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倒去培养基，先加入PBS1ml，再加入0.25％胰酶1ml，轻轻晃动培养瓶，使之分布均匀；约10秒。 将培养瓶迅速转至镜下观察，镜下见细胞触角变钝，细胞变圆，将瓶侧立回到无菌台内，到掉胰酶，加入2mlDMEM培养基（内涵20%胎牛血清），终止消化，弯管吹打成单细胞，可再在镜下观察，确定是否吹打完全。 按1：3或1：2传代，加入适量新鲜培养基后，1.5-2.0ml。放入CO2培养箱。 注意：时间宁短 ...

取引产胎儿肾，无菌操作，1小时内完成。2用生理盐水冲洗干净。 取肾皮质，用小外科剪剪成碎麽。依次研磨过80目，100目，200目筛网，不断用生理盐水冲洗，最后在200目筛网上收集肾小球， 先用0。4%的胶原酶四消化半小时，接种于50ML的培养瓶里，加含有20%小牛血清的DMEM培养基放二氧化碳培养箱培养。 三天后可在倒置镜下观察见有细胞贴壁生长。 一周后换液一次，以后约三到四天就能长满瓶底。 此时 ...

1) 细胞消化液的配制及存储：我采用的是0.25%Trypsin+0.05%EDTA的消化液，BUFFER采用的是D-Hank's液。配完后分装成4-5ml/tube，于-20度冰箱中储存。 2) 消化前的处理：当细胞生长至亚融和状态需要传代时，提前半小时将配好的消化液放在细胞培养孵箱中预热，同时将配好的高压无菌的D-Hank's液也进行预热。 3) 消化细胞：将预热的D-Hank's液洗细胞2次 ...

（1）准备大量的3T3细胞，每个安瓿瓶装1－1000000个细胞，然后冻存。使用的细胞不超过20代。 （2）将3T3细胞加入175cm2的培养瓶中，用含有10％小牛血清DMEM培养。案每平方厘米15000个细胞接种。2天后换液，每4－5天传代。 （3）通过60Gy X射线或Co饲养细胞灭活。被照射的3T3细胞在4度条件下可存放3－4天。 （4）在无照射源的条件下，用丝裂菌素C灭活饲养细胞。 （5） ...

换液过程 50ml 培养瓶弃培养液，加入培养液3ml冲洗一次。 加入10ml培养液 传代 弃培养液 D-hank's 冲洗1次 0.5%胰蛋白酶和0.1%EDTA 2：1 比例1ml洗一次 6ml消化。 第一次传代是很难消化，需要在倒置显微镜下观察，有60%细胞脱壁时 吸出全部消化液立即加入含10%血清的培养液种植消化。 含有细胞的消化液离心800g 10min分离细胞，然后用10ml培养液打散细 ...

心得如下： 1、 GES长的非常快，而且比较大，呈成纤维细胞样，细胞长得越好，铺的越开。 2、传代一般1：3传，每3天需要再传。 2、永生化细胞，不要等细胞100%汇合再传代，多次这样细胞容易球形增加，还不容易洗掉。 3、用胰酶（0.25%）--EDTA（0.01%）混合消化液消化好些，一般1分钟左右呈球形，即可混悬细胞了。 4、培养液用10%小牛血清的DMEM或1640都可以。 步骤： 吸净培养 ...

我养的是膀胱癌 T24细胞（贴壁的）。心得如下： 1、 T24长的非常快，传代一般1：5传，每4天需要再传。 2、虽然是永生化细胞，也一定不要等细胞100%汇合再传代，多次这样细胞状态不好，球形增加，还不容易洗掉。 3、要用胰酶（0.25%）--EDTA（0.01%）混合消化液消化好些，一般1分钟内呈球形，即可混悬细胞了。 4、培养液用10%小牛血清的DMEM或1640都可以。 步骤： 吸净培养液 ...

我说说我们实验室传代的一般方法，这一方法较简单，不需要离心，而且消化后细胞很少聚集成团，具体步骤如下： 1、吸尽待传代细胞瓶内的培养液，按1：1 的比例加入适量0.25％胰酶和0.0 2％EDTA（一般100ml培养瓶各加2滴管消化（消化时不要晃动培养瓶，以免消化不完全而导致细胞成片脱落，从而导致细胞成团，无法吹散）。 2、消化致细胞变圆，细胞相互脱离接触但还未从瓶壁脱落时，吸尽胰酶和EDTA。 ...

1、倒掉培养液用D-HANKS洗两次 2、加入0.125％胰酶/0.02％EDTA（1：1），盖满瓶底为宜。 3、将培养瓶放置显微镜下进行观察，发现细胞间隙增大，突起回缩后竖起培养瓶，倒掉消化液。 4、用D-HANKS洗一次，此时动作要轻 5、加入完全培养液，轻轻吹打混匀，接种至培养瓶中。 注意： 1、0.125％胰酶/0.02％EDTA的PH值和温度重要，即PH值（7.5），温度 （37℃） 2 ...

