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【求助】细胞免疫组化 参与者：sunnyBIO 没有做过，但是最近要尝试. 网上及园子里找过有许多种方法，但是不知道那种合适. 希望做过的各位可以给我指点. 在此希望高手可以提供详细的方法.不胜感激！ 参与者：sunnyBIO 米有人可以帮帮偶吗? 参与者：zhangyuelin1999 本实验室的方法，参考一下： 细胞爬片后， PBS洗3×5min 4%多聚甲醛固定30分钟（4度冰箱 ...

牙髄细胞中主要是成纤维细胞，贴壁生长。 传代方法： 弃培养液（尽量吸干） 加基础培养基配置的0.2%trypsin+0.02%EDTA 轻轻翻转培养瓶使消化液浸过有细胞的瓶壁 重复4～5次 迅速吸去消化液 镜下观察细胞变圆回缩（约1分钟） 加入完全培养液（DMEM+10% FCS）终止反应 吹打后，1:2接种，继续培养。 ...

我用的是DMEM低糖培养液，每次传代前，将培养液，PBS，0.25％的胰酶（没加edta）放37度烤箱预热（此做法是减少4度的凉液体对细胞的刺激，以防细胞死亡）。 每次换液时，一定要烧培养瓶口，做好无菌观念。 先抛弃旧液，用PBS先冲净残留的血清，再加PBS用滴管轻轻的吹打细胞，将死细胞吹打掉。 加胰酶时注意：若用加edta的，记住了，在镜下看到细胞在收缩时，赶快吸出胰酶，加血清中止消化。血清可抑 ...

【求助】关于如何测定物质的亲水性和疏水性问题 参与者：香香会馆 大家好，对于亲水性和疏水性问题，我的理解是与水的接触角小于90度的就是亲水的，反之就是疏水的，但是对于具体的物质该如何判断，或者有什么方法直接测定呢？ 比如小分子的多肽，该如何判断其亲水性？请大家不吝指教！ 参与者：fishbody 一般化合物的亲水亲脂性是通过测它在水及正辛醇中分配系数。 正辛醇是一种长链烷烃醇，在结构上与生物体内的 ...

弃原培养基 D－Hanks洗一到两次（减少血清对胰酶消化作用的干扰） 0.250%胰酶消化 倒置相差显微镜下观察，细胞变圆、收缩突起时以血清终止消化（如含EDTA可以在此时吸出消化液，注意掌握时机，否则会将细胞也一同吸走） 加入适量DMEM，小心吹打，镜下观察细胞都已消化下来，加DMEM至终体积-->转移细胞至其它培养瓶或皿。 经验教训：以前我们配的消化液含有EDTA，但最终没有吸出来，传 ...

【求助】高分子物质如何溶解用于细胞实验？ 参与者：lihai584 我做的实验是考察一种高分子物质对细胞的作用，现在碰到的一个问题是用什么来溶解这种高分子物质。看到别人考察某种药物对细胞的作用，通常选用的方法是用培养基溶解药物，然后和细胞共孵育；我选用的那种物质水溶性很好，但是由于是高分子多糖，所以在预定的浓度下黏度很大。 现在用流式细胞仪进行检测，这个难点更加突出。 方案一：细胞培养，加入高分子 ...

弃去培养基 以D-Hanks'液洗两次 0.25％胰酶消化2-3min放置于CO2孵箱中 镜下观察细胞变圆回缩 以完全培养基（DMEM+10% FBS）终止反应 吹打后，1:2接种，继续培养。 ...

所需的D-HANK'S液和胰酶和用1640配置的适当浓度小牛血清最好都放在37度预热十分钟左右，让它们和细胞生长环境的温度是一样的。这样能达到既对细胞没有外来刺激的作用又能达到反应的最佳条件。 我用的是小培养瓶，方法是:先把旧的培养液倒掉，用D-HANK'S大约3ml洗一次，加浓度为0.1%的胰酶进行消化，添加量只要能均匀的覆盖培养瓶底，大约要1.5ml，最好把瓶盖旋紧放到37度培养箱里培养3-5 ...

我曾经做过原代培养的成骨细胞传代和骨髓基质细胞以及cos7细胞的传代。基本的操作过程都是： 倒掉或者吸掉培养基 37度预温的PBS洗涤细胞3次 加入浓度为0.1％的胰酶和0.05％EDTA进行消化，添加的量看所用的培养瓶大小，可以在室温下消化，也可以在37度进行消化 在显微镜下观察，等细胞成片脱离时，加入3毫升含血清培养基中止消化 将细胞悬液转移到离心管中1000rpm离心5分钟收集细胞 弃上清， ...

做好准备工作之后，先把旧的培养基倒掉。再用PBS洗两遍，然后加0.05%胰酶/EDTA，剂量根据培养瓶大小定，一般是25cm 2 的瓶子大约0.8-1ml，轻摇10——15秒，使消化液均匀覆盖瓶底即可，再倒掉。置培养箱3-5分钟(看消化效果而定)，等大部分细胞呈流沙状滑落时，即加入培养基终止消化，一般以1:5左右的比例传代(视计数结果和看细胞长满的程度而定)。 这种方法养比 ...

