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细胞增殖检测:3H-TdR渗入法实例

原理:T细胞、B细胞表面具有识别抗原的受体和有丝分裂原受体,在特异性抗原刺激下可使相应淋巴细胞克隆发生增殖。植物血凝素(PHA)、刀豆蛋白A(ConA),抗CD2、抗CD3 McAb作为多克隆刺激剂可选择性地刺激T细胞增殖;而抗IgM、含葡萄球菌A蛋白的菌体(SAC)、脂多糖(LPS,对小鼠有作用)则刺激B细胞发生增殖;美洲商陆(PWM)、肿瘤刺激剂PMA对T、B细胞的增殖均有刺激作用。最近发现, ...

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细胞增殖检测:H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)渗入法

一)材料及试剂 1.培养基 ;RPMI-1640或TC199培养液 2.PHA;同形态学方法 3.小牛血清 4.3H-TdR;选用比活性为2Mci~10Mci/mg分子的制品,将1Mci/ml溶液以生理盐水稀释成100uci/ml,于4℃保存备用。临用时再用培养液稀释成10uci/ml溶液。 5.3%冰醋酸 6.浓 ...

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细胞增殖检测方法:总论

3H MTT检测法主要反映细胞的能量代谢,是检测细胞增殖活力的一种简便准确的方法,其原理是在活细胞生长和增殖过程中,线粒体内的脱氢酶可将黄色的MTT分解成兰紫色的甲(Formazan)生成的甲量的多少与细胞的数量和细胞的活力成正比 羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)是一种可穿透细胞膜的荧光染料,具有与细胞特异性结合的琥珀酰亚胺脂基团和具有非酶促水解作用的羟基荧光素二醋酸盐基团,使C E成为 ...

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MLR混合淋巴细胞反应

混合淋巴细胞培养(MLC)或称混合淋巴细胞反应(MLR)常用于器官移植前的组织配型,以测定受体和供体主要组织相容性抗原(HLA抗原)相容的程度。由于MLC中淋巴细胞接受同种异型抗原的刺激而发生活化、增殖,产生种类众多的细胞因子,促进NK、LAK和CTL等杀伤细胞的分化,因此又是免疫调节研究中常用的实验模型。  (一) 实验原理  两个无关个体功能正常的淋巴细胞在体外混合培养时,由于HLAⅡ类抗原 ...

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细胞增殖检测:MTT实验经验总结

MTT分析法以活细胞代谢物还原剂3-(45)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-35-di- phenytetrazoliumromide MTT噻唑蓝为基础。MTT为黄色化合物,是一种接受氢离子的染料,可作用于活细胞线粒体中的呼吸链,在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下tetrazolium环开裂,生成蓝色的formazan结晶,formazan结晶的生成量仅与活细胞数目成正比( ...

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流式图画十字mark时的依据

Q:流式图画十字mark时的依据是:该管的同型对照?还是细胞分群? 结果查到2005年的nature上一篇文章是按群分析的,一篇1995年的science是按同型对照来的 nature的图发上来吧,请老师看看!FIGURE 1. Identification of subsets of CD4+ and CD8+ T cells in a non-human primate (rhesus mac ...

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流式细胞仪的使用流程

一.开机程序1.检查稳压器电源,打开电源,稳定5分钟。2.打开储液箱,倒掉废液 并在废液桶中加入400ml漂白水原液。打开压力阀,取出鞘液桶,将鞘液桶加至4/5满(一般可用三蒸水,做分选必须用PBS或FACSFlow),合上压力阀。确实盖紧桶盖,检查所有管路是否妥善安置。3.将FACSCalibur开关打开,此时仪器功能控制钮的显示应是STANDBY,预热5-1 ...

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靶细胞杀伤实验:CFSE/PI法

做免疫学特别是肿瘤学实验,总免不了要测淋巴细胞或其他细胞对肿瘤细胞的杀伤,老外最常用的是Cr51放射实验,但这个方法在国内的不少地方都不能做,而MTT这个方法又太老了,而且也不准确,那么替代方法就用流式细胞术,又方便,又准确,这也是偶参照老外的方法吧。1 计数靶细胞,并加入CFSE,使CFSE终浓度达到2uM37度30分钟。2 拿出后,1000rpm5min可隐约看到细胞染成黄色,PBS洗三次3  ...

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细胞培养中的常见污染

BacteriaBacteria (cocci) @ 320x magnification. In this example the cells are the larger refractile bodies while the bacteria appear as very small dark "dots" in the spaces between the cells. ...

