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        家兔椎间盘(intervertebral disc )细胞的体外培养方法

        Material and method: Material : 1、培养皿、培养瓶、烧瓶、试管等。 2、分离组织需要的眼科剪子、眼科镊子。 3、5%CO2孵箱、PH计、95%氧气源。 4、36电动恒温水浴。 5、培养液、各种缓冲液及添加剂DMEM高糖培养基、Hank’s缓冲液 、20%胎牛血清,转换生长因子(TGF-β1)(5ng/mL)、胰岛素-转铁蛋白-硒(10ug/m ...

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        膀胱平滑肌细胞原代培养

        1、麻醉后消毒,下腹正中切口于膀胱颈(结扎处远端约1~2cm),严格无菌操作取出标本、手术台位于超净台旁 2、在超净台,40u/ml庆大霉素溶液中浸泡5分钟 3、生理盐水漂洗1次 4、D-hanks液漂洗1次 5、放入D-hanks液中,除去粘膜、粘膜下及浆膜 如果是Shame组兔,以10ml注射器抽取约8ml D-hanks液,于粘膜层下注射起泡后,剪去粘膜层,直接剪取平滑肌组织,弃浆膜层及其上 ...

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        动脉粥样硬化患者VSMC的提取

        实验材料: 眼科剪刀1把 眼科镊子2把 1×PBS约200ml M199培养液 离心机 5ml小皿 10ml大皿 实验步骤: 1、在超净台内用10ml的离心管分装5ml的1×PBS(已高压灭菌)。 2、手术台上取患者发生动脉粥样硬化改变的病变动脉,分放入准备好的PBS中,拿回实验室在超净台中,无菌条件下剥去外膜,用手术刀片刮去内膜,留下中膜并将其剪成1×1mm大 ...

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        胶质细胞培养(astrocyte, oligodendrocyte)

        取材及胶质细胞的混合培养 1、P2 SD大鼠经低温麻醉后以碘酒和75%乙醇消毒,无菌操作下,断头放入预冷的D-Hanks液中,在解剖显微镜下取大脑皮层并除去脑膜。 2、剪碎组织成1mm3大小,加入胰酶-EDTA消化液并放入37℃孵箱内消化20min,中间摇晃一次。 3、随后用滴管吸出组织转移到装有预冷的MEM+10%FBS(Glial Medium,GM)的离心管内终止消化液作用5min。 4、吸 ...

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        大鼠皮层神经元原代培养

        液体配制: 硼酸硼砂缓冲液:0.05M四硼化钠45ml,0.2M硼酸55ml,pH8.4; 胰酶-EDTA消化液:胰酶-0.125g;EDTA-0.2g;D-Hanks平衡盐液定容至100ml 所用的培养板、培养瓶或玻片预先经100μg/L多聚赖氨酸硼酸盐缓冲液于37℃包被4h,三蒸水洗三遍晾干备用。 操作步骤如下: 1、孕16d SD大鼠经戊巴比妥钠麻醉后,碘酒、75%乙醇消毒腹部皮肤,依 ...

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        原代胚胎成纤维细胞培养

        一、实验器材: 手术小直剪刀三把、眼科直镊子三把、眼科弯镊子两把、玻璃平 皿三套、200目尼龙滤网、50ML、15ML离心管和手术刀片。以上物品均需要高压灭菌消毒处理。 二、实验试剂: 无Ca+2和Mg+2的PBS、0.05%胰酶0.53mmol/L EDTA溶液、小鼠胚成纤维细胞(MEF)生长培养基:高糖DMEM加10%FCS。 三、实验动物: 孕期14至16天的孕鼠 四、实验步骤: 1、处死孕 ...

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        乳鼠心肌细胞培养方法详述

        一、材料 所需液体:Hanks液、低糖DMEM液、高糖DMEM液、胰酶消化液、双抗液、碳酸氢钠液、盐酸液。 试剂 Trypsin SDS DMEM 均购于 Sigma Chemical Co.小牛血清购于杭州四季青生物制品有限公司,其余均为国产分析纯。 取鼠:标准SD大鼠,鼠盆用棉铺好,取鼠。 物品:白大衣、饭盒 小剪子、小镊子(4套)(一套剪皮肤、一套开胸取心,一套剔除心缘纤维组织,一套剪碎心脏 ...

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        常用原代动物细胞培养——肝星状细胞培养

        材料 相差显微镜,荧光显微镜,手术器械,雄性SD大鼠,体重250-450 g,戊巴比妥钠,200目尼龙网,小牛血清(或胎牛血清,则更好),DMEM,胰酶消化液(以HBSS配),Nycodenz(以GBSS配),D-Hanks'(KCl 0.4 g/L,KH2PO4 0.06 g/L,NaCl 8.0 g/L,NaHCO3 0.35 g/L,Na2HPO4.7H2O 0.06 g/L或Na2HPO4 ...

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        薄层色谱的制作方法规程

        1.方法原理 2.薄层板 2.1手工自制板 2.1.1 玻璃板的要求 2.1.2 制作方法 2.2商品化供应的预制板和高效板 2.2.1板的尺寸 2.2.2预制板和高效板的预洗及活化 3.样品点样 3.1点状点样和条带点样 3.2样品点样位置 4.层析 4.1展开室 4.1.1直立式双槽展开箱 4.1.2 水平展开室 4.1.3 自动展开室(AMD) 4.2溶剂 4.3展开室状况 4.3.1方法A ...

