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三阶段纯化策略 纯化问题所涉及的具体步骤最终取决于样品的性质。但也有共同可参考的阶段 捕获阶段：目标是澄清、浓缩和稳定目标蛋白。 中度纯化阶段：目标是除去大多数大量杂质，如其它蛋白、核酸、内毒素和病毒等。 精制阶段：除去残余的痕量杂质和必须去除的杂质。 分离方法的选择 根据蛋白质的特殊性质采用不同的分离方法： 蛋白质 ...

比起其它公司的原核表达系列来说Invitrogen有个非常突出的地方就是它的重组克隆技术。像之前Novagen大部分载体都是用传统的酶切、链接方式做重组质粒，但是Invitrogen的表达系统大量运用了它的TOPO技术和Gateway技术。 虽然现在在许多做科研的学生看来，能出实验结果是最重要的，中间的过程不是那么重要。可是只有创新的技术才能推动科学不断的进步，比如：如果我们一直采用手工法测序，那 ...

在人细胞中快速、高水平地表达目的蛋白 在2至3个星期内即可获得高效价的病毒 无需噬斑纯化 靶细胞可以是分裂或不分裂的细胞（dividing/or nondividing cell） CLONTECH的Adeno-X™表达系统是一个特别 高效的腺病毒表达系统，用于在人细胞中瞬时及高水平地表达目的蛋白质。由于Adeno-X™病毒DNA中含有特别设计的克隆位点，你可以在2星 ...

在过去的一年里，随着双向电泳、质谱以及不同研究程序核心技术的改进，蛋白质组学保持着持续快速的进步。完全注释的蛋白质组学数据库现在在一些领域已经出现了，并为系统研究提供了一个平台，在临床应用诸如心血管和肿瘤学中尤其有发展前途。大规模定量研究，在功能和敏感性上能与基因表达所达到的程度相媲美，因而在蛋白质水平上的研究也正变为现实。 简介 如果90年代是基因组的十年，新世纪的头十年将成为蛋白质组学的十年 ...

研究者们在分离到某一基因后，要对其编码蛋白质进行研究最理所当然的工作就是表达――即：有目的性地合成外源基因产物。在重组DNA技术的发展早期，人们认为在基因的前面有一个强启动子和一个起始密码子就足以在大肠杆菌中获得很好的表达。随后，认识到获得有效的翻译所需的条件要复杂得多，除了要有强启动子和起始密码子外，良好的表达尚需编码目的蛋白的mRNA中含有核糖体结合位点，表达水平受密码子喜好程度的影响，也受编 ...

AtlasTM cDNA表达距阵(Expression Array) 同时对588种/1176种关键基因做全景表达图谱分析 同时对大量已知基因的表达进行大规模高通量(High-htroughput)分析 检测关键基因在细胞关键功能中的角色 只需简单的杂交步骤 就在数年前，核酸矩阵技术只能在资金雄厚的大实验室开展。但两年前(1997)，随着Clontech公司推出AtlasTM cDNA矩阵，情况大 ...

蛋白质是一种生物大分子，基本上是由20种氨基酸以肽键连接成肽链。肽键连接成肽链称为蛋白质的一级结构。不同蛋白质其肽链的长度不同，肽链中不同氨基酸的组成和排列顺序也各不相同。肽链在空间卷曲折叠成为特定的三维空间结构，包括二级结构和三级结构二个主要层次。有的蛋白质由多条肽链组成，每条肽链称为亚基，亚基之间又有特定的空间关系，称为蛋白质的四级结构。所以蛋白质分子有非常特定的复杂的空间结构。一般认为，蛋白 ...

色谱法，又称层析法。根据其分离原理，有吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱与排阻色谱等方法。 吸附色谱是利用吸附剂对被分离物质的吸附能力不同，用溶剂或气体洗脱，以使组分分离。常用的吸附剂有氧化铝、硅胶、聚酰胺等有吸附活性的物质。 分配色谱是利用溶液中被分离物质在两相中分配系数不同，以使组分分离。其中一相为液体，涂布或使之键合在固体载体上，称固定相；另一相为液体或气体，称流动相。常用的载体有硅胶、硅藻土 ...

High-throughput protein analysis integrating bioinformatics and experimental assays. Nucleic Acids Res. 2004 Feb 3;32(2):742-8 The wealth of transcript information that has been made publicly availa ...

