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孕酮的放射免疫测定法很敏感，但由于孕酮是半抗原，须先同牛血清白蛋白结合，才能注射于家兔，使之产生抗体。牛血清白蛋白结合在孕酮上的不完全部位对抗血清的特异性有很大关系，若结合在C3抗血清无特异性，结合在C6则特异性高，结合在Cll特异性更好。孕酮试剂盒已广泛应用于临床，介绍如下。 一、基本原理 此法采用双抗体放射免疫法 Ag※+Ab+Abl一(Ag※Abl)+(AgAbI)+Ag※ 含孕 ...

问：请教大家一个问题，还请大家指教，我在用pNP(对硝基苯酚酯类)类物质测定脂肪酶活性时，用到一个摩尔消光系数，请问这个摩尔消光系数在不同的温度，不同的缓冲液，或者不同pH情况下能否通用？谢谢，请指教。 答：摩尔消光系数是由给定物质的特性决定的。实际上，被测定物质的摩尔消光系数也会在外界条件影响下发生变化，比如溶液的pH 值、反应的温度等等，同时也有和使用的仪器有关；所以说如果你要用到某一个摩尔消 ...

问：有人做过乳中脂肪酶的检测吗？除了传统的滴定法外，还有更好的方法吗？ 答：乳中脂肪酶没有测过，不过微生物脂肪酶可以用pNPP（对硝基苯棕榈酸酯）测吸光度法测活。 ...

肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF）是一类能直接导致某些肿瘤细胞坏死的细胞因子，有TNF-α与TNF-β两种类型。 TNF-α主要来源于活化的单核/巨噬细胞，TNF-β主要来源于活化的T淋巴细胞。虽然两型TNF的细胞来源不同，结构也不同，但均能与不同的受体结合，故具有极其相似的生物学活性。TNF可进入体液成为分泌型（或可溶性 ...

问：我是做脂肪酶克隆表达的。现在已经将目的基因整合到毕赤酵母GS115中，可是几番诱导下来，就是没有酶活。现在小弟想请教各位战友几个脂肪酶活性检测的问题，怕是表达出来，因为检测方法有误。 1、诱导培养基BMMY的磷酸缓冲液浓度为100mmol/L，请问这个浓度是不是太高？如果脂肪酶表达量很低的话，测定过程中产生的游离脂肪酸也很少。如果活性测定的磷酸缓冲液浓度太高的话，会不会影响测定结果，也就是说将 ...

问：脂肪酶的测定方法有哪些？我的脂肪酶可能活性会很低，我要较灵敏的测定方法。 答：NaOH滴定法、酶标法、分光光度计法等等，有很多，国内相关的论文也有很多。 ...

问：我将脂肪酶固定在大孔吸附树脂D3520并干燥后，想测脂肪酶的酶活。可是树脂干燥后，再放入脂肪酶的反应体系后，树脂颗粒都漂在上面而不混合。请问这种情况下该如何测酶活？（氢氧化钠滴定法测酶活） 另外，即使我测酶活完毕，该怎样将树脂回收呢？直接将反应液过滤，酒精洗涤？请各位战友指教，谢谢！！ 答：我没有做过固定化，是不是你把大孔树脂干燥的过头了呢？你如何控制的条件啊？你可以用三丁酸甘油酯的平板粗略 ...

一、原理 HCG是放射性同位素标记技术与抗原抗体免疫反应相结合的超微量分析法，是用放射性核素（如125I／3H）标记的极微量的示踪抗原（Aundefined）／抗体（Aundefined）与待测抗原Ag／抗体Ag）一起来竞争结合有限的特异性抗体（Ab）／抗原（Ag），故称饱和分析或竞争抑制法，其反应过程为：Aundefined•Ab量固定，．Aundefined+Ag>Ab可结合的数目（抗原过量），Aundefined与Ag竞争结合Ab，直到反应 ...

一、目的要求1.学习电泳原理和技术2.学习和掌握SDS－聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳分离蛋白质技术二、原理聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺(acrylamide，简称Acr)和交联剂NN-甲叉双丙烯酰胺(N，N—methylene-bisacylamide，简称Bis)在加速剂N，N，N，N—四甲基乙二胺(N，N，N，N—tetramethy ...

等电聚焦凝胶电泳是依据蛋白质分子的静电荷或等电点进行分离的技术，等电聚焦中，蛋白质分子在含有载体两性电解质形成的一个连续而稳定的线性pH梯度中电泳。载体两性电解质是脂肪族多氨基多羧酸，在电场中形成正极为酸性，负极为碱性的连续的pH梯度。蛋白质分子在偏离其等电点的pH条件下带有电荷，因此可以在电场中移动；当蛋白质迁移至其等电点 ...

一 、标准管 待测管01020408016012 试管号1，23，45，67，89，1011，1213，1415，16 标准品（不同浓度）100100100100100100 待测血清100100 抗血清（二抗）100100100100100100100100 分析试剂100100100100100100100100 混匀，37℃温育2h 125I－胰岛素100100100100100100100 ...

