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1. 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳时预电泳是怎么回事的？预电泳时要加6×DNA上样缓冲液吗？电泳1－2小时再加结合反应产物吗？ 预电泳是除去凝胶中没有聚合的单体和双体和聚合引发剂，提高分辨率，不加任何物质，一般３０－６０分钟后加样电泳。 2. 银染的步骤是什么？银染的关键因素是什么？ 步骤是： （1） 固定：10%冰乙酸30min。 （2） 清洗：双蒸水冲洗凝胶2次，每次1min。 （3） ...

问：我养的是RAW264.7细胞，不知道为什么长得这么快？而且消化也很容易，好像和园子里其他养RAW细胞的很不一样。一般传代（1传2）后大概16－20个小时左右就能够长到90％，请问是应该一定等到24小时再传代，还是可以等长到90％（<24小时）如果没到24小时就传代的话，会对细胞状态有影响么？ 答：很多试验中要求分盘后24h时再开始实验 ...

非变性凝胶电泳，也称为天然凝胶电泳，与非变性凝胶电泳最大的区别就在于蛋白在电泳过程中和电泳后都不会变性。最主要的有以下几点： 1. 凝胶的配置中非变性凝胶不能加入SDS，而变性凝胶的有SDS。 2. 电泳载样缓冲液中非变性凝胶的不仅没有SDS，也没有巯基乙醇。 3. 在非变性凝胶中蛋白质的分离取决于它所带的电荷以及分子大小，不像SDS-PAGE电泳中蛋白质分离只与其分子量有关。 4. 非变性凝胶电 ...

1. 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的过程中，蛋白质的迁移率不仅和蛋白质的等电点有关，还和蛋白质的分子量以及分子形状有关，其中蛋白质的等电点是最重要的影响因子，要根据蛋白质的等电点来选择对应的电泳缓冲系统； 2. 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的过程中，要注意电压过高引起发热而导致蛋白质变性，所以最好在电泳槽外面放置冰块以降低温度； 3. 蛋白质的分子量较大，则电泳时间可以适当延长，以使目的蛋白质有足够的迁移 ...

非变性聚丙烯酰胺凝胶和变性sds-page电泳在操作上基本上是相同的，只是非变性聚丙烯酰胺凝胶的配制和电泳缓冲液中不能含有变性剂如SDS等。一般蛋白进行非变性凝胶电泳要先分清是碱性还是酸性蛋白。分离碱性蛋白时候，要利用低pH凝胶系统，分离酸性蛋白时候，要利用高pH凝胶系统。酸性蛋白通常在非变性凝胶电泳中采用的pH是8.8的缓冲系统，蛋白会带负电荷，蛋白会相阳极移动；而碱性蛋白通常电泳是在微酸性环境 ...

1. 配胶缓冲液系统对电泳的影响？ 在SDS－PAGE不连续电泳中，制胶缓冲液使用的是Tris－HCL缓冲系统，浓缩胶是pH6.7，分离胶pH8.9；而电泳缓冲液使用的Tris－甘氨酸缓冲系统。在浓缩胶中，其pH环境呈弱酸性，因此甘氨酸解离很少，其在电场的作用下，泳动效率低；而CL离子却很高，两者之间形成导电性较低的区带，蛋白分子就介于二者之间泳动。由于导电性与电场强度成反比，这一区带便形成了较高 ...

SDS-PAGE因易于操作，而具有广泛的用途，是许多研究领域的重要的分析技术。 1. 蛋白质纯度分析； 2. 蛋白质分析量的测定，根据迁移率大小测定蛋白质亚基的分子量； 3. 蛋白质浓度的测定； 4. 蛋白质水解的分析； 5. 免疫沉淀蛋白的鉴定； 6. 免疫印迹的第一步； 7. 蛋白质修饰的鉴定； 8. 分离和浓缩用于产生抗体的抗原； 9. 分离放射性标记的蛋白质； 10. 显示小分子多肽。 ...

聚丙烯酰胺的特性，包括机械性能，弹性，透明度，孔径大小取决于T，C，T是两个单体(单体丙烯酰胺和N-N’-甲叉双丙烯酰胺)的总百分浓度，C是与总浓度有关的交联百分比浓度。 T=(a+b)/m C=b/(a+b) （a为单体丙烯酰胺的克数，b为N-N’-甲叉双丙烯酰胺的克数，m为缓冲液终体积） a，b的比例很关键，如果a:b 小于10，胶脆，硬 如果a ...

1. 带电颗粒的性质 净电荷多少、颗粒大小及形状。一般净电荷多，直径小而且近于球状，则泳动速度快，反之则慢。 2. 电场强度（电位梯度） 指单位长度（cm）支持物体上的电位降，它对泳动度起着十分重要的作用。一般电场强度越高，带电颗粒移动速度越快。根据电场强度可将电泳分为低压（常压）电泳100—500V，电场强度为2—10V/cm，分离时间需要数小时、数天或更长。高压电泳50 ...

