷酸序列。如果知道了基因的分子结构，就可以进行基因的化学合成。有关DNA 的化学合成方法主要有磷酸二酯法、磷酸三酯法、亚磷酸三酯法、亚磷酸酰胺 ...

7.1. ...

1) 取10μl待测DNA，于一定浓度的琼脂糖凝胶上进行电泳。(20mL，1.0%凝胶) 2) 凝胶用溴化乙锭染色，切掉凝胶四周多余部分，并在凝胶的一角作一记号， 拍照记录电泳结果(拍照时， 凝胶旁放一尺子)。 3) 杂交用胶的制备 (做以下步骤两组合一) A. 将凝胶浸没入30mL 0.25mol/L HCl溶液中15min，使DNA脱嘌呤。 B.用蒸馏水短暂洗凝胶2次。 C. ...

临床医生了解基因诊断质控指标的含义，对于合理地选择检测方法和正确地分析与解释结果有很大的价值。 1．灵敏度 简单地说，灵敏度就是检测的最小值。一般来说，我们希望某一种检测技术的敏感度越高越好。理想地，病原体分离培养时能从待测标本中找到一个细菌或一个病毒颗粒或其他任何一个病原体；免疫学检测时，能测出一个抗原或抗体分子，等等，但这些通常都很难做到。然而基因检测则能达到这个理想境界，但在临床实践中，我 ...

This kit contains materials for six groups to perform Southern transfer and hybridization analysis using the included lambda DNA samples and biotinylated probe. The intellectual objective of the exper ...

1.Excise DNA section from gel into eppendorf tube. 2.Add 2-3 volumes of NaI (NaI for geneclean - dissolve 89.9 g NaI in 100ml dH2O store in light proof bottle) solution to gel fragment (best to be on ...

Purp ...

限制和修饰现象在上个世纪中期被人们所发现，到 2005年1月，已经发现4342 种限制酶和甲基化酶，其中限制酶有3681 种。限制性内切酶有特定的识别位点和切割位点，切割后可产生平末端或粘性末端。酶切有标准的反应体系，受末端长度的影响，有位点偏爱性，在极端非标准条件下会产生星星活性。通过酶切连接可以增减酶切位点，酶切位点在基因组中的分布是不均匀的。大肠杆菌有三种甲基化酶和三种依赖于甲基化的限制系统 ...

快速细胞破碎法实验步骤： 1、 挑取转化平板上的单菌接种于含相应抗生素的2ml LB中，37℃振荡培养至A590值为0.6～0.8。 2、 取1ml菌液至1.5ml Eppendorf管中，9000rpm离心9min，去尽上清。 3、 加入70μl Cracking Gel缓冲液20%SDS 10ml，250mmol/L EDTA 1.6ml蔗糖27.2g，1.2%溴酚蓝1.67ml，加双 ...

Adapted from Frommer et.al.* 1.Dilute DNA (up to 2 mg) into 50 ml with distilled H2O. 2.Add 5.5 ml of 2M NaOH. 3.Incubate at 37℃ for 10 minutes (to create single stranded DNA). 4.Add 30 ml of 10 m ...

1. Pick a single colony from a streak plate and inoculate 25 ml of LB with appropriate antibiotic. Incubate overnight. 2. Get an ice bucket ready and put buffer P3 (stored in 4℃) in it. Pour the cultu ...

Hey folks I need Help!! Please! I have to put a 3.5 kB fragment into a 6.5 kB vector. The vector has a Km resistance gene. I use invitrogen chemically competent cells. This is what I do: I PCR amplify ...

采用地高辛高效标记混合物(ROCHE) 标记DNA探针 将10 ng~3μg的DNA探针（基因组、质粒或基因片段）用蒸馏水稀释至16μl 煮沸10分钟使DNA变性，迅速放在冰上冷却，以防其重退火。 加入4μl地高辛高效标记混合物，振荡混匀 37℃下过夜培养 加入2μl 0.2M EDTA (pH 8) 使反应停止，并于65℃ 下10min加热降低其活性。 使用前煮沸探针10 ...

本方法由DellaportaWood和Hicks(1983)的方法修改而成。其基本原理是研磨的组织细胞用热的SDS裂解后，加入高浓度的KAc，0℃放置以除去蛋白和多糖类杂质，最后用乙醇或异丙醇沉淀。 一 材料、试剂和仪器 1 材料 新鲜的组织材料或-80℃冻存的材料 2 试剂 (1)提取缓冲液 Tris-HCl 100mmol/L（pH8.0） EDTA 50mmol/L （pH8.0） NaCl ...

一 酶切和电泳 在200 μl 微量离心管中加入： 25 μl DNA样品(约10μg)， 3μl 限制性内切酶（MBI，10 U/ μl） 5 μl 相应的10×buffer， 补水到50μl。 然后加一滴矿物油覆盖 稍微离心后放于37℃水浴8-12小时。酶切完后，取5μl 酶切DNA样品于0.8%的琼脂糖凝胶上检测酶是否充分。如果酶切 ...

1. 质粒制备的基本原理是什么？ 答：做过分子生物学实验的大多数做抽提过质粒，但不是所有人都知道质粒制备的基本原理。所以有必要做一个说明，能帮助您了解和解决实验过程中遇到的一些问题。制备质粒最常用的方式是碱裂解法。质粒被转化到细菌中，单菌落接种到含有特定抗生素的培养基中，一般培养到细菌生长的平台期离心收集细胞；细菌用悬浮液（Solution I 内含RNase A）悬浮细胞，用SDS-NaOH ...

限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上，并切割双链DNA。它可分为三类:Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作用且依赖于ATP的存在。Ⅰ类酶结合于识别位点并随机的切割识别位点不远处的DNA，而Ⅲ类酶在识别位点上切割DNA分子，然后从底物上解离。Ⅱ类由两种酶组成: 一种为限制性内切核酸酶(限制酶)，它切割某一特异的核苷酸序列; 另一 ...

限制性核酸内切酶 ：识别DNA特定序列，切断DNA链 ； DNA聚合酶Ⅰ： 或Klenow 1、缺口平移制作标记DNA探针； 2、合成cDNA的第二链； 3、填补双链DNA3’凹端； 4、DNA序列分析耐热DNA聚合酶（Taq DNA聚合酶等） 聚合酶链反应（PCR）； DNA连接酶： 连接两个DNA分子 ； 多核苷酸激酶 ：催化多核苷酸5’羟基末端磷酸化，制备末端标记探 ...