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离心技术

离心技术是将含有微小颗粒的悬浮液置于离心转子中,利用转子绕轴旋转产生的离心力将微小颗粒按密度或质量的差异将其分离的方法。 一、基本原理 1、重力场中的沉降 将含有微粒的悬浮液静置一段时间,液体中的微粒受重力作用,使得较重的微粒下沉与液体分开,即为”重力沉降”。微粒在介质中的沉降受到介质的浮力、介质阻力和扩散现象的影响。 2、相对离心力 离心技术是根据微小颗粒在离心力场中的行 ...

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离心实验技术基础

Centrifugation Theory Centrifugation is a process used to separate or concentrate materials suspended in a liquid medium. The theoretical basis of this technique is the effect of gravity on particles ...

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离心技术基础

The single most important advance in the use of centrifugal force to separate biologically important substances. was the coupling of mechanics optics and mathematics by T. Svedberg and J.W. Williams i ...

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ROS的检测方法

【求助】关于ROS的检测方法,谢谢 参与者:llemontree ROS的检测方法都有哪些呢?比如HVA assay,luminol-enhanced chemiluminescence 方法等等,都有什么区别呢?谢谢 参与者:lwjssry ROS的测定方法 细胞内ROS的检测可用DCF法 细胞外可用ROS试剂盒,步骤按说明书进行。 以下是其他信息和文献: key words: 关键词:二氯荧 ...

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启动子片断插入到了pgl3basic载体时未出现荧光的原因

【求助】启动子片断插入到了pgl3basic载体中,为什么没有检测到荧光? 参与者:smile1688 我把一个基因的启动子片断插入到了pgl3basic载体中,但是却没有测到荧光。阳性对照,即Pgl3 control检测到荧光。 推测: 1、启动子片断错误。 1000bp,已测序验证,在ATG前40bp,推测离转录起始位点还有200bp以上。 2、细胞的转录效率太低。 但是Pgl3 contro ...

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请问淋巴细胞分离液分离的淋巴细胞需要设门吗

【求助】急!请问淋巴细胞分离液分离的淋巴细胞需要设门吗? 参与者:二分之一幸福 分析T细胞亚型,通过淋巴细胞分离液分离的淋巴细胞,需要向白细胞那样设门吗?谢谢! 参与者:liu2050 淋巴细胞分离液分离出来的是单个核细胞而不仅仅是单纯的淋巴细胞,还包括nk等一些其他种类单个核细胞。你要分离T细胞亚型,肯定需要2色以上标记,一种是总t细胞的标记,另外一种才是你需要检测的细胞亚型的标记。用总T的标记 ...

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电泳技术简介

电泳法,是指带电荷的供试品(蛋白质、核苷酸等)在惰性支持介质(如纸、醋酸纤维素、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等)中,于电场的作用下,向其对应的电极方向按各自的速度进行泳动,使组分分离成狭窄的区带,用适宜的检测方法记录其电泳区带图谱或计算其百分含量的方法。 电泳技术的基本原理和分类 在电场中,推动带电质点运动的力(F)等于质点所带净电荷量(Q)与电场强度(E)的乘积 ...

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凝胶电泳

以淀粉胶、琼脂或琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等作为支持介质的区带电泳法称为凝胶电泳。其中聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE)普遍用于分离蛋白质及较小分子的核酸。琼脂糖凝胶孔径较大,对一般蛋白质不起分子筛作用,但适用于分离同工酶及其亚型,大分子核酸等应用较广,介绍如下: ⒈琼脂糖凝胶电泳的原理概述 琼脂糖是由琼脂 ...

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凝胶电泳操作注意事项

1.缓冲系统:在没有离子存在时,电导率最小,DNA不迁移,或迁移极慢,在高离子强度的缓冲液中,电导很高并产热,可能导致DNA变性,因此应注意缓冲液的使用是否正确。长时间高压电泳时,常更新缓冲液或在两槽间进行缓冲液的循环是可取的。 2.琼脂糖:不同厂家、不同批号的琼脂糖,其杂质含量不同,影响DNA的迁移及荧光背景的强度,应有选择地使用。 3.凝胶的制备:凝胶中所加缓冲液应与电泳槽中的相一致,溶解的凝 ...

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牙周膜成纤维细胞PDLC的传代

倒去培养基,先加入PBS1ml,再加入0.25%胰酶1ml,轻轻晃动培养瓶,使之分布均匀;约10秒。 将培养瓶迅速转至镜下观察,镜下见细胞触角变钝,细胞变圆,将瓶侧立回到无菌台内,到掉胰酶,加入2mlDMEM培养基(内涵20%胎牛血清),终止消化,弯管吹打成单细胞,可再在镜下观察,确定是否吹打完全。 按1:3或1:2传代,加入适量新鲜培养基后,1.5-2.0ml。放入CO2培养箱。 注意:时间宁短 ...

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原代胎儿肾小球系膜细胞培养

取引产胎儿肾,无菌操作,1小时内完成。2用生理盐水冲洗干净。 取肾皮质,用小外科剪剪成碎麽。依次研磨过80目,100目,200目筛网,不断用生理盐水冲洗,最后在200目筛网上收集肾小球, 先用0。4%的胶原酶四消化半小时,接种于50ML的培养瓶里,加含有20%小牛血清的DMEM培养基放二氧化碳培养箱培养。 三天后可在倒置镜下观察见有细胞贴壁生长。 一周后换液一次,以后约三到四天就能长满瓶底。 此时 ...