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        多肽基本常识

        一、保存 大多肽在-20℃很稳定,特别是冷冻干燥并保存在干燥器中,在将它们暴露于空气之前,冷冻干燥多肽可以放于室温。这将是湿度影响减少,当无法冷冻干燥时,最好的方法是以小的工作样量存放。 对于含Cys, Met orTrP的多肽,脱氧缓冲剂对其溶解必不可少,因为这种多肽可易空气氧化,在封瓶前,慢慢流过多肽的氮气或氩气也会降低氧化作用。含Gln或Asn的多肽也容易降解,所有这些肽与不含这些有问题解 ...

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        蛋白等电聚焦凝胶电泳技术

        1.原理 等电聚焦凝胶电泳是依据蛋白质分子的静电荷或等电点进行分离的技术,等电聚焦中,蛋白质分子在含有载体两性电解质形成的一个连续而稳定的线性pH梯度中电泳。载体两性电解质是脂肪族多氨基多羧酸,在电场中形成正极为酸性,负极为碱性的连续的pH梯度。蛋白质分子在偏离其等电点的pH条件下带有电荷,因此可以在电场中移动;当蛋白质迁移至其等电点位置时,其静电荷数为零,在电场中不再移动,据此将蛋白质分离。 ...

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        琼脂糖凝胶电泳技术

        1、实验目的: 学习与掌握DNA电泳的技术方法,利用琼脂糖凝胶电泳检测DNA纯度、含量以及分子量,及分离不同大小DNA片段。 2、实验原理: 电泳概念及种类~2• 电泳: 是指带电粒子在电场中向与其自身带相反电荷的电极移动的现象 电泳基本原理 迁移率(或泳动度)是指带电颗粒在单位电场强度下泳动的速度,可用下列公式计算: U =υ/E =(d/t)/(V/l) =dl/V ...

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        Performance Comparison of the Experion Automated Electrophoresis System

        Introduction The assessment of RNA integrity and purity is an important first step to many gene expression analysis applications. It is preferable to use high-quality intact RNA as a starting point fo ...

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        全自动电泳疑问解答FAQs

        Analysis Kits (Chips and Reagents) Experion Automated Electrophoresis — Sample Types What types of samples can the Experion separate and analyze?The Experion automated electrophoresis system se ...

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        Varian cary 100型紫外分光光度计标准操作规程

        一、目的: 建立Varian cary 100型紫外分光光度计标准操作规程,以保证Varian cary 100型紫外分光光度计的正确使用。 二、范围: 适用于Varian cary 100型紫外分光光度计操作的全部行为。 三、责任: 中心化验室对本SOP的实施全面负责。 四、内容: 4.1测定前的准备工作 4.1.1接通电源并将电源开关打开至“ON”位置,依次打开显示器 ...

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        722型光栅分光光度计使用说明

        1.构造原理 722型分光光度计由光源室、单色器、试样室、光电管暗盒、电子系统及数字显示器等部件组成。光源为钨卤素灯,波长范围为330nm~800nm。单色器中的色散元件为光栅,可获得波长范围狭窄的接近于一定波长的单色光。其外部结构如附图9所示。722型分光光度计能在可见光谱区域内对样品物质作定性和定量分析,其灵敏度、准确性和选择性都较高,因而在教学、科研和生产上得到广泛使用。 72 ...

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        紫外可见分光光度计的日常维护

        世界上第一台紫外可见分光光度计,于1940年由美国的Beckman公司研制成功,于1945年正式推出商品仪器。当时的仪器很简单,自动化程度很低,但随着科学技术的发展,它的发展非常快。目前,已是世界上使用最多、覆盖面最广的一种分析仪器,已在生命科学、材料科学、环境科学、农业科学、计量科学、食品科学、地质科学、石油科学、医疗卫生、钢铁冶金、化学化工等各个领域的科研、生产、教学等工作中得到了非常广泛的应 ...

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        紫外分光光度计的基本工作原理、特点和主要用途

        基本工作原理: 和红外光谱仪相似,利用一定频率的紫外-可见光照射被分析的有机物质,引起分子中价电子的跃迁,它将有选择地被吸收。一组吸收随波长而变化的光谱,反映了试样的特征。在紫外可见光的范围内,对于一个特定的波长,吸收的程度正比于试样中该成分的浓度,因此测量光谱可以进行定性分析,而且根据吸收与已知浓度的标样的比较,还能进行定量分析。 特点和主要用途: 紫外-可见光谱仪涉及的波长范围是0.2~0.8 ...

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        紫外可见分光光度计的挑选和评价

        紫外、可见分光光度计是一种常规的实验室分析仪器。可广泛用于无机物、有机物的定性、定量分析中,在科研、制药、化工、环保、卫生、防疫等领域中发挥重要的作用。 有人说,紫外、可见分光光度计就是一把尺子一个天平,凡是有化验、分析的地方都能用到它。那么,如何评价一台紫外、可见分光光度计的优劣呢?首先,要考察它的外观。试想,一台外型呆板、做工粗糙的仪器,怎么可能是一台先进的仪器呢?然后,我们探讨一下会对仪器 ...

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        紫外分光光度法常见问题

        一、仪器的校正和检定 由于温度变化对机械部分的影响,仪器的波长经常会略有变动,因此除应定期对所用的仪器进行全面校正检定外,还应于测定前校正测定波长。常用汞灯中的较强谱线237.83、 253.65、 275.28、296.73、313.16、334.15、365.02、404.66、435.83、546.07与576.96nm;或用仪器中氘灯的486.02与656.10nm谱线进行校正;钬玻璃在2 ...

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