试剂： 1. 5x样品缓冲液（10ml）:0.6ml 1mol/l的Tris-HCl(pH6.8)5ml 50%甘油，2ml 10%的SDS，0.5ml巯基乙醇，1ml 1%溴酚蓝，0.9ml蒸馏水。可在4℃保存数周，或在－20℃保存数月。 2. 凝胶贮液：在通风橱中，称取丙烯酰胺30g，甲叉双丙烯酰胺0.8g，加重蒸水溶解后，定容到100ml。过滤后置棕色瓶中，4℃保存，一般可放置1个月。 3. ...

A.Sensitize a 96-well microtiter plate with purified antigen. Prepare a solution of the purified antigen of interest in phosphate buffer (see recipe below) such that a concentrati ...

A. Formalin Fixed Cell Plates 1. Trypsinize confluent flasks 2. Pool and count cells 3. Centrifuge at 1500 rpm for 10 minutes 4. ...

Materials: 1)TSBuffer:10mMTrispH8.0150mMNaCl 2)TSTBuffer:TSBufferwith0.05%Tween-20 3)Alkalin ...

一、实验目的 1、深入了解ELISA法测定抗体效价的原理。 2、掌握ELISA法测定单克隆抗体效价的方法。 二、实验原理 ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。免疫酶技术是将酶标记在抗体/抗原分子上，形成酶标抗体/酶标抗原，称为酶结合物。该酶结合物的酶在免疫反应后，作用于底物使之呈色 ...

一、材料与试剂 1、副结核分枝杆菌亲和层析抗原 2、草分枝杆菌吸收抗原 3、兔抗牛IgG酶标抗体 4、牛副结核病参考阳性血清 5、牛副结核病参考阴性血清 1～5项均由指定单位供应。 6、器材ELISA板，酶联免疫吸附检测仪、加样器、洗瓶、恒温箱等。 7、试剂及溶液配制同第五节猪瘟ELISA.。 二、操作方法 1、抗原包被以抗原稀释液将副结核亲和层析抗原稀释至50 ...

问：我在脂肪酶侧活方法上遇到很多问题，比如如何测定酸性脂肪酶的活性，发酵液的稀释倍数与酶活力并不成梯度，应该以哪个为最后的测定结果。谢谢各位战友的指教！ 答：我测定的酶活的范围是数千到上万 IU/ml；测的时候用的NaOH溶液的摩尔浓度是 0.05 M 这样的话根据酶活的定义最后的酶活公式就可以折算成IU/ml= undefined△V（样品和空白样的差值）n~A稀释倍数)。 滴定样品和空白样的差值一般控制在 ...

问：有人做过乳中脂肪酶的检测吗？除了传统的滴定法外，还有更好的方法吗？ 答：乳中脂肪酶没有测过，不过微生物脂肪酶可以用pNPP（对硝基苯棕榈酸酯）测吸光度法测活。 答：做过胰脂肪酶，可用同位素或者荧光 ...

一、材料及试剂 1、猪瘟单抗纯化抗原 2、兔抗猪IgG酶标抗体 3、猪瘟阳性血清 4、猪瘟阴性血清 1～4均由指定的生物制品所购买。 5、ELISA反应板 6、包被液 碳酸钠 1.50g 碳酸氢钠 2.93g H2O加至 1 000ml pH值9.6 7、PBS液 氯化钠 8.90g 磷酸二氢钾 0.20g 无水磷酸氢二钠 2.13g 加双馏水 1 000ml 8、PBS－吐温洗涤液 PBS液 1 ...

问：我正在做这个试验，买了从C2-C16的不同的对硝基苯酚底物，但是令我困惑的是，C10以下的底物，很容易在缓冲液中自发水解，这样就干扰酶活测定。而大于C10的底物又都很难溶解。很是困惑！请问各位做过这项试验的大虾给予我一定的帮助，不甚感激！ 答：30毫克的对棕榈酸硝基苯酯（p-NPP）可以溶于10毫升的异丙醇中，稍微水浴加热就可以完全溶解。我是以（p-NPP）为底物，溶液A：30毫克的对棕榈酸硝 ...

问：向大家请教脂肪酶活力的测定方法、仪器、试剂。多谢指教！ 答：这是我从一篇文献中找到的。用酸价作指标， 用95%乙醇作终止剂， 通过酸价的测定反映脂肪酶分解脂肪的程度， 从而求得酶活力。 方法： 1、粗酶液的制备 用电子天平分别称取粗脂肪酶0.010 g、0.020 g 和0.030 g， 用蒸馏水溶解并定容至100 mL， 配成浓度分别为0.01%、0.02% 和0.03%的粗酶液。 2、实 ...