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小鼠成肌细胞C2C12和人横纹肌肉瘤A204细胞的消化传代

1) 细胞消化液的配制及存储:我采用的是0.25%Trypsin+0.05%EDTA的消化液,BUFFER采用的是D-Hank's液。配完后分装成4-5ml/tube,于-20度冰箱中储存。 2) 消化前的处理:当细胞生长至亚融和状态需要传代时,提前半小时将配好的消化液放在细胞培养孵箱中预热,同时将配好的高压无菌的D-Hank's液也进行预热。 3) 消化细胞:将预热的D-Hank's液洗细胞2次 ...

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3T3成纤维细胞传代

(1)准备大量的3T3细胞,每个安瓿瓶装1-1000000个细胞,然后冻存。使用的细胞不超过20代。 (2)将3T3细胞加入175cm2的培养瓶中,用含有10%小牛血清DMEM培养。案每平方厘米15000个细胞接种。2天后换液,每4-5天传代。 (3)通过60Gy X射线或Co饲养细胞灭活。被照射的3T3细胞在4度条件下可存放3-4天。 (4)在无照射源的条件下,用丝裂菌素C灭活饲养细胞。 (5) ...

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子宫内膜上皮传代

换液过程 50ml 培养瓶弃培养液,加入培养液3ml冲洗一次。 加入10ml培养液 传代 弃培养液 D-hank's 冲洗1次 0.5%胰蛋白酶和0.1%EDTA 2:1 比例1ml洗一次 6ml消化。 第一次传代是很难消化,需要在倒置显微镜下观察,有60%细胞脱壁时 吸出全部消化液立即加入含10%血清的培养液种植消化。 含有细胞的消化液离心800g 10min分离细胞,然后用10ml培养液打散细 ...

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GES(胃癌永生化细胞)传代

心得如下: 1、 GES长的非常快,而且比较大,呈成纤维细胞样,细胞长得越好,铺的越开。 2、传代一般1:3传,每3天需要再传。 2、永生化细胞,不要等细胞100%汇合再传代,多次这样细胞容易球形增加,还不容易洗掉。 3、用胰酶(0.25%)--EDTA(0.01%)混合消化液消化好些,一般1分钟左右呈球形,即可混悬细胞了。 4、培养液用10%小牛血清的DMEM或1640都可以。 步骤: 吸净培养 ...

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膀胱癌T24细胞传代

我养的是膀胱癌 T24细胞(贴壁的)。心得如下: 1、 T24长的非常快,传代一般1:5传,每4天需要再传。 2、虽然是永生化细胞,也一定不要等细胞100%汇合再传代,多次这样细胞状态不好,球形增加,还不容易洗掉。 3、要用胰酶(0.25%)--EDTA(0.01%)混合消化液消化好些,一般1分钟内呈球形,即可混悬细胞了。 4、培养液用10%小牛血清的DMEM或1640都可以。 步骤: 吸净培养液 ...

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我们实验室细胞传代的一般方法

我说说我们实验室传代的一般方法,这一方法较简单,不需要离心,而且消化后细胞很少聚集成团,具体步骤如下: 1、吸尽待传代细胞瓶内的培养液,按1:1 的比例加入适量0.25%胰酶和0.0 2%EDTA(一般100ml培养瓶各加2滴管消化(消化时不要晃动培养瓶,以免消化不完全而导致细胞成片脱落,从而导致细胞成团,无法吹散)。 2、消化致细胞变圆,细胞相互脱离接触但还未从瓶壁脱落时,吸尽胰酶和EDTA。 ...

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神经胶质细胞传代经验

1、倒掉培养液用D-HANKS洗两次 2、加入0.125%胰酶/0.02%EDTA(1:1),盖满瓶底为宜。 3、将培养瓶放置显微镜下进行观察,发现细胞间隙增大,突起回缩后竖起培养瓶,倒掉消化液。 4、用D-HANKS洗一次,此时动作要轻 5、加入完全培养液,轻轻吹打混匀,接种至培养瓶中。 注意: 1、0.125%胰酶/0.02%EDTA的PH值和温度重要,即PH值(7.5),温度 (37℃) 2 ...

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免疫比浊法检测糖化血红蛋白的应用评价

【摘 要】 【目的】探讨免疫比浊法检测糖化血红蛋白 (HbAlc) 的应用价值。 【方法】应用免疫透射比浊法和高效液相色谱法分别测定糖尿病者 (20 名) 及健康人 (20 名) 的 HbAlc水平,比较两种方法的相关性并进行不精密度分析。 【结果】两种检测方法的结果呈显著相关性 ( r = 0198,P < 0105),不精密度分析显示免疫比浊法的CV < 5 %。 【结论】运用免疫 ...

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BHK-21细胞传代

1、吸尽旧的培养液(因为我是养在培养皿) 2、用D-HANKs清洗一次 3、加入0.125%/0.02%EDTA的胰酶(盖满皿底即可)。肉眼观察即可,看见皿底有一层薄雾。 4、加入完全培养基,以终止胰酶作用。 5、轻轻反复吹打细胞。 6、吸出一部分加入新的培养皿中。 注意: 1、可以用MEM或DMEM 2、EDTA可使细胞分散 3、BHK-21生长迅速 ...

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