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大鼠原代足细胞的培养(图)

一、培养方法 如下图所示即为大鼠原代足细胞 按顺序:1,2是培养7天传代前的图片,小球周围爬出很多细胞。3,4是传代第二天细胞情况,过筛后仍有小的组织虑过。5,6是传代7天足细胞完全分化图片。 由于本人实验刚有进展,好多图片制作不理想,后续的细胞免疫荧光坚定在做,失败过两次,出结果后再发,不过老板说了就是足细胞!1 2345 过 ...

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旋转粘度计的使用和维护

旋转粘度计广泛应用于测定油脂、油漆、涂料、塑料、食品、药物、胶粘剂等各种流体的动力粘度。该仪器结构简单、价格便宜、方便实用,因而广受欢迎。在长期从事该类仪器的检定过程中我们发现许多用户,特别是中小企业的测试人员在使用过程中存在许多问题,往往我们检定的仪器性能优于国家计量检定规程的要求,但是用户在测试样品时数据偏差很大。现就如何正确使用该类仪器获得准确可靠的测量结果分析如下。 首先,简单介绍一下该类 ...

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美国BROOKFIELD博力飞DV-II+可编程控制式粘度计操作指引手册

美国Brookfield 公司生产的旋转粘度计是粘度测定的世界标准。DV-II+是博力飞Brookfield 公司粘度计系列中的实验室仪器,它可以与博力飞Brookfield 产品系列的其它配件如超低粘度承接器、小量样品承接器、升降平台、螺旋承接器、恒温水浴或加热器等一起使用, 以及在DV-II+基础上的威-博力飞锥/板粘度计,从而构成适应范围宽广而全面的粘度测量系统。 所有Brookfield ...

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ZCL自动测硫仪常见故障分析与改进

ZCL型自动测硫仪,是以碘为库仑滴定剂,数字显示试样中全硫含量。其测定的精确度和准确度均好,每次测定时间为5min。除用于煤炭分析外,还可以测定矿物、岩石、化工产品等多种物料的硫含量。 下面就使用过程中出现的故障及排除方法作简述。 《ZCL自动测硫仪常见故障分析与改进》下载 点击这里下载 ...

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肿瘤细胞培养

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5E-8S/A全自动测硫仪故障分析

5E-8S/A全自动测硫仪具有较强的自诊断及异常情况保护功能。 其自诊断分为主动自检和工作过程中自动检测两种方式,主动自检即运行程序中的“功能”-“自检”项,其检测内容包括了工作过程中自动检测的所有项目,而工作过程中自动检测则有少部分项目没有进行。 其异常情况保护功能主要指直接采用硬件形式保护,主要包括:热电偶断偶保护、加热过流保护、连续加热时间过长 ...

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rHSCs isolation

以前一直认为大鼠HSCs分离在保证纯度非常高的基础上充其量最大只能得到两个皿光景的量最近分了 得了五个100mm皿密度可以纯度的话我认为是非常高了可以见图分离后48H的老板看了也认同细胞的纯度但他建议可以提高50%得率也就是要78个大皿的数量因为我实验用的是传一代细胞. 大家可以讨论讨论。请点击参加丁香园论坛 ...

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新型的基因分型技术(SNP分型):巢式PCR-RFLP技术

随着生命科学迅猛的发展,与之相适应的实验技术手段越来越复杂和专业化,对于科研人员实验技能要求也越来越高。由于生物学实验高度的复杂性、使得一个科研人员往往只能精通某一方向的实验。因此许多生物技术公司应孕而生,他们提供了许多专业的服务,其中最常规的技术服务包括核酸、蛋白测序、引物合成,SNP分型动物培养及转基因动物实验。 在国外,生命科学的研究已经初步形成了一个大型技术平台共享的研究形式,科研人员的 ...

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高质量RNA的标准

real time RT-qPCR 是检测样本中特定基因表达量的有效方法,包含逆转录步骤和定量PCR步骤。好的开始是成功的一半,获得高质量的、能正确反应样品中转录情况的RNA,对于其后的定量结果,自然是非常重要的。 Mikael Kubista,教授 R&D TATAA Biocenter主任: RNA质量包含两个方面:样品的纯度和RNA的完整性。样品纯 ...

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定硫仪培训教材

该仪器根据库仑滴定法原理,煤样在1150 ℃高温条件及催化剂的作用下,在净化过的空气流中燃烧,煤中各种形态的硫均被燃烧分解为SO2 和SO3 少量气体,而被净化过的空气流带到电解池内生成H2SO3或少量H2SO4,H2SO3立即被电解液中的 I2(Br 2)氧化成H2SO4,结果溶液中的I2 ...

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大鼠VSMC贴壁培养细胞图片

培养了快一个月的细胞了,今天终于鉴定出是我想要的血管平滑肌细胞。 我养的是大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞采用的是组织贴块法培养。10天后传第一代,16天后第二代,22天后第三代,并做a-actin免疫细胞化学鉴定。附图片。 ...

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