我正在培养MCF-7细胞，在此介绍一下我给细胞传代的经验： 细胞放在显微镜下观察，细胞无污染、退缩，等其长满培养瓶约70%-80%时即可进行传代操作，具体步骤如下： 1、 打开瓶盖，弃上清2.D-HANK‘S夜（以50ml培养瓶为例，下同） 2、吸管清洗后弃之； 3、加0.25%胰酶2吸管； 4、轻摇晃后置入37度温箱； 5、3-5分钟后置显微镜下观察，见细胞胞质退缩，变圆； 6、吸去 ...

Jurkat细胞（人外周血白血病T细胞），是一种悬浮细胞。我的经验如下： 1、培养液：RPMI1640，15％小牛血清，2％Na2CO3，1％HEPES，青霉素100IU／1ml，庆大霉素100IU／ml； 2、培养条件：5％CO2，37度，30％湿度； 3、细胞复苏：要快速将冻存管放入37度水中，不断轻轻摇晃，直到细胞完全溶解，加入10ml左右的培养液，800～1000rpm，10分钟离心，之后 ...

vero（非洲绿猴肾cell):贴壁细胞，以25ml小方瓶为例，培养液用的是MEM。 MEM的配制：10%小牛血清，1%双抗，3%谷氨酰胺，1~1.5%NaHCO3. 传代方法： 1、倒掉培养液，如果细胞脏的话可用PBS洗两次，否则不用。 2.、胰酶0.25%2ml消化1~3分钟，容易消化. 3、倒掉胰酶，加MEM9~12ml将贴壁细胞摇至悬浮，并用吸管吹匀，一传三或一传四。 4、置37度，5%C ...

【求助】测定细胞内钙离子浓度都有哪些方法？ 参与者：junxia 想测定某一蛋白对细胞内钙离子浓度的影响。请教各位大虾都有哪些测定方法？好像常用的是共聚焦？除此之外呢？ 参与者：gzgygy 单个观察用confocal。 群体准确性最高的不是confocal而是流式。 参与者：jc_484190 对，流式是不错的，建议你可以试试， 参与者：junxia 楼上两位能提供流氏的参考文献或资料么？ 参与 ...

【求助】关于测定细胞MDA的方法 参与者：m05yuwei 各位战友： 大家好！我想做细胞的MDA，不知用什么方法好。用比色方法一个样本需要多少细胞？细胞太少是不是测不出？有人说要达到一定数量才行。具体步骤可否详告？ 参与者：m05yuwei 没人帮个忙吗？ 参与者：无影无踪 MDA是丙二醛吗？如果是的就比较容易了 参与者：无影无踪 细胞内的检测需要经过适当的处理，即制成约10%的匀浆液，放置-2 ...

【求助】测细胞上清液胰岛素 参与者：hanfeng8225 各位师兄.师姐： 我养的INS－1细胞，想测细胞上清液胰岛素，请问用什么方法啊，谢谢指教！ 新手请多帮助！谢谢！ 参与者：yuqi881 检测液体中胰岛素含量可用的方法： 1、ELISA方法：需要ELISA方法检测胰岛素的试剂盒和酶标仪。 2、放射免疫方法：需要放射免疫法检测胰岛素的试剂盒和放射免疫分析仪 3、化学发光方法：需化学发光法检 ...

SP 2/0是小鼠骨髓瘤细胞株，贴壁生长，科室给学生开实验就用此细胞，所用培养基为1640，用小牛血清，浓度15%生长较好。培养孵箱为37度，5%的CO2。 开始将复苏的细胞传到小培养瓶（如25ml)，由于细胞分泌各种因子及细胞间的相互作用，因此生长较快，1-2天就可进行传代（当然要达到80-90%的融合）。 消化采用0.25%的胰酶，在显微镜下观察，看细胞形态变圆，而且细胞间界限明显后，或有极少 ...

【求助】免疫细胞化学固定液的选择 参与者：swift11 求助各位大虾： 我是新手上路，准备做免疫细胞化学。我要检测细胞内的一种蛋白质，用什么固定也比较好？ 参与者：琴心剑胆 4%多聚甲醛 参与者：docqian 用4% PFA固定一般比较好。 此外也可以用丙酮，或者甲醇固定。 需要说明的是，固定对有些抗体很重要，需要选择特定的固定，一般时候，抗体的说明会说明。例如，我染色细胞线粒体的时候（oxp ...

首先要把0.25%的胰酶和培养液在37度水浴20~30分钟(预热)。从培养箱中拿出培养的细胞瓶(一般我是让它长到90%几再传代的)，吸去培养液，可用PBS洗两遍。也可不洗。加入适量0.25%胰酶消化(试瓶子的大小而定，如250毫升的瓶子加1毫升就行了)，让它都浸湿细胞就可以吸去了。等个三十秒就在手上拍打，不要太用劲。就可以看到细胞脱落了，再加入3毫升左右的培养液吹打(这时加的培养液不要太多，否则难 ...

1 按下稳压电源工作电源开关键至“ON”状态。依次接通P680型输液泵、ASI-100自动进样器、柱温箱、检测器、电脑。 2 更换蠕动泵清洗瓶中5%的甲醇(如果仪器经常使用则建议每周更换两次，如果仪器很少使用则每次使用前必须更换。) 3 确认洗针瓶中的洗液是否太少，若太少，则需补充或更换。洗液一般为：50%的甲醇。 4 排泵内气泡 4.1 拧松泵右侧的快速清洗阀（反时针两圈 ...