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问：我现在做高产纤维素酶菌株的筛选工作，筛选过程中我发现有一部分菌株发酵的第一天就出现峰值，随后第二天就会迅速下降，没有通常所说的逐渐上升和逐渐下降的过程，我想请教各位前辈像这样较早的就出现产酶高峰，但又不能维持的菌是好还是不好啊？ 答：那说明这个菌株生长周期短。在产酶高峰时就停止培养，去提取酶就好，产酶高峰出现越早越好处啊。 ...

问：我那天看了一篇文章，在测纤维素酶的酶活时，除了测了C1CX酶的酶活，还测了一个淀粉酶的酶活，但好象纤维素酶只含3种：C1CX和β葡萄糖苷酶啊，这样测合理吗？ 答：纤维素酶一般不包含淀粉酶。我看了很多文献，纤维素酶应该只含有你说的三种酶，不过不同的菌含有的酶不同，比如真菌和细菌包含的酶就是不一样的。 此外我还看到有些学者采用滤纸酶活来检测总的纤维素酶的活力，具体的试验步骤和测定纤维素酶 ...

问：现在想进行纤维素酶的纯化，不知道从哪里下手，请大家指教一下，非常感谢。 答：主要还是看你研究纤维素酶的目的是什么，是了解它的功能还是应用特点，还是研究它的发酵工艺，如果在发酵这块，没必要搞纯化，以提高酶活和优化工艺为主，也有很多东西可以做。 至于纯化，要先了解青霉产纤维素酶的现有报道，掌握酶系构成、提取、粗酶制备、检测方法等等，再考虑如何分离纯化不同组分。一般还是离子交换为主，先了解蛋白的分 ...

问：因我做的是非淀粉多糖酶制剂方面的课题，中间要测纤维素酶的活性，我用了两种方法测，但测的结果还是与标定的酶活性有很大的差距，不知道问题出在那里？？请高人指点哦！ 答：酶活性可分为全活性和比活性两种。酶的全活性为每克干物质每分钟释放的相应糖的微摩尔（µmol)数 单位为µmol/gDM min。酶的比活性为每毫克蛋白每分钟释放的相应糖的微摩尔（µmol)数，单 ...

问：本人要做纤维素酶的分离纯化，请高手传授方法。 答：纤维素酶并不是单一的蛋白酶，而是一个酶系，其中包括至少3种组分。如果你用重组菌表达其中的一个片段或者产酶基因，那么要看你的载体是什么？如果有亲和标签可以用亲和层析，如果没有，那就只能考虑疏水或离子交换等方法了。不过工业上制备纤维素酶一般是不用纯化的，中试以上规模的酶制剂生产大多采用真菌发酵，纤维素酶会直接分泌到培养基中，然后通过结晶就可以得到粗 ...

问：大看了个筛选纤维素酶的实验，要用CMC-NA ，可实验室没有，有可以代替的吗？ 答：当然有很多代替品了，比如说滤纸、稻草粉等。纤维素酶应该是一个比较复杂的酶系，如果单一的用CMC作为底物进行筛选，得到的酶不一定就是纤维素酶，建议使用稻草粉，这样能够比较真实地模拟自然环境，筛选得到的纤维素酶比较实用！ 答：我也做过这方面工作，有几个筛选配方可以给你，在附件里。 ...

问：我先后做了两批纤维素刚果红培养基筛选菌种，接种后，发现第一批能产生红色水解圈，而第二批能产透明圈．这两批培养基的配方完全相同，我想请教一下，到底应该产生什么效果？ 答：利用纤维素刚果红培养基筛选菌种的原理是： 1、刚果红可以跟大分子多糖牢固结合。 2、纤维素是大分子多糖，跟刚果红牢固结合。 3、纤维素酶降解平板中的纤维素成小分子糖，那么刚果红无法与小分子糖结合，就被洗脱下来，呈现透明圈。 4 ...

