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hieverybody. i want extract DNA from cryopreserved clotted human blood.the smaple has been storaged 5 years in -20 degree. who is an expert on this topic . i need your help.i need the details. my emai ...

Hi! Would anyone out there be able to tell as to why alchohols like isopropanol or ethanol are used to precipitate nucleic acidsand alsowhy is the precipitation done at low temperatures ramesh -rames ...

1．感受态的制备 （1）接种单菌落于2ml LB培养液中，37℃过夜。 （2）取0.25ml过夜菌入25ml LB培养液中，37℃振摇4～6h至A590=0.4～0.6。 （3）倒入50ml管内，水浴10min，以2500～3000rpm离心5min，弃上清。 （4）缓慢加入75mmol/L预冷CaCl25ml悬浮菌体，冰浴20min，同上离心弃上清。 （5）缓慢加入75mmol/L预冷CaCl2 ...

该法是R.Treisman尚未发表的方法同时也是Brinboim和Doly(1979)及Ish-Horowicz和Burke(1981)所用方法的改进。该方法对于目前使用的所有大肠菌菌株都卓有成效并可与随后的纯化步骤如聚乙二醇沉淀或氯化铯-溴化乙锭梯度平衡离心等一并联合使用。注:括号中给出的体积可适用于未经氯霉素处理的培养。 试验准备: 1、溶液I:50mmol/L葡萄糖 25mmol/L Tr ...

Sanger双脱氧链终止法 Maxam－Gilbert DNA化学降解法 测序策略 目前应用的两种快速序列测定技术是Sanger等（1977）提出的酶法及Maxam和Gilbert(1977)提出的化学降解法。虽然其原理大相径庭，但这两种方法都是同样生成互相独立的若干组带放射性标记的寡核苷酸，每组寡核苷酸都有固定的起点，但却随机终止于特定的一种或者多种残基上。由于DNA上的每一个碱基出现在可变 ...

该法 可 ...

利用D NA 连接酶把载体 DNA 和要克隆的目的 DNA 片段连接在一起，成为一个完整的重组分子，这就是分子克隆中常说的连接反应。当载体 DNA 和外源 DNA 末端都是由一种产生粘性末端的内切酶切割产生的话（同尾酶也可以），或者两者末端被接上一段互补的多聚体的尾巴，那么经退火后可形成新的重组分子。连接后产生的重组分子中仍然保留着外源 DNA 两端的限制性内切酶切点 ，从而使我们能方便地从重组 ...

重组DNA技术涉及到组合不同来源的遗传信息，从而创造自然界以前可能从未存在过的遗传修饰生物体（genetically modified organisms，GMOs）。最初，在分子生物学家中有人担心这些生物体可能具有不可预测的不良性状，一旦从实验室逸出将带来生物学危害。这种担心在1975年美国加利福尼亚州阿西洛马市召开的科学会议上成为焦点。在那次会议上讨论了重组DNA技术的安全问题并提出了第一个重 ...

鉴定转基因植物的第一步就是要确定被转基因已经稳定的整合到了染色体上。第二步任务就是评估有多少个转基因拷贝，以及每个转基因的表达水平如何。一般经过上游表达载体的设计构建以及下游转化体系的建立、转化品系的筛选鉴定等一系列步骤后，即获得 T 0 代转基因植物。在转化过程中，外源 DNA 随机插入植物内，插入的拷贝数和位点都不固定。插入外源基因的拷贝数低（1或2个）能较好的表达，插入的拷贝数多则会导致表达 ...

目的 ： 采用碱变性法，学习小规模制备质粒DNA的技术 原理 ： 碱变性抽提质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH值高达12.6的碱性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离，当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH值至中性时，变性的质粒DNA又恢复原来的构型，保 ...

第一节 概 述 DNA的提取通常用于构建文库、Southern杂交(包括RFLP)及PCR分离基因等。利用DNA较长的特性，可以将其与细胞器或质粒等小分子DNA分离。加入一定量的异丙醇或乙醇，的大分子DNA即沉淀形成纤维状絮团飘浮其中，可用玻棒将其取出，而小分子DNA则只形成颗粒状沉淀附于壁上及底部，从而达到提取的目的。在提取过程中，染色体会发生机械断裂，产生大小不同的片段，因此分离DNA时应尽量 ...

