• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        组织DNA的提取和纯化

        互联网

        3143

        [原理]

        本法用含EDTA的溶液洗涤细胞,SDS(十二烷基硫酸钠)破碎、裂解细胞,消化蛋白质,使核蛋白解聚并使细胞内的DNA酶失活,用酚、氯仿变性蛋白质并去除杂质,最后用乙醇沉淀得到纯化的DNA。

        [试剂]

        1.裂解缓冲液

        2.苯酚-氯仿溶液

        3.氯仿-异戊醇溶液

        4.冰无水乙醇及70%乙醇

        5.TE缓冲液

        6.5mol/L NaCl

        [操作]

        1.处死小白鼠一只,取新鲜肝脏,用生理盐水清洗去血水。

        2.每克组织加10ml裂解液制成匀浆。

        3.取2ml匀浆于离心管中,加等体积苯酚-氯仿溶液,加盖,缓缓来回颠倒5min,离心2500rpm×10min。

        4.取上层水相,加等体积氯仿-异戊醇溶液,加盖,缓缓来回颠倒5min,离心2500rpm×10min。

        5.取上层水相至玻璃管内,加5mol/L NaCl至终浓度为0.3mol/L(2ml 100μl,3ml 150μl)。

        6.加2.5倍体积的冰无水乙醇,加盖,缓慢摇匀,见白色絮状沉淀DNA出现。

        7.用玻棒捞起DNA沉淀置于试管中,用1mlTE溶解。

        8.定量

        吸取DNA溶液100μl 2.9mlTE(30倍稀释),在260nm和280nm下读取吸光度值,

        9.计算

        DNA浓度(ug/ml)=A260 nm×50×1/光径×稀释倍数

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序