纤维素是地球上最丰富的可再生有机资源，其生物降解完全是微生物--细菌和真菌完成的。 1、真菌：分泌胞外游离的纤维素酶，以水解酶机制和氧化酶机制降解纤维素。 2、细菌纤维素酶则是以形成多酶复合体结构而起作用，能更加彻底有效地降解天然纤维素。 纤维素完全降解需要三类酶的协同作用：内切葡聚糖酶、外切葡聚糖纤维二糖水解酶、B-葡萄糖苷酶。目前、纤维素酶的研究热点有： 1、以纤维素为添加剂 生产可完全降解的 ...

内容简介： We developed a competitive enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) to analyze brevetoxinsusing goat anti-brevetoxin antibodies obtained after immunization with keyhole limpet hemocyanin-brevet ...

内容提要： 一、ELISA 标准操作要点 1、 标本的采取和保存 2、加样 3、保温 4、洗涤 5、 显色和比色 二、本底及假阳性产生的原因分析 1、 基因工程抗原与合成肽抗原的区别 2、假阳性本底产生的原因 三、cut off 值附近血清的处理 1、cut off 值附近的值是客观存在的 2、怎样对待cutoff 值附近的血清 ...

文件简介： 点击下面的链接查看全文： ...

文件预览： 点击下面的链接查看全文： ELISA II.ppt ...

Table of Contents 1、 Introduction - What’s an ELISA? 2、 Assay Formats - What are my choices? 3、 How to Choose an Assay Format - I know what I want to measure. What do I do? 4、 Factors to Consid ...

1.　ELISA的原理 2.　ELISA的类型 3.　试剂准备： 免疫吸附剂 结合物 酶底物的准备 4.　对照设定 5.　标本的采取和保存 6.　结果判断 ...

丁香园网友lidm的问题为： 我要分析骨髓间充质干细胞的表面抗原，以分析我提纯的细胞是否有许多造血干细胞和成纤维细胞。请赐教！ 丁香园网友schoman的回答为： 骨髓间质干细胞的检测并不难，只要有荧光标记得抗体，操作非常容易，但是，对于骨髓间质干细胞的特异性标记我并不熟悉，请查找专业的文献，然后，按生产公司定购产品即可。 丁香园网友doctormeng的问题为： 流式与westen在检测蛋白表达 ...

简介： 这是一本很实用的细胞培养方面的书！ 【书籍名称】：《细胞培养》 【书籍类别】：实验技术 【书籍格式】：PDF 【书籍来源】：主编司徒振强 【书籍大小】：6.4M 【书籍描述】：内容简介 第一章 细胞培养的一般知识 第二章 培养室的设备、设置和准备工作 第三章 培养用液及培养基 第四章 基本技术 第五章 正常组织细胞的培养 第六章 肿瘤细胞的培养 第七章 培养细胞生长状况的观察 第八章 细 ...

1.Crosslink protein DNA complexes in vivo Grow cells in suspension and collect 5 x108 cells by low speed centrifugation.Resuspend cells in 50ml media.In fume hoodadd 1.4ml 37% fomaldehyde solution to ...

1.Two rounds of DNA synthesis to incorporate fixed sequences Prepare the following: Reaction tube containing the following: 7ml DNA to be amplified and labelled 2ml 5X T7 Sequenase Buffer 1ml 50mM Pim ...

This method uses carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE)rather than fluorescein isothiocyanateresulting in more reliable labeling.Succinimidyl esters are excellent reagents for amine modification ...

Day 0 and 1 Materials 1.0.5 mM ATP0.2 mM CaCl22 mM Tris-HClpH 8.0 at 4℃250 ml for day 0. 2.100 mM KCl100 mM boric acidpH 8.4 at 4℃10 ml. 3.0.5 mM ATP2 mM MgCl2100 mM KCl2 mM DTT2 mM PIPESpH 7.01000 ml ...