克隆成功与否除与连接方式以及载体选择有关外载体的处理也是一个重要环节。为了提高连接效率处理载体时应注意以下几点: (1)应加入常用量5~10倍的内切酶水解载体以保证载体被完全酶切; (2)如用双酶切割载体则必须电泳回收载体片段除去双酶切所产生的小DNA片段;�(3)如粘端连接单酶切处理过的载体必须用 碱性磷酸酶 (如牛小肠碱性磷酸酶CIP)处理防止载体自身环化。 CIP 可以水解掉DNA5末端的 ...

标记育种是利用与目标性状基因紧密连锁的遗传标记，对目标性状进行跟踪选择的一项育种技术。与育种有关的遗传标记主要有四种类型: 形态标记（morphological marker）、细胞标记（cytological markers）、生化标记（Biochemical marker）和分子标记（molecular marker）。早在1923年，Sax等就提出利用微效基因与主基因的紧密连锁，对微效基因进 ...

带正电的DEAE-葡聚糖与核酸带负电的磷酸骨架相互作用形成的复合物被细胞内吞 瞬时转染 相对简便、重复比磷酸钙好但对细胞有一定的毒副作用转染时需除血清且一般只用于BSC-1CV-1COS细胞系 Sigma-Aldrich(DEAE-Dextran Transfection Kit)磷酸钙法 磷酸钙DNA 复合物吸附细胞膜被细胞内吞 稳定转染染瞬转染 不适用于原代细胞（所需的DNA 浓度较高）操作简 ...

1 目的 ：DNA 抽提标准化操作规范适用于HLA试验中的DNA 抽提操作。 2 适用范围 ：DNA 抽提实验室 3 依据 ： DNA 抽提标准化操作规范 4 引用文件 ：德国BAG公司（以下简称BAG）《Instructions for use EXTRA-GENE I》 5 程序 5.1试剂准备 5.1.1 BAG® EXTRA-GENE I 该试剂盒包括3部分：Solution 1 ...

试验原理： 碱裂解法是较常用的提取的方法。其优点是收获率高，适于多数的菌株，所得产物经纯化后可满足多数的DNA重组操作。十二烷基磺进行质粒的小量制备。十二烷基磺酸钠（SDS）是一种阴离子表面活性剂，它既能使细菌细胞裂解，又能使一些蛋白质变性。用SDS处理细菌后，会导致细菌细胞破裂，释放出质粒DNA和染色体DNA，两种DNA在强碱环境都会变性。由于质粒和主染色体的拓扑结构不同，变性时前者虽然两条链分 ...

酶切扩增多态性序列（C1eaved Amplified Polymorphic Sequences，CAPS）是一类以PCR为基础的共显性的分子标记，它的基本原理是先用已知位点的DNA 序列去设计一套特异性的PCR引物（19~27 bp）。然后应用这些去扩增该位点上的某一DNA 片段；接着用一种专一性的限制性内切酶切割所得的扩增带并进行RFLP分析。 1993年Konieczny和Ausubel首 ...

实验目的 学习和掌握限制性内切酶的特性 掌握对重组质粒进行限制性内切酶酶切的原理和方法 并理解限制性内切酶是DNA重组技术的关键工具。 相关基础知识 限制性核酸内切酶：是一类能识别双链DNA分子特异性核酸序列的DNA水解酶。它是基因工程中用于体外剪切基因片段的重要工具酶。 上世纪七十年代，当人们在对噬菌体的宿主特异性的限制-修饰现象进行研究时，首次发现了限制性内切酶。首批被发现的限制性内切酶包 ...

1 导论 聚合酶链式反应（PCR）以其优越性极大地影响到了分子生物学的几乎所有领域，并以其基本程序和DGGE（denaturing gradient gel electrophoresis），开发出多种检测核苷酸变异的方法。RAPD（Random Amplifed Polymorphic DNA）就是其中的一种，它是1990年美国杜邦公司科学家J.G.K.Williams和加利福尼亚生物研究所J ...

原理 基因组步行技术是一种新发展的利用已知序列(cDNA或基因组DNA)从基因组中获得基因的上游(如启动子)或下游序列的方法。其原理如下：首先利用不同的具有平末端的 DNA 限制性内切酶消化基因组 DNA，然后将预先设计好的 DNA 接头连接在 DNA 的两端这样的一组两端带有接头的 DNA 片段就称为所谓的无载体的 DNA 文库；根据接头和目的基因的序列设计两组引物，以上述的DNA为模板，先以外 ...