Kyle Coachman/Linda Warfield/Steve Hahn Last modified 5/13/02 To concentrate proteins for analysis by SDS PAGE: If a small amount of protein is to be precipitated (less than a few micrograms)add In ...

James MoviusHahn Lab 1.Proteins are TCA precipitated and washed with acetonethen dried. 2.The CNBr should be brought to room temperature in the hood and used ONLY in the hood.Extremely toxic! 3.Dissol ...

METHOD for Western Blots: 1.While your SDS-PAGE gel is runningmake your transfer buffer and chill to 4℃.Check that you have a frozen buffer dam is ready (stored in freezer next to Shikhatop shelf to t ...

TCA-DOC For precipitation of very low protein concentration 1)To one volume of protein solutionadd 1/100 vol.of 2% DOC (Na deoxycholatedetergent). 2)Vortex and let sit for 30min at 4ºC. 3)Add 1 ...

Protocol for Silver Staining Silver staining is less compatible with the mass spectrometric analysis.Thereforewe don't recommend using silver staining for any samples that will subsequently be submitt ...

ChIP（染色质免疫沉淀）方法是研究活体“蛋白质－DNA”相互反应的一种非常强大的工具。目前，这种方法用于染色质结构的动力学研究、转录因子的调节和辅助调节因子及其他表观遗传变化的研究。 ChIP的使用过程分为三个主要步骤：第一步，在甲醛固定后分离和破碎染色质；第二步，使用感兴趣的蛋白的抗体完成特定染色质片段的免疫沉淀；第三步，分析免疫沉淀片段以确定出靶标DNA是否与感兴趣的 ...

醋酸纤维素薄膜是由醋酸纤维素加工制成的。醋酸纤维素薄膜作为是电泳支持体有以下优点：①电泳后区带界限清晰；②通电时间较短（二十分钟至一小时）；③它对各种蛋白质（包括血清白蛋白，溶菌酶及核糖核酸酶）都几乎完全不吸附，因此无拖尾现象；④对染料也没有吸附，因此不结合的染料能完全洗掉，无样品处几乎完全无色。它的电渗作用虽高但很均一，不影响样品的分离效果，由于醋酸纤维素薄膜吸水量较低，因此必需在密闭的容器中进 ...

一、原理 细菌体中含有大量蛋白质，具有不同的电荷和分子量。强阴离子去污剂SDS与某一还原剂并用，通过加热使蛋白质解离，大量的SDS结合蛋白质，使其带相同密度的负电荷，在聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）上，不同蛋白质的迁移率仅取决于分子量。采用考马斯亮兰快速染色，可及时观察电泳分离效果。因而根据预计表达蛋白的分子量，可筛选阳性表达的重组体。 二、试剂准备 1、30%储备胶溶液：丙烯酰胺（Acr）29. ...

蛋白质的检测与分析――Western blot 操作步骤 一个基因表达终极结果是产生相应的蛋白质（或酶）。因此检测蛋白质是测定基因表达的主要标志，检测蛋白质的方法很多，除ELISA法外，也可用与检测DNA和RNA相类似的吸印方法。前两法有“南”和“北”之意，故本法遂被延伸称为Western（西）印迹法，该法能用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分辨出与专一抗血 ...

稳定蛋白质三维结构的作用力主要是一些所谓弱的相互作用或称非共价键或次级键，包括氢键，范德华力，疏水作用和盐键（离子键）。此外共价二硫键在稳定某些蛋白质的构象方面也起着重要作用。 氢键(hydrogen bond)在稳定蛋白质的结构中起着极其重要的作用。多肽主链上的羰基氧和酰胺氢之间形成的氢键是稳定蛋白质二 级结构的主要作用力。此外，还可在侧链与侧链，侧链与介质水，主链肽基与侧链或主链肽基与水之间形 ...

端粒是真核生物染色体末端的特异DNA-蛋白结构，端粒DNA是一系列重复的富含G的DNA序列，这一序列在生物进化中有高度的保守性（人重复序列为TTAGGG）。已确认端粒在保护基因组DNA不被降解、防止染色体有害的结合（如染色体末端融合、重排、染色体移位和染色体缺失）中起重要作用。 由于DNA聚合酶不能复制线性DNA的最末端，多数正常体细胞的端粒末端每经一个复制循环就进行性缩短。这一现象在体内和体外都 ...