载体两性电解质必备的条件：1. 可溶性要好，为了保证等电聚焦过程中PH梯度的形成和蛋白样品的迁移，载体两性电解质必须具有很好的溶解性能。2. 紫外吸收低，不发荧光。由于制备分离时，检测蛋白质的方法通常是测量280cm的吸光度，因此要求载体两性电解质在280cm的吸光度尽可能低。3. 在等电点处必需有足够的缓冲能力，以便能控制pH梯度，而不致被样品蛋白质或其他两性物质的缓冲能力改变pH梯度的进程。4 ...

主要仪器试剂仪器：微型电泳系统、电源、注射器、固定和染色用容器试剂：丙稀酰胺、双－丙稀酰胺、载体两性电解质、尿素、过硫酸胺、TEMED、TritonX－100、2－巯基乙醇、溴酚蓝、磷酸、氢氧化钠、氯化钾、三氯乙酸、考马斯亮蓝、甲醇、乙酸。　　储存液：1）30％（w/v）丙稀酰胺，1％（w/v）双－丙稀酰胺；2）20％Triton X100；3）10％三氯乙酸；4）1％三氯乙酸；5）1％溴酚蓝；6 ...

一、放射免疫标记技术 放射免疫标记技术是将同位素分析的高灵敏度与抗原抗体反应的特异性相结合，以放射性同位素作为示踪物的标记免疫测定方法，由于此项技术具有灵敏度高 (可检测出毫微克(ng)至微微克(pg)，甚至毫微微克(fg)的超微量物质，特异性强(可分辨结构类似的抗原)、重复性强、样品及试剂用量少、测定方法易规范化和自动化等多个优点。因此、在医学及其他生物学科的研究领域和临床实验诊断中广泛应用于各 ...

造成误差的可能来源有以下几个方面： 一、各种仪器：设备的准确性、稳定性、效率以及被污染等情况带来的误差。 如：①由于放射性测量仪器的稳定性、效率、样品试管的材料和均匀性及被测物的放射性强度等原因。②由于样品的自吸收，本底校正，测定时间，可能的污染等原因。③在试验室中所有的移液管、微量取样器以及天平的刻度、校准和使用方法等原因。④由于反应试管、移液管以及测定用试管等表面清洁度和所引起的不同吸附等原因 ...

放射免疫分析（radioimmunoassay，RIA）是以放射性核素为标记物的标记免疫分析法。于1960年由美国学者Yalow和Berson创立，并首先用于糖尿病患者血浆胰岛素含量的测定。这是医学和生物学领域中方法学的一项重大突破，开辟了医学检测史上的一个新纪元。它使得那些原先认为是无法测定的极微量而又具有重要生物学意义的物质得以精确定量，从而为进一步揭开生命奥秘打开了一条新的道路，使人们有可能 ...

如果要进行天然等电聚焦电泳，要做一些修改：1. 胶过程中配的凝胶中不需要加尿素；2. 上样缓冲液（2×）5ml：其中1.8ml水，200ul载体两性电解质（同制胶成分），3ml甘油，上样时候于等体积样品混匀，10000×g离心5敏即可上样；3. 室温下电泳，接好电极，恒压下先200V电泳1.5h，再400V电泳1.5h。 ...

一、基本原理 所谓平衡饱和，是指抗原和抗体反应达到再不结合，也不解离的平衡状态，称为饱和状态，即平衡饱和。所以，有人称此为饱和分析法。这意味着抗原或被测抗原、标记抗原、抗体三者一起温育。 二、加样程序 一般先加标准物或被测样品，再加抗血清，最后加标记物。这样的顺序是让标准物或被测物与抗体有短暂的结合，提高抗原的竞争抑制能力。 在小分子半抗原的放射免疫分析中，标记抗原和未标记抗原与抗体结合的亲合力常 ...

等电聚焦有以下几点需要注意： 1. 等电聚焦后可用一根染色的细线（0.1mm）标出染料前沿的位置；2. 不同品牌的载体两性电解质性质上有细微的差别，使用不同来源的载体两性电解质凝胶时候蛋白质分离样式略有差异，若要获得最好的重复性一般不要更换载体两性电解质的品牌；3. 通常，窄范围的pH梯度可以提高分辨率，但是需要时间也比较常，pH梯度范围为2是较好的选择；4. 由于电源和凝胶冷却系统的限制，最长的 ...

固相pH梯度等电聚焦是80年代建立起来的一种等电聚焦技术，其所用的介质是一些具有弱酸或弱碱性质的丙稀酰胺衍生物，它们于丙稀酰胺和甲叉双丙稀酰胺有相似的聚合行为。固定化电解质一端的双键可以在聚合中共价结合到聚丙烯酰胺介质中，其另一端的R集团为弱酸或弱碱，可在聚合物中形成弱酸或弱碱的缓冲体系，利用缓冲体系滴定终点附近 ...