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        HT1080细胞的传代经验

        互联网

        6960

        做好准备工作之后,先把旧的培养基倒掉。再用PBS洗两遍,然后加0.05%胰酶/EDTA,剂量根据培养瓶大小定,一般是25cm 2 的瓶子大约0.8-1ml,轻摇10——15秒,使消化液均匀覆盖瓶底即可,再倒掉。置培养箱3-5分钟(看消化效果而定),等大部分细胞呈流沙状滑落时,即加入培养基终止消化,一般以1:5左右的比例传代(视计数结果和看细胞长满的程度而定)。

        这种方法养比较顽强的细胞很好,既节省步骤,也降低了离心和较长时间消化对细胞带来的损伤,其实大家也可以试试用这种方法养别的细胞。

        主要做的还是养骨髓基质干细胞(MSC),做好准备工作:

        1、倒掉旧培养基;

        2、PBS洗两遍(如果能很容易就洗去杂质和悬浮的死细胞,洗一遍也可以);

        3、加0.05%胰酶/EDTA,(剂量同上),置培养箱3分钟(看效果而定),待大部分细胞呈流沙状滑落时,加入一定量培养基(为了计数和按比例传代操作方便)终止消化反应,轻吹匀几次,吸取细胞悬液至15ml离心管(留一滴计数),1400rpm/10分钟,弃悬液,加入一定量培养基,一般按1:3传,大概每5天左右传一次。

        以上操作均应注意无菌。

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