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在基因功能研究过程中，常常使用的一种方法就是将目的基因转到靶细胞内进行瞬时表达（transient expression），以流式细胞仪检测细胞周期的变化，观察转基因对细胞增殖的影响。由于各种转基因方法的不同，转基因的效率也不同，往往是仅有一部分细胞可以表达目的基因，没有转基因的细胞将影响检测的结果。如何将已经转基因的细胞同未转基因的细胞区分开来进行检测，是一个技术上的难点。常用的一种方法就是将表 ...

凋亡都比较多，但遗憾的是与G1峰分得不是很开，因此，Modfit分析的时候，会根据您的结果用统计学原理将它们分为Apo和G1，但这样可能掩盖真正的结果！建议做PI染色的时候，在PBS洗两次后，加入PC buffer，这是一种轻破膜剂，可以使断裂成小片断的DNA出细胞而降低其在FL2-Ad上的值，这样就容易区分G1和APO了。 对照很好，特别是 ...

在酶标记的溶液中，出现的是各种交联物的混合物，有酶-抗体、酶-抗体-酶、抗体-抗体、酶-酶，甚至还有游离的酶和抗体。 在这中间，除了抗体-酶和酶-抗体-酶外，其它都应该给予除去。 1.50%饱和硫酸铵沉淀法。 此法只能除去游离的酶及酶-酶聚合体。而不能除去其它不需要者。但是此法对酶标抗体的损耗少。&nb ...

一、实验目的 酶是植物体内具有催化作用的蛋白质，植物体内的生化反应，一般都是在酶的作用下进行的，没有酶的催化反应，植物的生命也就停止了，因此对酶的研究是阐明生命现象本质中十分重要的部分。为要研究酶首先要将酶从组织中提取出来，加以分离、纯化，不同的研究目的对酶制剂的纯度要求也不相同，有些工作只需要粗的酶制剂即可，而有些工作则要求较纯的酶制剂，需根据不同情况区别对待 ...

1.DEAE-Sephadex A-25离子交换层析法 ⑴ 用0.1mol/L NH4HCO3缓冲液平衡DEAE-Sephadex A-25柱。 ⑵ 加样后，用0.1mol/L NH4HCO3缓冲液洗脱12h~14h。 ⑶ 改用0.4mol/L NH4HCO3缓冲液洗脱，流速0.15ml~0.2ml/min，收集流出液，测OD275nm。 ⑷ 测SP ...

Q:我现在做肿瘤细胞内ROS水平测定，使用流式细胞仪测DCF荧光强度，应该用什么做对照呢？就是这种肿瘤细胞的正常细胞做对照吗？可不可以用任意的正常组织细胞做对照呢？或者只用PBS加DCFH-DA作为空白对照呢？ A:据我的经验，DCFH-DA本身没有荧光，可穿过细胞膜进入细胞，在胞内转化生成DCFH。在活性氧作用下，DCFH被氧化生成荧光物质DCF，荧光强度与细胞内活性氧水平成正比。你是要测定细胞 ...

活性氧检测试剂盒(Reactive oxygen species assay kit)是一种利用荧光探针 DCFH-DA进行活性氧检测的试剂盒。DCFH- DA本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而 DCFH不能通透细胞膜，从而使 探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。检测DCF的荧光就可以知道细胞内活性 ...

Q:我想用流式细胞术测血浆中的内皮源性微粒，已购买荧光标记的抗体（PE ANTI -CD144)已文献证实这种微粒表面表达CD144，且具有特异性。但我们检测了两次均无特异性，不知道是否标本处理有问题。 A:EMP: CD31、CD42 Q:抗体已经买了，我们还是想用CD144做，据说CD144特异标记内皮源性微粒（EMP).你们有过用CD31.CD42标记的经验吗？你的标本是怎麽处理的？对流式细 ...

各种血液细胞及血管内皮细胞受到刺激而活化或发生凋亡后，细胞膜磷脂酰丝氨酸由胞膜内层进入外层，以出芽方式形成小泡状结构而脱落，形成所谓的“微粒(microparticle，MP)”。正常人体血液中即存在少量MP，而在许多疾病中MP水平明显升高。MP具有促进血液凝固反应发生与血栓形成等多种重要生物学活性。越来越多的研究提示，检测血液MP水平与性质有助于监测病情、指导治疗与疗效判 ...

Q:构建了载体表达目的基因+GFP的融合蛋白(用的是PEGFP-N1)转染48小时后处理细胞百分之七十乙醇固定过夜PI单染上流式测周期!由于转染效率太低通过了流式设门分别圈出了阴性和阳性细胞再分别测其CELL周期变化!!!!结果如附图!!有几个问题想和大家一起讨论一下:1在一些SCI文献中报道通过MTT法此目的基因表达促进一些细胞(非我用的细胞系我用的转染CELL之前没有报道!)增殖但是从周期图来 ...

Q：石蜡切片能用于做流式吗 A：石蜡包埋组织流式细胞仪DNA含量分析是石蜡包埋组织切片与流式细胞术（flow cytometry，FCM）结合使用来测量DNA含量及倍体分析，这一结合是流式细胞仪在临床应用中，特别是在肿瘤研究方面开拓了新的研究途径。FCM是激光、电子和电子计算机、流体喷射技术的综合发展应用，是快速定量分析细胞的技术，要求被检细胞呈悬浮状态。目前已可测量细胞的大小、体积、DNA含量、 ...

