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IVC系统技术剖析

由于SPF级动物需要投入大量的经费和时间,投资者必须保护这些动物免受污染。关于隔离水平,存在着以下几种不同的水平:房间水平,弹性膜隔离和笼具水平的隔离。其中,笼具水平的隔离是最具有可塑性和实用性的装置,它由一个带顶层过滤的微隔离动物笼和一个100级超净工作台组成。 配合使用严格的无菌操作技术,笼具水平的隔离技术能保证动物免受微生物污染及免于得病。 绝大多数局部的隔离系统设计的基本原则是:既要保护动 ...

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凋亡细胞核DNA片段检测方法进展

摘 要:当今生物学领域的研究一个热点之一是细胞凋亡。开展对细胞凋亡的研究,首先要解决是方法学问题。作者从凋亡细胞的特征性核DNA片段检测着手,阐述了多种凋亡细胞核DNA片段检测方法以及近年来的一些新进展。 细胞凋亡(apoptosis)又称细胞凋谢或称程序性细胞死亡(Programmed cell death,PCD),是有别于细胞坏死而受基因控制的一种主动性细胞自杀过程。对细胞凋亡的研究已成为当 ...

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免疫比浊法和乳胶凝集法检测类风湿因子的结果比较分析

类风湿因子(RF)是诊断类风湿关节炎(RA)的一个重要的实验室指标,其检测方法很多,国外主要采用免疫比浊法(ITA)、酶联免疫吸附法(ELISA)、放射免疫法(RIA)等,国内仍普遍采用乳胶凝集试验(LAT),该方法操作简单,不需要特殊仪器,成本低,但只能进行半定量结果分析。本文采用ITA和LAT同时检测了RA和其他结缔组织病(CTD)患者及正常人的血清RF含量,并比较分析两种检测RF方法的结果。 ...

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独立通风笼盒(IVC)操作规程(SOP)

一、目的: 保持动物有舒适的生活环境,避免动物受病源微生物的影响。 二、背景知识: 20世纪80年代,意大利Thcniplast公司,在带空气过滤帽塑料盒的盒帽上方加了一个进风口,希望促进盒内的通风换气,从而出现了第一个独立通气笼盒(Individually Ventilated Cages,IVC)。IVC笼盒经过十多年的使用、研究和不断改进,特别是在材料、净化、微电子等现代技术的带动下,一个全 ...

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免疫抑制比浊法测定HbA 1c 的方法学评价

【摘要】 目的 评价用自动生化分析仪免疫抑制比浊法测定糖化血红蛋白(HbA 1c )的可靠性,并与常规方法(微柱法)作相关比较。 方法 根据美国国家试验室标准委员会(NCCLS)EP5-A、EP9-A文件要求进行方法精密度、准确度和线性范围的评价试验。 结果 该方法的批内和批间CV<4%,试验总不精密度为:x(HbA 1c )为4.85%时,CV为2.8% ...

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SPF级实验动物房的建设及其管理

【摘要】: 目的 探讨SPF(specific pathogen free,无特定病原体)级实验动物房在健康相关产品检测实验室中的建设和管理办法。方法 依照《中华人民共和国实验动物管理条例》和《广东省实验动物管理办法》的要求,对SPF级动物房进行设计和建设,并制定了一系列的管理措施。结果 通过科学的设计建设和严格的管理,该SPF级动物房的环境条件均符合国家有关标准,经广东省实验动物监测所验收合格, ...

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透射免疫比浊法和速率散射免疫比浊法测定C反应蛋白的比较

【摘 要】目的:评估透射免疫比浊法和速率散射比浊法检测C反应蛋白(CRP)的灵敏度和特异性。方法:用免疫透射比浊法和速率散射比浊法同时检测了80例各种患者血清中CRP浓度。结果:两种方法在8—20mg/L、20~40mg/L、40~80mg/L、80~160mg/L、160~300mg/L范围内测定C反应蛋白的相关系数是0.990、0.996、0.995、0.992、0.997.说明两 ...

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速率散射比浊法测定IgG、IgM、IgA

【检测方法】 速率散射比浊法 【方法学原理】 抗原(免疫球蛋白)与抗体(抗免疫球蛋白)在液相中可快速反应,形成的免疫复合物颗粒具有特殊的光学特性,使反应液出现浊度。速率是指单位时间内抗原、抗体形成免疫复合物(CIC)的速度。随着时间的延长免疫复合物总量是逐渐增加的,而速率变化则由慢一快+慢,其反应速率最快的某一时间称为速率峰。当反应体系中的抗体(抗免疫球蛋白)量保持过剩时, ...

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20°C下配制的缓冲液,在较高或较低的温度下PH值会改变吗?

对于普通使用的缓冲液,PH值随温度变化而变化。 下表列出温度改变10℃时,PH值的变化情况: 例如 20℃下配制PH7.4 Tris缓冲液40℃时PH值为 7.4-(2x0.310)=6.78 缓冲系统 pKa/20℃ pKa/10℃ Mes 6.15 -0.110 Ada 6.60 -0.110 Pipes 6.80 -0.085 Aces 6.90 -0.200 Bes 7.15 -0 ...

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原代细胞培养和传代培养的方法及其注

初代培养 原理 将动物机体的各种组织从机体中取出,经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA)或机械方法处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖,这一过程称原代培养。 仪器、材料及试剂 仪器:培养箱(调整至37℃),培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱(37℃) 材料:动物组织块 试剂:1640培养基(含20% ...