【摘　要】　【目的】探讨免疫比浊法检测糖化血红蛋白 (HbAlc) 的应用价值。 【方法】应用免疫透射比浊法和高效液相色谱法分别测定糖尿病者 (20 名) 及健康人 (20 名) 的 HbAlc水平，比较两种方法的相关性并进行不精密度分析。 【结果】两种检测方法的结果呈显著相关性 ( r = 0198，P < 0105)，不精密度分析显示免疫比浊法的CV < 5 %。 【结论】运用免疫 ...

1、吸尽旧的培养液（因为我是养在培养皿) 2、用D-HANKs清洗一次 3、加入0.125%/0.02%EDTA的胰酶(盖满皿底即可)。肉眼观察即可，看见皿底有一层薄雾。 4、加入完全培养基，以终止胰酶作用。 5、轻轻反复吹打细胞。 6、吸出一部分加入新的培养皿中。 注意： 1、可以用MEM或DMEM 2、EDTA可使细胞分散 3、BHK-21生长迅速 ...

都是贴壁细胞，在消化传代过程中，步骤如下： 倒尽旧的培养液－＞用无血清的培养基清洗一两次－＞加入一定量的胰酶，置于37度培养箱中5--10分钟，使细胞悬浮－＞显微镜下观察，待细胞大部分变圆时，回到超静台－＞加入一定量的含血清的新培养液，以终止胰酶作用－＞反复吹打细胞－＞再置显微镜下观察，直到细胞全部悬浮起来－＞吸出一部分加入新的培养瓶中－＞最后再补充加入一定量新的培养液。 注意：　 1、吹细胞时尽 ...

大多数朋友说推荐培养液为DMEM加10%胎牛血清，1%谷氨酰胺，我们这里用1640加10%新生牛血清，效果也不错。DMEM不容易观察，有时候等DMEM黄了的时候，细胞已经严重缺乏养料，1640颜色变化比较明显，也比较符合细胞当时的情况。 细胞置于5%CO2、37度培养细胞生长较快，根据你留在瓶里细胞的数量，50％两天后传代一次。0.25%胰酶＋0.01％EDTA消化，该细胞容易抱团，我是一般先用胰 ...

传代步骤比较传统： 倒掉培养液－>PBS洗2遍－>胰酶0.25%消化－>倒掉胰酶－>加培养基－>用吸管吹打均匀－>分瓶－>放置37度，5%CO2孵箱。 我的体会是： 1、消化时间和实验环境温度也有很大关系，我们实验室条件比较差，不能维持恒温（不过我想大部分实验室目前也还是做不到的）。夏天的时候，消化特别快。但是到了冬天，就很慢，要用手捂老半天。 2、消化到 ...

我养过人类原代滑膜细胞，探讨传代经验：其实最好还是在细胞长满时、还没有接触性抑制之前传代为好。

将小鼠颅段神经管组织块（第6体节前）经0.75mg/ml胶原酶（152U/mg）换液消化3次，37℃20分钟孵育后，轻吹打获神经管，胶原酶通过冷培养基反复置换。 将神经管组织块置于经Fn预孵的75MM培养瓶中（0.25mg/ml纤粘连蛋白抽干后，以条件培养基洗涤备用），37℃培养30分钟后组织块贴壁，加DMEM/F12无血清条件培养基。48小时后去除组织块。2.5g／L胰蛋白酶常规消化传代。 无血 ...

SACC比较难消化，使用37度预热过的0.25%的胰酶一般消化5－8分钟即可，在看到细胞成片脱落后加入10％胎牛血清的培养液终止。 巴氏吸管吹打均匀，计数后传代。消化时一般不用EDTA，老板说对细胞损伤大，而且还要清洗几次，麻烦。只要消化下来，SACC很容易形成单细胞悬液。 ...

wish细胞是上皮细胞， 人羊膜细胞 ，培养基我用的是最常见的1640（10％小牛血清，加双抗）。 1、细胞长满培养瓶时既要传代。我用胰酶和edta的混合液消化。用D-Hank's液配制成0.25%的胰酶。edta的终浓度是0.02%。 2、使用前37度预热，每个25ml培养瓶加9滴的胰酶和edta混合液，消化液的量可根据自己培养瓶的大小而定，原则就是能够盖满瓶底。加入胰酶和edta混合液以后，为 ...

刚开始养SK-BR-3时，细胞状态不是很好，贴壁也不均匀，于是开始想办法，考虑是不是吹打的不够，或是传得过多，或是其它的什么，后来发现的确如此，细胞的生长状态与传代的方法有很密切的联系。 我的传代方法是： 以50平方厘米培养瓶为例，待细胞长满瓶底70％－80％ 1 、吸除或倒掉瓶内旧培养基。 2 、PBS 5ml加入培养瓶，轻轻晃动培养瓶，让PBS流遍细胞表面，倒掉。 3 、PBS 5ml加入培养 ...

RAW264.7因是单核巨噬细胞其生物学特性就是贴壁特别牢，普通的方法根本就不可能将它消化下来，这也是养这种细胞最头痛的问题。现将我的一点心得，简介如下： 消化液：0.5％胰酶、0.2％EDTA，实验前加温到37度 以50ml培养瓶为例： 1、细胞贴壁生长，长满瓶底80％时，弃去培养液，加D-HANKS 漂洗 两次； 2、 加入含胰酶和EDTA的消化液1－2ml消化37℃约2-5min，镜下可见细 ...