请帮忙分析一下第一张是未转染的第12代，第二章是转染后的第22代。能说明转染后的细胞增值能力强了吗，怎么看出来的。 第一张图：增值率S（合成期）＋G2/M（合成后期/分裂期）：21.7％第二张图：增值率S（合成期）＋G2/M（合成后期/分裂期）：19.6％据此分析两者的增值没有明显的差别。虽然第二张图比第一张图的S期有所增高，但G2期下降了。细胞周期是基于细胞处于不同分裂时期具有不同的DNA含量而 ...

一、实验目的 1、掌握一种提取蛋白的方法。 2、掌握一种检测牛乳质量的方法。 二、 实验原理 酪蛋白是乳蛋白质中最丰富的一类蛋白质，约占乳蛋白的80~82%，酪蛋白不是单一的蛋白质，是一类含磷的复合蛋白质混合物，以一磷酸酯键与苏氨酸及丝氨酸的羟基相结合。它还含有胱氨酸和蛋氨酸这两种含硫氨基酸，但不含半胱氨酸。它在牛乳中的含量约为35g/L，比较稳定，利用这一性质 ...

一. 实验目的 1. 掌握重组蛋白诱导表达的方法; 2. 亲和层析法纯化His 标记的融合蛋白 二. 实验原理 将目的基因连接在表达载体后通过加入诱导剂IPTG诱导目的基因表达。表达载体除具有蛋白表达所需要的启动子外在终止子前有6个His编码序列便于蛋白的亲和层析纯化。 亲和层析以蛋白质或生物大分子和结合在介质上的配基间的特异亲和力为基础。本实验采用 ...

SPA提取的方法很多，包括煮沸法、溶菌酶法、葡萄球菌溶素法、超生波法以及三氯醋酸法等。现将常用的方法介绍如下： 1.煮沸提取法 ⑴ 将菌株接种于蛋白胨葡萄糖琼脂培养基上，37℃培养20h~24h。 ⑵ 以0.15mol/L pH5.9PB液将菌苔洗下，配成10%（V/V）的悬液。 ⑶ 水浴中煮沸1h，迅速冷却至4℃，4 000r/min离心20min ...

TRIzol试剂适用于从细胞和组织中快速分离RNA。TRIzol试剂有多组分分离作用，与其他方法如硫氰酸胍/酚法、酚/SDS法、盐酸胍法、硫氰酸胍法等相比，最大特点是可同时分离一个样品的RNA\DNA\蛋白质.TRIzol使样品匀浆化，细胞裂解，溶解细胞内含物，同时因含有RNase抑制剂可保持RNA的完整性。在加入氯仿离心后，溶液分为水相和有机相，RNA在水相中。取出水相用异丙醇沉淀可回收RNA；用乙醇沉淀中间层可回收DNA；用异丙醇沉淀有机相可回收蛋白质。 TRIzol试剂可用于小量样品（50-100mg组织、5×106细胞）也适用于大量样品（≥1g组织、>107细胞）。对人，动物，植物组织，细菌均适用，可同时处理大量不同样品，整个提取过程在一小时内即可完成。分离的总RNA无蛋白质和DNA污染，可用于Northern Blot，dot blot，ployA筛选，体外翻译，RNase保护分析和分子克隆。在用于RT-PCR时如果两条引物存在于一个单一外显子内，建议用无RNase的DNaseⅠ处理RNA样品，避免出现假阳性。共纯化的DNA可用作标准，比较不同样品RNA的得

（一）原理 离子交换是指液相中的离子与固定相上可解离基团的可逆交换反应。利用这个反应先将要分离的混合物在一定pH的溶液中解离，而后流经固定相，使之与固定相上的可解离基团进行离子交换，吸附于固定相上，凡不能进行交换吸附的成分，则流出层析柱外。再根据交换吸附于固定相上的各组分解离度的差别，运用不同的pH值或不同盐浓度的溶液作流动相，流过层析柱将各组分分别再交换洗脱下 ...

7400型流变仪是专门用于在高温高压测量完井液，钻井液等液体流变性能的仪器。最高压力可达138 兆帕（2000P S I ），最高温度可达232摄氏度（450 F ）。7400的设计来于经过实践验证的高温高压技术。设计特点强调使用过程中等可靠性和安全性。 7400能够测量所有牛顿液和非牛顿液体，包括剪切相关和时间相关的液体。该仪器适合于各种类型的流体如B I N G H A M ，P S U E ...

1、特性 _独立电极，容易操作。 _小巧的机器能提供快捷，准确的数字读数，且独立探头，使测量更方便。 _测量范围：0到10%含盐量（重量百份比）。 _液晶显示不仅电池消耗量低，而且即使在强光的环境下也能清晰显示读数，方便使用。 _探头自动温度调节。 _防水面版。 _所有按键都使用橡胶按钮，防止腐蚀。 _数据保持功能。 _仪器使用耐用持久的材料，外壳也是使用了结实且轻巧的ABS塑料 ...

Publisher: CRCNumber Of Pages: 288Publication Date: 2006-11-06Sales Rank: 797631ISBN / ASIN: 0849339197EAN: 9780849339196Binding: HardcoverManufacturer: CRCStudio: CRCAverage Rating: Total Reviews: B ...