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实验动物设施建筑技术规范(征求意见稿)

前言 本规范是根据建设部建标函[2005]84号文 “关于印发《二○○五年工程建设标准规范制订、修订计划(第一批)》的通知”的要求,由中国建筑科学研究院作为主编单位,会同有关科研、设计、施工和管理单位共同编制的。 在编制过程中,规范编制组进行了广泛、深入的调查研究,认真总结多年来实验动物设施建设的实践经验,积极采纳科研成果,参照有关国际和国内的技术标准,并在广泛征求意见的基 ...

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快速免疫比浊法测定尿微量白蛋白/肌酐的临床价值

【摘要】目的:评价快速免疫比浊法测定尿微量白蛋白/肌酐在诊断糖尿病早期肾损害的临床应用价值。方法:以放射免疫法作对照,用快速免疫比浊法测定30例糖尿病患者的尿微量白蛋白/肌酐。结果:以放射免疫法为金标准,快速免疫比浊法的敏感性为92.3%,特异性为82.4%,准确度为93.3%,两者测定结果差异无显著性(P>0.05)。结论:快速免疫比浊法作为一种方便、快速、定量的测定尿微量白蛋白/肌酐的方 ...

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细胞培养常用器材与试剂

器材与试剂 干粉型培养基、胰蛋白酶,青霉素、链霉素. 纯净水系统、电子天平、PH计、磁力搅拌器等 具体步骤 1. 水: 细胞培养用水必须非常纯净,不含有离子和其他的杂质。需要用新鲜的双蒸水、三蒸水或纯净水. 2. PBS (也可用于其它BSS,如:Hanks,D-Hanks液的配制): 主要用于免疫组化染色时组织或细胞的漂洗 溶解定容:将药品(NaCl 8.0g,KCl 0.2g,Na2HP ...

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速率散射比浊法检测补体C3、C4

补体(complement,C)是由近20种不同血清蛋白组成的多分子系统,约占血清球蛋白总量的10%。补体在血清中的含量相对稳定,不因免疫应答而增加,仅在某些病理情况下才会发生波动。补体系统的基本组成包括9种血清蛋白成分,按发现的先后顺序而分别命名为C1-9。补体是一个复杂的反应系统,除了溶解细胞和协助杀菌作用外,还可促进炎症反应,与其他生物活性系统有相互促进、相互制约的关系,这些关系的紊乱是导致 ...

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细胞培养基的基本要求

体外培养的细胞直接生活在培养基中,因此培养基应能满足细胞对营养成分、促生长因子、激素、渗透压、pH等诸多方面的要求。 营养成分 1. 氨基酸:所有细胞都需要12种必须氨基酸:缬、亮、异亮、苏、赖、色、苯丙、蛋、组、酪、精、胱氨酸。 2. 单糖:六碳糖是主要能源,也是合成某些氨基酸、脂肪、核酸的原料。细胞对葡萄糖的吸收能力最高,半乳糖最低。 体外培养动物细胞时,几乎所有的培养基或培养液中都以葡萄糖 ...

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如何用台盼兰计数活细胞

用无血清培养基把细胞悬液稀释到200-2000个/毫升,在0.1毫升的细胞中加入0.1毫升的0.4%的台盼兰溶液。 轻轻混匀,数分钟后,用血球计数板计数细胞。活细胞排斥台盼兰,因而染成蓝色的细胞是死细胞。 ...

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如何选用培养基

培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞,很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之,首选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养,各种目的无血清培养的首选是AIM V培养基(SFM)。在开始进行新的细胞培养时,可以参考下表所列的条件: 细胞系 细胞类型 种 组织 推荐使用的培养基 293 成纤维细胞 人 胚胎肾 MEM 10% 热灭活马血清 3T6 成纤维细 ...

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实验动物房的设计

根据实验动物微生物控制标准,可将实验动物分为四级: 一级 普通动物(CV),系指微生物不受特殊控制的一般动物。要求排除人兽共患病的病原体和积少数的实验动物烈性传染病的病原体。为防止传染病,在实验动物饲养和繁殖时,要采取一定的措施,应保证其用于测试的结果具有反应的重现性(即无论不同的操作人员,在不同的时间,用同一品系的动物按规定的实验规程所做的实验,都能获得几乎相同的结果)。 二级 清洁动物(CL) ...

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细胞培养常见问题与分析

1. 冷冻管应如何解冻? 取出冷冻管后, 须立即放入37 ℃水槽中快速解冻, 轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化, 并注意水面不可超过冷冻管盖沿, 否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时, 必须注意安全, 预防冷冻管之爆裂。 2. 细胞冷冻管解冻培养时, 是否应马上去除DMSO? 除少数特别注明对DMSO 敏感之细胞外, 绝大部分细胞株(包括悬浮性细胞), 在解冻之后, 应直接放入含 ...

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IVC操作规程

IVC指独立通气笼盒。 动物实验设施设备是实验动物科学的技术条件保障,而独立通气笼盒(英文缩写IVC)又是一种节能、环保和安全可靠的动物实验设备。 1、目的: 保持动物有舒适的生活环境,避免动物受病源微生物的影响。 2、依据: 《实验动物管理条例》(中华人民共和国国家科学技术委员会令第2号,1988),《动物饲养设施条件要求》(中华人民共和国国家标准,2001),Guide for the Car ...

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